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HIF-2α基因下调后的诱导多能干细胞移植对大鼠脑缺血损伤治疗作用的影响 被引量：2
1
作者 余学问 徐华 +7 位作者 黄忠华 李振国 闵琴琴 梁莹莹 徐洲稳 石红琴 邵牧民 王家传 《器官移植》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期417-423,共7页
目的探讨低氧诱导因子(HIF)-2α基因下调后的诱导多能干细胞(iPSCs)移植对大鼠脑缺血损伤治疗作用的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):iPSCs治疗组、iPSCs+siHIF-2α组,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。所有大鼠均采用大脑中动... 目的探讨低氧诱导因子(HIF)-2α基因下调后的诱导多能干细胞(iPSCs)移植对大鼠脑缺血损伤治疗作用的影响。方法 24只雄性SD大鼠随机分为3组(每组8只):iPSCs治疗组、iPSCs+siHIF-2α组,磷酸盐缓冲液(PBS)对照组。所有大鼠均采用大脑中动脉栓塞法制作脑缺血模型,栓塞90 min后进行再灌注。再灌注后3 d进行i PSCs移植、i PSCs+siHIF-2α移植或PBS注射。在移植之前及之后的第2、4周,行神经行为学评价并采用小动物正电子发射体层仪(micro-PET)扫描测定18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG)的摄取值。移植后第4周,处死大鼠行免疫荧光检测神经细胞标志物。结果在干细胞移植后第2、4周,i PSCs治疗组的神经功能评分均明显低于PBS对照组(均为P<0.05),而i PSCs+siHIF-2α组的神经功能评分在这两个时间点均高于i PSCs治疗组(均为P<0.05)。在干细胞移植后的第2、4周,与PBS对照组比较,i PSCs治疗组和i PSC+siHIF-2α组脑缺血大鼠脑部的糖代谢水平(损伤侧/正常侧)明显增加(均为P<0.001)。干细胞移植后第2周,i PSCs治疗组大鼠脑缺血区糖代谢水平明显高于iPSCs+siHIF-2α组(P<0.001)。此后iPSCs+siHIF-2α组大鼠脑缺血区糖代谢水平持续上升,至干细胞移植后第4周,与iPSCs治疗组较为接近,但仍低于iPSCs治疗组(P=0.025)。免疫荧光结果提示移植的干细胞存活并迁移至梗死区周边,并且大部分的移植干细胞均表达了神经细胞标志物。结论i PSCs移植对大鼠脑缺血损伤有明显的治疗作用,HIF-2α基因下调对iPSCs的治疗作用有一定的影响。 展开更多
关键词 脑缺血 诱导多功能干细胞 干细胞移植 低氧诱导因子-2α 小动物正电子发射体层仪(micro-PET) 18F-氟代脱氧葡萄糖(18F-FDG) 糖代谢 小干扰核糖核酸(sirna)
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三种启动子-shRNA表达框的制备及其在筛选有效SiRNA中的应用
2
作者 倪勤 刘克洲 +2 位作者 羊正纲 姚航平 陈智 《浙江大学学报（工学版）》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第7期1086-1090,共5页
为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子... 为能快速经济地获取小干扰核糖核酸(smallinterferingRNAsiRNA),设计采用特异性延伸引物和上游、下游两条通用引物,通过重叠延伸一步聚合酶链反应(PCR)法一次性快速、简捷地制备包含U6+1、H1或tRNAVal在内的三种人小RNA多聚酶III启动子-小发夹状RNA(shRNA)表达框.用该方法制备的增强型绿色荧光蛋白(EGFP)特异性三种启动子-shRNA表达框在转染HepG2细胞后有效地抑制了EGFP转基因表达,其中以tRNAVal-shRNA表达框抑制效果最显著,且未检测到干扰素应答基因2'5'OASmRNA的表达,表明该表达框可被有效转染并启动产生特异基因的RNA干扰效应,进而用于快速筛选最佳siRNA位点及其最适搭配启动子. 展开更多
关键词 小干扰核糖核酸(sirna) 核糖核酸多聚酶Ⅲ启动子 筛选 增强型绿色荧光蛋白(EGFP)
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