期刊文献+
任意字段
题名或关键词
题名
关键词
文摘
作者
第一作者
机构
刊名
分类号
参考文献
作者简介
基金资助
栏目信息
共找到3篇文章
< 1 >
每页显示 20 50 100
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
显示方式：
O型口蹄疫病毒衣壳蛋白VP1的可溶表达及抗原活性鉴定
1
作者 王闰年 张纯 +5 位作者 吴佳奇 张耀 张宇翔 张路瑶 余蓉 刘永东 《过程工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第3期472-479,共8页
口蹄疫(Foot-and-mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、高度传染性疾病,一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段,但传统灭活疫苗存... 口蹄疫(Foot-and-mouth Disease,FMD)是由口蹄疫病毒(Foot-and-mouth Disease Virus,FMDV)引起的急性、高度传染性疾病,一旦大规模爆发会给畜牧业造成巨大的经济损失。接种灭活病毒疫苗是目前防控口蹄疫的最有效手段,但传统灭活疫苗存在病毒逃逸、生产成本高等诸多局限。重组亚单位蛋白疫苗免疫原性好且安全性高,是发展新型口蹄疫疫苗的重要方向。口蹄疫病毒结构蛋白VP1因含主要抗原表位,而成为口蹄疫亚单位疫苗及诊断试剂的开发热点。与真核系统相比,原核表达系统生产周期短、易于放大生产、成本低廉,更适于动物疫苗的开发,但VP1采用原核系统表达会形成无活性的不溶包涵体。本工作中首次同时融合小分子泛素相关修饰物(Small Ubiquitin-related Modifier,SUMO)和RNA作用结构域(RNA-interacting Domain,RID)两种助溶标签来实现FMDV VP1(O型/MYA/98)在原核系统中的高效可溶表达。首先采用PCR(聚合酶链反应)重叠技术,以p ET-28a(+)为载体构建了RID-SUMO-VP1重组质粒,将重组质粒转化至E.coli BL21(DE3),在18℃下通过1 mmol/L IPTG(异丙基-β-D-硫代半乳糖苷)诱导4 h后,融合蛋白RID-SUMO-VP1高效表达,可溶表达比例达79%,而融合SUMO或RID单一标签的VP1仍主要表达为不溶的包涵体。然后采用硫酸铵两步沉淀法对工程菌的破碎上清进行纯化,得到纯度为93%的RID-SUMO-VP1,酶联免疫吸附测定(ELISA)实验表明其能够与O型FMDV阳性小鼠血清反应。研究结果表明,采用RID及SUMO双标签融合策略能极大提高VP1在原核系统中的可溶表达效率,且表达的VP1具备良好的抗原性,这为开发新型FMDV免疫诊断试剂和安全高效的亚单位疫苗奠定了良好基础。 展开更多
关键词 O型口蹄疫病毒 结构蛋白VP1 小分子泛素相关修饰物(sumo) RNA作用结构域(RID) 可溶表达 免疫反应
原文传递
SUMO介导截短型人HGF制备及抗肝纤维化作用
2
作者 王小花 李玉婷 +2 位作者 董艳 刘亚威 刘海峰 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2018年第11期1532-1536,共5页
目的研究截短型人肝细胞生长因子突变体(tvNK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2纤维化的影响。方法把经PCR和双酶切的小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)和tvNK1的融合基因SUMO-tvNK1插入原核表达载体pET28a,诱导表达和Ni2+... 目的研究截短型人肝细胞生长因子突变体(tvNK1)对转化生长因子β1(TGF-β1)诱导人肝星状细胞LX-2纤维化的影响。方法把经PCR和双酶切的小分子泛素相关修饰蛋白(SUMO)和tvNK1的融合基因SUMO-tvNK1插入原核表达载体pET28a,诱导表达和Ni2+亲和层析纯化SUMO-tvNK1;进一步经SUMO蛋白酶Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,MTT法观察其对TGF-β1诱导LX-2纤维化细胞增殖的影响,qPCR及蛋白印迹(WB)检测其对I型胶原蛋白(col1α1)和α–平滑肌球蛋白(α-SMA)蛋白表达的影响。结果宿主菌Rosetta/pET28a-SUMO-tvNK1在37℃经1 mmol/L IPTG诱导5 h获得SUMO-tvNK1的可溶性表达,将超声破碎后上清液经Ni2+亲和层析成功获得SUMO-tvNK1,进一步经Ulp1水解和Ni2+亲和层析纯化tvNK1,SDS-PAGE鉴定其分子量约为22.0 kDa,MTT显示20和40 ng/mL的tvNK1能明显抑制TGF-β1活化的人肝星状细胞LX-2增殖,qPCR及WB显示20和40 ng/mL的tvNK1能显著抑制活化的LX-2细胞中Col1α1和α-SMA在m RNA和蛋白水平表达。结论 SUMO蛋白可用于制备tvNK1,其能抑制TGF-β1活化的LX-2细胞增殖并具有抗纤维化作用,为进一步体内外功能研究打下基础。 展开更多
关键词 截短型人肝细胞生长因子 小分子泛素相关修饰蛋白(sumo) 转化生长因子β1(TGF-β1) 肝星状细胞
原文传递
新型重组Ulp1的制备工艺研究
3
作者 徐海悦 吴勇 +3 位作者 李乐乐 黄宗庆 化浩举 冯军 《中国医药工业杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第10期1432-1438,共7页
类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶,在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用。Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战。为克服这些问题,本研究... 类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1)是从融合蛋白中移除小分子泛素相关修饰物蛋白(SUMO)标签工艺中的重要工具蛋白酶,在重组多肽和蛋白生产制备中具有广泛应用。Ulp1蛋白易聚集的特性给下游分离纯化工艺带来了诸多挑战。为克服这些问题,本研究设计并重组表达制备了一种S13-Ulp1融合蛋白,以提高Ulp1酶的溶解度,减少聚集,同时降低蛋白等电点,便于采用阴离子交换色谱纯化。通过对发酵、澄清等步骤的工艺参数进行优化,建立了一条发酵表达产量高、纯化工艺简便的S13-Ulp1融合蛋白制备工艺。优化后发酵产量达到了2.34g/L,下游分离纯化总收率为64%,制得的S13-Ulp1蛋白的SDS-PAGE纯度为95%。经酶切试验验证,S13-Ulp1融合蛋白具有与Ulp1相同的特异性,可高效地移除SUMO标签,获得目的多肽。 展开更多
关键词 小分子泛素相关修饰物蛋白(sumo)蛋白酶:类泛素特异性蛋白酶1(Ulp1) 重组 表达 纯化 离子交换色谱
原文传递
已选择0条
导出题录 引用分析
参考文献
引证文献
 统计分析
检索结果
已选文献
上一页 1 下一页 到第 页
使用帮助 返回顶部