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PPARγ基因shRNA真核表达载体的构建及其干扰效果鉴定
1
作者 辛婧 沈亚非 +3 位作者 邓飞 谢亚争 张日华 刘云 《江苏预防医学》 CAS 2021年第3期255-258,共4页
目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果。方法选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并... 目的构建过氧化物酶体增殖物激活受体γ(PPARγ)基因RNA干扰的真核表达载体,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,并鉴定其干扰效果。方法选择设计2条针对小鼠PPARγ基因的干扰靶序列,构建真核表达载体PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,以PCR鉴定并进行序列分析。证实质粒构建成功后,转染小鼠3T3-L1前体脂肪细胞,荧光显微镜下观察绿色荧光蛋白(eGFP)的表达,计算转染效率;采用实时定量PCR法和Western印迹检测载体对PPARγ基因的表达干扰效果;采用油红染色观察PPARγ在脂肪细胞分化过程中对脂滴形成的作用。结果成功构建PPARγ干扰质粒PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,PCR和DNA测序证实序列与设计完全一致;荧光显微镜下观察到3T3-L1细胞绿色荧光蛋白的表达,证实重组质粒成功转入细胞,转染效率(92.67±1.53)%;实时荧光定量PCR和Western Blot印记试验均显示PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2转染的3T3-L1细胞PPARγ基因分别被特异性抑制;靶点1干扰效率[(78.2±2.1)%]高于靶点2[(55.8±4.3)%],差异有统计学意义(P<0.05),靶点1初步鉴定为有效靶点。油红染色显示PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2转染均可抑制3T3-L1脂肪细胞分化和脂滴聚集。结论成功构建了靶向干扰PPARγ基因的shRNA真核表达质粒PLKO.1-PPARγ-GFP-shRNA1/2,并筛选出有效抑制靶基因的表达质粒,初步验证PPARγ基因对脂肪细胞分化的作用,为进一步研究提供了有效的分子生物学工具。 展开更多
关键词 小鼠3T3-l1前体脂肪细胞 RNA干扰 PPARΓ基因
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双酚A对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化的影响 被引量：3
2
作者 冷银芝 李应配 +3 位作者 罗时猛 蒋建华 朱启星 沈彤 《安徽医科大学学报》 CAS 北大核心 2016年第9期1281-1285,共5页
目的探讨双酚A(BPA)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化及细胞因子分泌的影响。方法用不同剂量(10、100、1 000 nmol/L)BPA体外处理诱导分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞,在第2、4、8天时,用CCK-8检测细胞存活率,油红O染色检测细胞内脂质含量,... 目的探讨双酚A(BPA)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞分化及细胞因子分泌的影响。方法用不同剂量(10、100、1 000 nmol/L)BPA体外处理诱导分化过程中的小鼠3T3-L1前脂肪细胞,在第2、4、8天时,用CCK-8检测细胞存活率,油红O染色检测细胞内脂质含量,ELISA法测定上清液中脂联素和瘦素的含量,实时荧光定量PCR检测细胞内瘦素和脂联素mRNA表达水平。结果第2天时,1 000 nmol/L BPA组细胞存活率较对照组明显升高(P<0.05),第8天时,10、100和1 000 nmol/L BPA组细胞存活率较对照组均显著下降(P<0.05,P<0.01);油红O染色显示细胞内脂滴随BPA剂量和时间的增加且变大;第4天时,1 000 nmol/L BPA组瘦素含量和mRNA水平均增高(P<0.05),第8天时,100、1 000 nmol/L BPA组瘦素含量和mRNA水平均明显增加(P<0.01);第8天时,100、1 000 nmol/L BPA组脂联素含量和mRNA水平均下降(P<0.01)。结论 BPA促进了小鼠3T3-L1前脂肪细胞向脂肪细胞分化,增加细胞瘦素分泌,抑制细胞脂联素的分泌。 展开更多
关键词 双酚A 小鼠3T3-l1前脂肪细胞 分化 瘦素 脂联素
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羟基红花黄色素A对3T3-L1细胞增殖和分化的影响 被引量：2
3
作者 王林杰 王相清 +3 位作者 潘慧 李乃适 朱惠娟 龚凤英 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2013年第14期2866-2870,共5页
目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法采用MTT法、甘油三酯测定、RT-PCR和双萤光素酶报告基因检测等方法观察HYSA对3T3-L1细胞增殖和分化的影响及其可能的机制。结果 0.01 mg/L^10 mg/L HSYA在4 ... 目的研究羟基红花黄色素A(HSYA)对小鼠3T3-L1前脂肪细胞增殖和分化的影响。方法采用MTT法、甘油三酯测定、RT-PCR和双萤光素酶报告基因检测等方法观察HYSA对3T3-L1细胞增殖和分化的影响及其可能的机制。结果 0.01 mg/L^10 mg/L HSYA在4 h^96 h抑制3T3-L1细胞的增殖,120 h促进细胞增殖,并具有浓度依赖性。HSYA减少3T3-L1细胞分化过程中脂质和甘油三酯的含量,增加HSL mRNA的表达和启动子活性。结论HSYA对3T3-L1细胞增殖的影响具有双向性,并通过促进HSL启动子的活性,增加mRNA表达,抑制其分化。 展开更多
关键词 羟基红花黄色素A(HSYA) 小鼠3T3-l1前脂肪细胞 细胞增殖 细胞分化 激素敏感性脂肪酶(HSl)
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