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猪传染性胃肠炎病毒S基因抗原位点片段的真核表达 被引量：1
1
作者 吕宁 彭树英 张涌 《中国动物检疫》 CAS 北大核心 2007年第4期26-28,共3页
为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺... 为探讨利用转基因动物乳腺生物反应器生产基因疫苗的可行性,构建了以奶牛β-酪蛋白启动子为调控序列,增强型绿色荧光蛋白为报告基因的猪传染性胃肠炎病毒(TGEV)S基因抗原位点区乳腺表达载体pEGBS。通过脂质体介导方法将其转染小鼠乳腺癌细胞EMT6,在倒置荧光显微镜下可观察到明亮的绿色荧光分布于阳性细胞,并且RT-PCR检测结果显示,RT-PCR扩增产物与目的基因片段大小相符,证明其确实源于重组质粒转录后的mRNA。 展开更多
关键词 猪传染性胃肠炎病毒 S基因 乳腺表达载体 小鼠乳腺癌细胞
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脱氢脱甲基斑蝥酸银配聚物体内外抗肿瘤活性研究
2
作者 李森朋 谭学杰 +1 位作者 赵云雪 张岫美 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期1774-1775,共2页
金属配合物具有不同药理活性，用于多种疾病的治疗。铂类是乳腺癌化疗方案中的常用药物。然而，铂类药物的毒副反应和癌细胞耐药是临床应用的主要障碍，因此，亟需研发新型抗癌药物。
关键词 脱氢脱甲基斑蝥酸银配聚物 乳腺癌 小鼠乳腺癌细胞4T1 谷胱甘肽 活性氧 抗肿瘤活性
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紫苏子油纳米乳诱导小鼠乳腺癌细胞EMT-6凋亡试验 被引量：3
3
作者 吴旭锦 朱小甫 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第11期1522-1525,共4页
采用滴定法制备紫苏子油纳米乳,用激光粒度测定仪分析其粒径,并进行其对体外培养的小鼠乳腺癌细胞EMT-6的凋亡诱导试验。结果显示,制备的紫苏子油纳米乳外观澄明,平均粒径为（50.3±1.1）nm。与紫苏子油软胶囊相比,质量浓度为100~80... 采用滴定法制备紫苏子油纳米乳,用激光粒度测定仪分析其粒径,并进行其对体外培养的小鼠乳腺癌细胞EMT-6的凋亡诱导试验。结果显示,制备的紫苏子油纳米乳外观澄明,平均粒径为（50.3±1.1）nm。与紫苏子油软胶囊相比,质量浓度为100~800 mg/L时的紫苏子油纳米乳较紫苏子油软胶囊对EMT-6细胞的诱导凋亡作用均强,差异显著（P〈0.05）。透射电镜下,EMT-6细胞染色质边集,胞质内出现空泡,形成凋亡小体。800 mg/L剂量紫苏子油纳米乳处理EMT-6细胞48 h后,凝胶电泳可见明显的＂阶梯状＂DNA条带,为180~200 bp整数倍递增分布,表明紫苏子油纳米乳具有明显的诱导EMT-6细胞凋亡的作用。 展开更多
关键词 紫苏子油 纳米乳 凋亡 小鼠乳腺癌细胞EMT-6
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嗜热菌β-糖苷酶基因乳腺特异性表达载体鉴定 被引量：1
4
作者 杜威 刘羿羿 +4 位作者 王申元 张东 白宏伟 王凌云 周欢敏 《内蒙古农业大学学报（自然科学版）》 CAS 北大核心 2013年第5期83-86,共4页
本研究目的在于对实验室优化构建的嗜热菌β-糖苷酶基因乳腺特异性表达载体PLOX-LacS的功能进行鉴定,检测目的基因能否正常表达。实验通过脂质体介导方法将载体质粒转染小鼠的乳腺癌细胞,筛选获得的阳性细胞通过PCR和RT-PCR的方法进行... 本研究目的在于对实验室优化构建的嗜热菌β-糖苷酶基因乳腺特异性表达载体PLOX-LacS的功能进行鉴定,检测目的基因能否正常表达。实验通过脂质体介导方法将载体质粒转染小鼠的乳腺癌细胞,筛选获得的阳性细胞通过PCR和RT-PCR的方法进行嗜热菌β-糖苷酶基因的整合检测和表达检测。基因整合PCR鉴定结果表明小鼠乳腺癌细胞基因组中整合有嗜热菌糖苷酶基因,目的片段大小为1203bp;RT-PCR表达鉴定结果显示,目的片段大小与预期相同,说明诱导后的小鼠乳腺癌细胞表达了完整的嗜热菌β-糖苷酶基因。实验表明该载体能够使目的基因整合在乳腺细胞基因组中并特异性表达。为后期生产转基因奶牛提供实验材料。 展开更多
关键词 乳腺特异性表达载体 嗜热菌β-糖苷酶 小鼠乳腺癌细胞 表达鉴定
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IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制研究 被引量：10
5
作者 杨丽娟 赵莎 +2 位作者 张海谱 姚智燕 单保恩 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第9期764-769,775,共7页
目的研究IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法建立稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠乳腺癌细胞(4T1/IL-17)及相应的对照细胞(4T1/pcDNA3.1、4T1),MTS法检测3种细胞的体外增殖情况;流式法检测3种... 目的研究IL-17体内外抗肿瘤作用及其机制,为IL-17基因疫苗进入临床提供实验依据。方法建立稳定转染小鼠IL-17全长基因的小鼠乳腺癌细胞(4T1/IL-17)及相应的对照细胞(4T1/pcDNA3.1、4T1),MTS法检测3种细胞的体外增殖情况;流式法检测3种细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达的变化及3种细胞的凋亡情况。建立荷瘤动物模型,观察3种细胞移植瘤在小鼠体内成瘤性、生长情况及小鼠生存期的变化。接种肿瘤细胞6周后分别检测3组小鼠脾细胞CTL杀伤活性、脾细胞增殖情况。用ELISA法检测小鼠脾细胞经刺激后产生IFN-γ、IL-12的情况;流式细胞技术检测4T1/IL-17细胞接种于小鼠体内的细胞凋亡情况及肿瘤组织细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1等分子表达的变化。结果转染IL-17基因后在体外对4T1/IL-17、4T1/pcDNA3.1和4T1细胞的增殖;MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达;细胞凋亡无影响。将4T1/IL-17细胞接种小鼠体内后,荷瘤小鼠的肿瘤生长速度、体积均明显小于4T1/pcDNA3.1细胞组及4T1细胞组,生存时间也明显延长(P<0.05);肿瘤细胞凋亡率明显增高(P<0.05);细胞表面MHCI、MHCⅡ、LFA-1分子表达水平显著性增高(P<0.01);CTL杀伤活性及对ConA刺激的细胞增殖反应性均明显升高(P<0.01);可产生高水平的IFN-γ、IL-12,有显著性差异(P<0.01)。结论 IL-17在体外未显示抗肿瘤作用,IL-17在小鼠体内具有明显的抗肿瘤作用,其抗肿瘤作用与促进肿瘤细胞细胞凋亡及增强机体免疫应答有关。 展开更多
关键词 IL-17 小鼠乳腺癌细胞株4T1 基因转染 抗肿瘤作用
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三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移的比较 被引量：3
6
作者 李小颖 马元武 张连峰 《中国比较医学杂志》 CAS 2013年第4期1-4,I0001-I0002,共6页
目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶(luciferase,Luc)作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418... 目的采用活体成像技术比较三株荧光素酶标记的小鼠乳腺癌细胞在小鼠体内生长及转移情况,为研究肿瘤转移提供理想的动物模型以及活体分析方法。方法以荧光素酶(luciferase,Luc)作为报告基因导入小鼠乳腺癌细胞4T1、66c14和4TO7中,经G418筛选获得稳定表达荧光素酶的细胞克隆并扩大培养。标记细胞稀释成1×107cells/mL,取0.1 mL进行乳腺原位及尾静脉接种BALB/c小鼠,制作小鼠乳腺原位和尾静脉移植瘤模型,比较三株细胞在小鼠体内生长及转移情况。结果获得稳定表达荧光素酶基因的细胞克隆,将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠乳腺原位接种后7 d,均有肿瘤生长,接种后28 d,4T1细胞乳腺原位移植瘤最大,66c14细胞瘤体次之,4TO7细胞瘤体最小;接种后35 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小较一致,但4T1和66c14原位移植瘤均发生转移,其中4T1细胞较66c14细胞转移严重,而4TO7细胞未见转移;接种后42 d,三株细胞乳腺原位移植瘤大小无明显差别,而4T1和66c14细胞随天数的增加,移植瘤转移程度逐渐严重,4T1较66c14细胞转移更严重,呈广泛性转移,4TO7细胞仍未见转移。将Luc标记的4T1、66c14、4TO7细胞对BALB/c小鼠尾静脉接种后7 d,小动物活体成像发现小鼠肺部均能检测到荧光,其中4T1细胞接种的小鼠肺部荧光信号最强,且小鼠陆续死亡;4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号次之;66c14细胞接种小鼠肺部荧光信号最弱。尾静脉接种后14 d,4TO7和66c14细胞随着观察天数的增加,转移程度逐渐严重,4TO7细胞接种小鼠肺部荧光信号较66c14细胞强且小鼠陆续死亡。结论乳腺原位自发转移模型较尾静脉转移模型更真实反应了肿瘤细胞在体的转移特性,且能完整地呈现肿瘤转移的全过程,可作为研究肿瘤转移的最理想模型。 展开更多
关键词 4T1小鼠乳腺癌细胞株 4TO7小鼠乳腺癌细胞株 66c14小鼠乳腺癌细胞株 荧光素酶 乳腺癌肿瘤模型
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