野菊花提取物对小鼠白细胞免疫功能的影响 被引量：1

1

作者 刘汉儒 《西南农业大学学报（社会科学版）》 1996年第1期1-4,共4页

本实验用水醇萃取法制备野菊花提取物,并用其不同的浓度测定了对小鼠腹腔白细胞的体外培养存活率、随机移动和趋化运动、吞噬作用和吞噬后杀菌功能的影响,表明低浓度的野菊花提取物(0.1mg/mL或0.01mg/mL)具有显著的促进作用,而较高浓度... 本实验用水醇萃取法制备野菊花提取物,并用其不同的浓度测定了对小鼠腹腔白细胞的体外培养存活率、随机移动和趋化运动、吞噬作用和吞噬后杀菌功能的影响,表明低浓度的野菊花提取物(0.1mg/mL或0.01mg/mL)具有显著的促进作用,而较高浓度时(1mg/mL)显示较强的抑制作用;同时还探讨了野菊花制剂治疗奶牛乳房炎的药理机制。 展开更多

关键词 野菊花提取物 小鼠白细胞 存活率 趋化运动 吞噬作用

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白细胞介素-12抑制裸鼠肝癌Ang-2和血管内皮生长因子表达及其意义 被引量：10

2

作者 潘运龙 覃莉 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期439-441,共3页

目的　探讨白细胞介素 12抑制裸鼠肝癌中血管生成素 2 (Ang 2 )和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及其意义。方法　将小鼠白细胞介素 12基因转染小鼠肝癌H 2 2细胞后,接种到裸鼠肾包膜下,第11天取出肿瘤组织。通过逆转录 聚合酶链反应(R... 目的　探讨白细胞介素 12抑制裸鼠肝癌中血管生成素 2 (Ang 2 )和血管内皮生长因子(VEGF)基因表达及其意义。方法　将小鼠白细胞介素 12基因转染小鼠肝癌H 2 2细胞后,接种到裸鼠肾包膜下,第11天取出肿瘤组织。通过逆转录 聚合酶链反应(RT PCR)观察实验组和对照组瘤组织中Ang 2和VEGF基因在mRNA水平上的差异。结果　实验组Ang 2和VEGF基因的PCR产物条带亮度均弱于对照组(P <0 .0 5 ) ,实验组Ang 2 (0 .7878±0 .14 71)和VEGF(0 .8867±0 .192 4)基因的PCR产物条带辉度比值低于载体对照组(1.0 3 19±0 .15 74、1.1744±0 .1189)和空白对照组(1.0 3 61±0 .15 3 6、1.1874±0 .175 2 ,P <0 .0 5 )。结论　IL 12抑制Ang 2和VEGF基因在裸鼠肝癌组织中的表达。 展开更多

关键词 ANG-2 其意义 血管内皮生长因子(VEGF) 裸鼠 抑制 小鼠白细胞介素-12 逆转录-聚合酶链反应 VEGF基因 PCR产物 mRNA水平 基因表达及 血管生成素 H22细胞 IL-12 对照组 实验组 小鼠肝癌 基因转染 肾包膜下 肿瘤组织 PCR) 肝癌组织

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小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区的原核表达与纯化 被引量：7

3

作者 王丽丽 魏亚强 +4 位作者 蔡累 宋爱玲 王伟华 张英起 李志奎 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2010年第4期365-368,共4页

目的原核表达并纯化小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区(sIL-13Rα2)。方法将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pROEXHTa,构建重组表达质粒pROEXHTa/sIL-13Rα2,经双酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。薄层扫描分析目的蛋白... 目的原核表达并纯化小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区(sIL-13Rα2)。方法将sIL-13Rα2基因克隆入原核表达载体pROEXHTa,构建重组表达质粒pROEXHTa/sIL-13Rα2,经双酶切鉴定后,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达。薄层扫描分析目的蛋白的表达量,并对其进行表达形式分析及Westernblot鉴定。镍柱亲和层析纯化目的蛋白。结果重组表达质粒经双酶切鉴定证明构建正确。表达的sIL-13Rα2蛋白相对分子质量约为36200;诱导6h,重组蛋白的表达量最高,约占菌体总蛋白的45%;重组蛋白以包涵体形式存在,可与大鼠抗小鼠sIL-13Rυ2单克隆抗体发生特异性反应;纯化后纯度大于95%。结论已成功表达并纯化了sIL-13Rα2,为进一步探讨其治疗支气管哮喘奠定了基础。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-13受体α2胞外区 原核表达 纯化

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小鼠白介素18与白介素1β转化酶共表达载体的构建及真核表达 被引量：4

4

作者 徐玢 马小彤 +4 位作者 董成亚 石洋 林永敏 宋玉华 吴克复 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期177-181,共5页

为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,... 为了制备白介素18前体(proIL-18)和白介素1β转化酶(ICE)共表达肿瘤疫苗,从小鼠脾细胞克隆proIL-18和ICE基因,构建小鼠proIL-18和ICE共表达质粒(pIRES-proIL-18-ICE),经测序证实序列正确后,脂质体法转染小鼠淋巴细胞白血病细胞系L1210,筛选稳定表达细胞株。转染细胞RT-PCR及转染细胞培养上清IL-18ELISA检测结果表明,肿瘤细胞可以表达并分泌成熟的IL-18。培养上清的IL-18可显著诱导ConA刺激的小鼠脾细胞产生IFN-γ,表明其具有功能活性。生长曲线和细胞周期实验证实与未转染的肿瘤细胞相比,转染空载体pIRES、pIRES-proIL-18、pIRES-ICE、pIRES-proIL-18-ICE基因对肿瘤细胞生长增殖无明显影响。IL-18白血病瘤苗的成功制备表明,利用pIRES载体在同一肿瘤细胞中共表达的proIL-18和ICE能够完全模拟生理过程,在真核细胞内有效酶切,分泌出成熟并有功能活性的IL-18;构建的IL-18瘤苗为进一步评价其在小鼠体内的抗白血病效果奠定基础。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素18 真核表达载体pIRES L1210白血病细胞 肿瘤疫苗

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表达白细胞介素-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用

5

作者 刘勇 胡大荣 +4 位作者 谭晓华 范公忍 胡学玲 韩聚强 吴忆贫 《中国癌症杂志》 CAS CSCD 2004年第2期147-150,共4页

目的:探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法:构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12,ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达,淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性;分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒D... 目的:探讨瘤内注射mIL-12质粒DNA抗小鼠肝癌皮下移植瘤的作用。方法:构建真核表达质粒载体pDC511mIL-12,ELISA方法检测质粒载体在真核细胞中的表达,淋巴母细胞增殖法检测mIL-12的生物学活性;分别于小鼠肝癌H22皮下移植瘤内直接注射质粒DNA,观察各组小鼠存活时间、肿瘤体积变化及各组小鼠脾脏细胞毒T淋巴细胞(CTL)的活性。注射质粒DNA后1月进行瘤体组织病理学观察。结果:mIL-12基因治疗组与空载体对照组相比,肿瘤生长显著受抑制(F=4.10,P=0.03),小鼠存活期显著延长(X2=4.48,P=0.03),并且小鼠脾细胞CTL杀伤活性增强。质粒DNA瘤内注射1月后,pDC511mIL-12组肿瘤病灶炎性细胞浸润明显,病灶内肿瘤细胞广泛坏死。结论:瘤内注射mIL-12表达质粒DNA可抑制小鼠肝癌皮下移植瘤生长,能提高机体抗肿瘤免疫应答。 展开更多

关键词 小鼠肝细胞癌 小鼠白细胞介素-12 免疫基因治疗 疾病模型

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小鼠IL-4重组质粒的构建及目的蛋白的表达和纯化 被引量：2

6

作者 罗晓蕾 任潇潇 +4 位作者 黄浓郁 邱吉 李倩 周西坤 李炯 《四川大学学报（医学版）》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期579-583,共5页

目的构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定。方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得... 目的构建重组小鼠白细胞介素-4(rmIL-4)原核表达载体,在大肠杆菌BL21(DE3)中诱导表达,纯化目的蛋白并鉴定。方法将优化后的小鼠IL-4cDNA片段克隆到原核表达载体pET-32a(+)上,获得重组质粒pET32/rmIL-4,转入BL21(DE3)中经IPTG诱导表达得到包涵体。经复性处理后,依次用阴离子交换柱和分子筛纯化蛋白。对纯化得到的蛋白用Western blot检验免疫学特异性,用mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖实验和动物实验测定其生物学活性。结果经酶切和测序证实重组质粒pET32/rmIL-4构建成功。诱导得到的包涵体用3mol/L盐酸胍溶液洗涤后溶于加有β-巯基乙醇的7mol/L盐酸胍溶液中变性,在pH9.5的条件下梯度透析复性。纯化出的蛋白经Western blot鉴定,能与抗小鼠IL-4抗体特异性结合;经细胞和动物实验鉴定,rmIL-4蛋白具有生物学活性,能刺激mIL-4生长依赖性细胞株CTLL-2增殖,使小鼠体内细胞因子发生从TH1到TH2的漂移。结论成功制备了高纯度、具有生物学活性的小鼠IL-4,为进一步研究其生物学功能提供了条件。 展开更多

关键词 重组小鼠白细胞介素-4蛋白纯化生物学活性

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小鼠白细胞介素-18抗肝癌作用的初步研究 被引量：1

7

作者 胡书群 周虎 +2 位作者 裴冬生 陆梁 张光毅 《徐州医学院学报》 CAS 2005年第5期387-390,共4页

目的研究小鼠白细胞介素-18(mIL-18)对H22肝癌的作用。方法以1×105和1×106H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型。在接种H22细胞后的1、48、天,每天用10μg mIL-18腹腔注射荷瘤小鼠,连续注射5天;或者在接种... 目的研究小鼠白细胞介素-18(mIL-18)对H22肝癌的作用。方法以1×105和1×106H22肝癌细胞腹腔注射昆明小鼠构建小鼠H22肝癌腹水瘤模型。在接种H22细胞后的1、48、天,每天用10μg mIL-18腹腔注射荷瘤小鼠,连续注射5天;或者在接种后1天,分别用5μg、10μg和20μg不同剂量的mIL-18腹腔注射小鼠。mIL-18作用后存活的小鼠,再次腹腔注射1×105H22肝癌细胞。结果构建得到小鼠H22肝癌腹水瘤模型,在接种1×105H22肝癌细胞后1、4天注射mIL-18的小鼠比对照组小鼠的存活率显著升高(P<0.05),存活小鼠能抵抗再次接种的H22肝癌细胞的攻击。结论mIL-18对小鼠H22肝癌具有显著抑制作用,mIL-18作用后存活的小鼠具有对H22肝癌细胞的免疫记忆性。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-18 H22肝癌 免疫记忆

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小鼠白细胞介素-21基因重组腺病毒可控制慢性HBV感染 被引量：1

8

作者 高雪萍 周扬 +4 位作者 郑新春 易璇 唐利波 侯金林 李咏茵 《南方医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第11期1436-1441,共6页

目的观察小鼠白细胞介素-21基因重组腺病毒(Ad-GFP-mIL-21)在慢性HBV感染小鼠中的表达以及其对病毒清除和HBV特异性抗体产生的作用。方法 Ad-GFP-mIL-21体外感染HepG2.2.15细胞后分别采用ELISA和Western blot检测上清和细胞mIL-21的表达... 目的观察小鼠白细胞介素-21基因重组腺病毒(Ad-GFP-mIL-21)在慢性HBV感染小鼠中的表达以及其对病毒清除和HBV特异性抗体产生的作用。方法 Ad-GFP-mIL-21体外感染HepG2.2.15细胞后分别采用ELISA和Western blot检测上清和细胞mIL-21的表达;尾静脉注射rAAV8-1.3HBV至野生型C57BL/6小鼠体内建立HBV持续表达模型,12周后实验组尾静脉注射Ad-GFP-mIL-21,以注射空载GFP重组腺病毒或PBS为对照组,荧光显微镜观察Ad-GFP-mIL-21在小鼠体内各器官的表达情况,ELISA检测各组小鼠血清HBsAg、HBsAb、HBcAb和mIL-21的水平。结果 Ad-GFP-mIL21可在体外感染HepG2.2.15细胞,且上清mIL-21水平与重组载体的滴度和感染时间相关。注射Ad-GFP-mIL21至HBV持续表达小鼠后第4天观察到绿色荧光主要在肝细胞表达;与处理前相比,注射第4天血清mIL-21水平显著升高(P<0.05),而HBsAg滴度则明显下降;实验组和对照组小鼠在注射第13天血清HBsAb均为阴性;与对照组相比,实验组小鼠血清HBcAb水平显著升高(P<0.05)。结论 AdGFP-mIL-21在HBV持续感染小鼠体内可表达mIL-21,并能下调血清HBsAg滴度和促进HBcAb产生,提示其在体内具有控制慢性HBV感染的作用。 展开更多

关键词 乙型肝炎病毒 小鼠白细胞介素-21 重组腺病毒

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白细胞黏附抑制实验在核糖核酸药物免疫活力测定中的应用研究 被引量：1

9

作者 王灿 邵泓 陈钢 《中国药师》 CAS 2015年第11期1848-1850,共3页

目的:建立核糖核酸类药物免疫活力测定方法。方法:选用小鼠白细胞黏附抑制试验,对实验重要参数,如小鼠品系、药物作用浓度,黏附时间,缓冲液成分和细胞密度等进行探讨研究,初步建立了该类药物的免疫活力测定方法。并用该方法对核糖核酸... 目的:建立核糖核酸类药物免疫活力测定方法。方法:选用小鼠白细胞黏附抑制试验,对实验重要参数,如小鼠品系、药物作用浓度,黏附时间,缓冲液成分和细胞密度等进行探讨研究,初步建立了该类药物的免疫活力测定方法。并用该方法对核糖核酸Ⅰ、核糖核酸Ⅱ和核糖核酸Ⅲ各2批样品进行了免疫活力测定。结果:确定了适合该类产品免疫活力测定方法的实验参数:小鼠品系对实验结果无影响,药物作用浓度为10 mg·ml-1,黏附时间为2 h,缓冲液中必须含钙镁离子,细胞密度约为4×107个/ml。用该方法对该类产品进行免疫活力测定,3次重复实验,结果均合格,RSD均低于20%。结论:白细胞黏附抑制试验可作为评价核糖核酸类药物免疫活力的方法。 展开更多

关键词 核糖核酸Ⅰ 核糖核酸Ⅱ 核糖核酸Ⅲ 小鼠白细胞黏附抑制试验 免疫活力

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重组小鼠白细胞介素12(rmIL-12)的辐射保护作用和对骨髓造血功能的影响 被引量：1

10

作者 郭万军 王珊珊 +2 位作者 杨德宣 罗庆良 袁守军 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第7期488-493,共6页

目的重组小鼠白细胞介素12(rmIL-12)对γ-射线照射后小鼠存活状况、骨髓造血功能和体外小鼠骨髓间充质干细胞存活的影响。方法 60只小鼠按体质量随机分为照射对照组、阳性对照组和rmIL-12组(200 ng/只),每组20只,雌雄各半,用60Co射线照... 目的重组小鼠白细胞介素12(rmIL-12)对γ-射线照射后小鼠存活状况、骨髓造血功能和体外小鼠骨髓间充质干细胞存活的影响。方法 60只小鼠按体质量随机分为照射对照组、阳性对照组和rmIL-12组(200 ng/只),每组20只,雌雄各半,用60Co射线照射源,小鼠全身照射8.0 Gy用于存活率的实验研究;30只雌性小鼠,分为同样3组,全身4.0 Gy照射用于对造血功能影响的研究。均在照射前24 h和1 h各给药1次,照射后每天给药1次,连续7 d,给药途径为皮下注射。噻唑蓝(MTT)比色法观察在不同辐射剂量下rmIL-12对体外培养的骨髓间充质干细胞生存的影响。结果 rmIL-12可明显提高8.0 Gy60Coγ射线照射小鼠30 d存活率,使生存曲线(Kaplan Meier曲线)显著增高及右移;在60Coγ射线辐射剂量为4.0 Gy时,rmIL-12对小鼠外周血白细胞(WBC)、血小板(PLT)和网织红细胞(RET)计数增高和恢复提前,骨髓DNA含量也显著高于对照组;同时受试物终浓度在0.125～32 ng/ml范围内时,体外可观察到rmIL-12对60Coγ射线不同剂量辐射的小鼠骨髓间充质干细胞(MSCs)的生存有保护效应。结论 rmIL-12能够提高60Coγ射线辐射下小鼠的存活率以及促进造血功能的恢复,对体外培养的小鼠骨髓间充质干细胞的生存有保护作用。 展开更多

关键词 重组小鼠白细胞介素12 抗辐射作用 骨髓造血功能 间充质干细胞

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小鼠白细胞介素12研究新进展

11

作者 刘锰 郑珊珊 《中国实验动物学杂志》 1995年第4期242-245,共4页

小鼠白细胞介素１２研究新进展刘锰综述郑珊珊审阅（中国医学科学院基础医学研究所免疫学研究室，北京）白细胞介素１２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２，ＩＬ－１２），又称天然杀伤细胞刺激因子（ＮａｔｕｒａｌＫｉ－ｌｌｅｒＣｅｌｌ... 小鼠白细胞介素１２研究新进展刘锰综述郑珊珊审阅（中国医学科学院基础医学研究所免疫学研究室，北京）白细胞介素１２（Ｉｎｔｅｒｌｅｕｋｉｎ１２，ＩＬ－１２），又称天然杀伤细胞刺激因子（ＮａｔｕｒａｌＫｉ－ｌｌｅｒＣｅｌｌＳｔｉｍｕｌａｔｏｒｙＦａｃｔｏｒ... 展开更多

关键词 研究进展 分子生物学 小鼠白细胞介素12 生物学功能

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小鼠白细胞介素17A的克隆、表达及活性鉴定

12

作者 张薇 高红梅 +5 位作者 叶贤龙 于艺雪 刘铭瑶 王文飞 任桂萍 李德山 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期783-786,共4页

目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白。方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物... 目的:克隆小鼠白细胞介素17A(mIL-17A)基因,构建mIL-17A原核表达质粒在E.coil Rosetta(DE3)PlysS表达,得到有活性的mIL-17A蛋白。方法:提取人IL-1β免疫的小鼠胸腺总RNA,反转录成cDNA,以此为模板,根据GenBank报道的mIL-17A序列设计引物,进行巢式PCR,得到成熟mIL-17A的编码序列并构建到pMD18-T载体中,再亚克隆至原核表达载体pHisSUMO Express中,经DNA测序鉴定后转化Rosetta感受态细胞,IPTG诱导表达,Western blot鉴定。纯化后的蛋白处理3T3-L1前体脂肪细胞,real time PCR鉴定白细胞介素6(IL-6)的表达变化。结果:DNA测序证明所克隆基因序列与GenBank报道的完全一致。成功构建了pHisSUMO Express-mIL-17A原核表达质粒以包涵体形式表达了重组mIL-17A蛋白,且Western blot证实为目的蛋白。所得蛋白上调3T3-L1细胞表达IL-6。结论:获得具有生物活性的mIL-17A蛋白,为进一步研究其蛋白特性及其生物活性奠定基础。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素17 克隆 表达 包涵体 活性鉴定

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表达小鼠白细胞介素21的Sp2/0细胞体外对鼠肿瘤特异性淋巴细胞增殖及功能的影响

13

作者 吴昀 王净 +6 位作者 刘春生 赵枫姝 褚莉莉 胡卫华 文萍 何向峰 窦骏 《生物技术通讯》 CAS 2009年第1期31-34,共4页

目的:研究表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的Sp2/0细胞与用Sp2/0细胞预先免疫的小鼠淋巴细胞体外共培养,是否对预致敏淋巴细胞增殖及功能有影响。方法:获取灭活Sp2/0细胞免疫的小鼠淋巴细胞,在mIL-2存在的条件下,以mIL-21转染的Sp2/0细胞... 目的:研究表达小鼠白细胞介素21(mIL-21)的Sp2/0细胞与用Sp2/0细胞预先免疫的小鼠淋巴细胞体外共培养,是否对预致敏淋巴细胞增殖及功能有影响。方法:获取灭活Sp2/0细胞免疫的小鼠淋巴细胞,在mIL-2存在的条件下,以mIL-21转染的Sp2/0细胞为刺激细胞,用流式细胞术检测CFSE标记的淋巴细胞增殖和7-AAD标记的细胞毒活性;用ELISpot法确定分泌IFN-γ的淋巴细胞数量。结果:转染mIL-21的Sp2/0细胞对预致敏的淋巴细胞增殖有明显影响,活化的淋巴细胞对靶细胞的杀伤率(39.57%±4.72%)与对照组(23.18%±2.94%)相比有较大的提高(P<0.05),且分泌IFN-γ的细胞数量明显增加。活化增殖后的淋巴细胞回输至环磷酰胺预处理的小鼠,能延长小鼠的成瘤时间。结论:表达mIL-21的Sp2/0细胞可有效促进肿瘤抗原特异性淋巴细胞活化及增殖,并增强其对肿瘤细胞的杀伤功能。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素21 肿瘤特异性淋巴细胞 增殖 抗肿瘤作用

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重组小鼠白介素-2基因在真核细胞中的转染表达

14

作者 路晓辉 杜军 +3 位作者 曾军 李晓玲 徐珍霞 蔡绍晖 《广西医科大学学报》 CAS 北大核心 2006年第3期352-354,共3页

目的:在构建重组真核表达载体pIRESneo2/mIL-2的基础上,建立能够持续稳定表达mIL-2的哺乳类工程细胞。方法:运用分子克隆技术,将由RT-PCR获得的mIL-2cDNA片断插入真核表达质粒pIRESneo2构建成mIL-2重组表达载体pIRESneo2/mIL-2。通过脂... 目的:在构建重组真核表达载体pIRESneo2/mIL-2的基础上,建立能够持续稳定表达mIL-2的哺乳类工程细胞。方法:运用分子克隆技术,将由RT-PCR获得的mIL-2cDNA片断插入真核表达质粒pIRESneo2构建成mIL-2重组表达载体pIRESneo2/mIL-2。通过脂质体转染法将pIRESneo2/mIL-2导入C2C12细胞。转染后第30天,用Westernblots检测mIL-2表达情况。结果:经DNA测序证明mIL-2cDNA片断插入方向和碱基组成顺序均准确无误,Westernblots检测转染真核重组表达载体pIRESneo2/mIL-2的C2C12细胞系表达mIL-2。结论:利用pIRESneo2/mIL-2构建的真核表达载体在C2C12细胞系中能够持续稳定表达mIL-2。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-2 真核表达 基因转染

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携带小鼠白细胞介素-12 siRNA基因重组腺病毒载体的构建及其在树突状细胞中的表达

15

作者 罗建飞 胡炜焰 《微循环学杂志》 2006年第2期51-52,55,共3页

目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12si RNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础。方法:将IL-12p35si RNA和IL-12p40si RNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD ... 目的:构建载有白细胞介素-12干扰RNA(IL-12si RNA)基因的,能在树突状细胞(DC)表达的重组腺病毒载体,为免疫耐受提供基础。方法:将IL-12p35si RNA和IL-12p40si RNAcDNA克隆于腺病毒穿梭质粒pShuttle2,得到重组质粒,并与腺病毒骨架质粒BD Adeno-XTM体外连接后代共转化大肠杆菌DH5α菌株,重组腺病毒质粒经过293细胞的包装扩增及氯化铯(CsCl)纯化,生成带有IL-12p35和IL-12p40si RNA基因的重组腺病毒载体,感染DC细胞。结果:经形态学、病毒DNA酶切、聚合酶链反应(PCR)和逆转录(RT)等方法的鉴定,证实了载体构建的正确性;经测定,病毒滴度为2.5×1010efu/ml。结论:成功构建带有IL-12p35si RNA和IL-12p40si RNAcDNA的重组腺病毒载体,其所携带的载体能够转染小鼠DC并干扰其在DC中表达,为进一步的研究奠定了基础。 展开更多

关键词 基因重组腺病毒载体 小鼠白细胞介素-12 树突状细胞 siRNA TH1/TH2 转录后基因沉默 T细胞分化 细菌产物 异源二聚体 Cells

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结核杆菌抗原85A与小鼠白细胞介素21共表达DNA疫苗的构建及其免疫效应研究

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作者 唐权 窦骏 +3 位作者 赵枫姝 曹明刚 褚莉莉 潘猛 《生物技术通讯》 CAS 2007年第1期25-28,共4页

目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC... 目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC-mIL21;再从pIRES-Ag85A质粒中经PCR扩增出Ag85A基因,构建于pRSC-mIL21重组质粒上,成为共表达DNA疫苗pRSC-mIL21-Ag85A。结果:经酶切、基因测序证实,该疫苗构建正确并能成功表达目的基因。共表达DNA疫苗免疫小鼠后,CTL活性、特异性淋巴细胞增殖水平及小鼠血清特异性抗体均呈有意义的提高。结论:结核杆菌Ag85A与mIL21共表达DNA疫苗能诱导小鼠免疫反应,为进一步研究DNA疫苗抗结核杆菌攻击的免疫防护效应奠定了基础。 展开更多

关键词 结核杆菌 抗原85A 小鼠白细胞介素21 DNA疫苗

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重组小鼠白细胞介素-27融合蛋白多克隆抗体的制备及鉴定

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作者 路晓红 付玉荣 伊正君 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期185-190,共6页

目的:制备重组小鼠白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性。方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到... 目的:制备重组小鼠白细胞介素-27(interleukin-27,IL-27)融合蛋白的多克隆抗体并鉴定其活性。方法:用反转录PCR从小鼠脾细胞扩增出EB病毒诱导基因3(EBI3)和p28成熟肽基因片段,采用重叠延伸PCR用(Gly4Ser)3接头将2个片段进行连接,将得到的小鼠IL-27单链融合基因片段克隆于p ET-32a(+)载体。阳性重组质粒转化大肠杆菌BL21(DE3),异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导融合蛋白表达,利用SDS-PAGE与Western blot鉴定目的蛋白的表达。以纯化的IL-27融合蛋白免疫新西兰大白兔,制备兔抗小鼠IL-27融合蛋白的多克隆抗体,利用Western blot和ELISA进行特异性及效价分析。结果:从小鼠脾细胞总RNA中扩增得到IL-27单链融合基因经测序与预期序列一致;在大肠杆菌BL21(DE3)中经IPTG诱导,SDS-PAGE显示表达出的融合蛋白相对分子质量(molecular weight,Mr)约67 000;Western blot结果表明该融合蛋白能与抗6×His的单克隆抗体发生反应;该蛋白免疫新西兰大白兔后获得抗血清,Western blot结果显示该血清可以特异性地与IL-27融合蛋白结合,ELISA测定该多克隆抗体的效价可以达到1∶3 200。结论:在大肠杆菌中成功表达出小鼠IL-27融合蛋白,并制备出效价较高、特异性较好的兔抗小鼠IL-27多克隆抗体。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-27 重叠延伸PCR 融合蛋白 原核表达 多克隆抗体

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小鼠白细胞介素21原核表达载体的构建及活性鉴定

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作者 褚莉莉 窦骏 +1 位作者 赵枫姝 胡正 《中国组织工程研究与临床康复》 CAS CSCD 北大核心 2007年第50期10113-10116,共4页

目的:白细胞介素21是近年发现的由T细胞分泌的细胞因子,具有广泛的免疫调节作用和抗肿瘤活性。为进一步观察其体内外免疫作用,拟构建小鼠白细胞介素21(mIL-21)原核表达载体,并对其表达的活性进行鉴定。方法:实验于2006-03/2007-05在南... 目的:白细胞介素21是近年发现的由T细胞分泌的细胞因子,具有广泛的免疫调节作用和抗肿瘤活性。为进一步观察其体内外免疫作用,拟构建小鼠白细胞介素21(mIL-21)原核表达载体,并对其表达的活性进行鉴定。方法:实验于2006-03/2007-05在南京医科大学附属南京儿童医院儿科研究所和东南大学基础医学院病原生物学与免疫学系完成。实验材料:实验中所用BALB/c小鼠由扬州大学比较医学中心提供,六七周龄,雌雄兼备,实验过程中对动物处置符合动物伦理学标准。pcDNA3.1/mIL-21质粒由东南大学基础医学院免疫学实验室提供、实验方法:以pcDNA3.1/mIL-21质粒为模板,PCR获得长度为369 bp的mIL-21基因片段。将其定向克隆至pET-28a(+)质粒中,采用PCR酶切和测序等方法对重组质粒进行鉴定。并对重组蛋白进行IPTG诱导表达、Western blot及体外生物学活性检测。结果:构建了重组原核表达载体pET-28a(+)/mIL-21,经鉴定后证实重组质粒构建正确。SDS-PAGE显示含重组质粒的诱导菌在M16 000位置出现一蛋白条带。Western blot结果显示该蛋白具有良好的免疫原性。体外生物学功能检测显示该重组蛋白能够增强小鼠脾细胞中的NK细胞杀伤活性。结论:成功构建了重组原核表达载体pET-28a(+)/mIL-21,表达的mIL-21具有良好的免疫原性。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素21 原核表达 NK活性

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小鼠白细胞介素-1cDNA的克隆及逆转录病毒载体的构建

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作者 刘琼 李炳 《实用临床医学（江西）》 CAS 2005年第7期20-22,共3页

目的克隆小鼠白细胞介素1cDNA(IL1cDNA),构建小鼠IL1cDNA逆转录病毒载体。方法利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),从小鼠胸腺细胞中扩增出小鼠IL1cDNA,克隆到测序载体pBluscript中,测序后,再亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。结果RTPCR扩增... 目的克隆小鼠白细胞介素1cDNA(IL1cDNA),构建小鼠IL1cDNA逆转录病毒载体。方法利用逆转录聚合酶链反应(RTPCR),从小鼠胸腺细胞中扩增出小鼠IL1cDNA,克隆到测序载体pBluscript中,测序后,再亚克隆到逆转录病毒载体pLNCX中。结果RTPCR扩增出约518bp片段,经酶切鉴定显示小鼠IL1cDNA逆转录病毒载体(IL1pLNCX)构建成功。结论小鼠IL1cDNA与已发表的其他种小鼠的序列相同,IL1cDNA可能无种间差异。为进一步研究IL1在中枢神经系统病理状态下的作用机制提供了有利的研究工具。 展开更多

关键词 小鼠白细胞介素-1 克隆 逆转录病毒载体 动物 实验

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