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马铃薯密码子用法分析及其在t-PA基因密码子改造上的应用 被引量:10
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作者 柏锡 徐建震 +3 位作者 李琳 郭政 李杰 朱延明 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期75-83,共9页
采用bioperl 1.0工具在红旗LINUX系统下自编了密码子分析软件;通过对马铃薯98个蛋白质编码基因序列(codonDNAsequence)的分析,计算出了马铃薯的密码子用法,并确定出了马铃薯的4个高表达优越密码子;依据马铃薯密码子用法和高表达优越密... 采用bioperl 1.0工具在红旗LINUX系统下自编了密码子分析软件;通过对马铃薯98个蛋白质编码基因序列(codonDNAsequence)的分析,计算出了马铃薯的密码子用法,并确定出了马铃薯的4个高表达优越密码子;依据马铃薯密码子用法和高表达优越密码子分析结果,对t PA基因序列进行了密码子的改造,得到了具有马铃薯密码子使用特点的t PA基因序列,从而为以马铃薯为生物反应器高效生产t PA奠定了分子基础。 展开更多
关键词 马铃薯 密码子用法 优越密码子 密码子改造
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猪α干扰素基因经密码子改造在毕赤酵母菌中的高效分泌表达 被引量:8
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作者 刘健 陈瑞爱 +3 位作者 刘珊珊 朱杰仪 唐明森 罗满林 《华南农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第1期93-97,共5页
根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转... 根据毕赤酵母Pichia pastoris表达系统对于密码子的偏嗜性,将去除信号肽的猪α干扰素(PoIFN-α)基因重新设计改造并合成一段新的核苷酸序列,置于毕赤酵母菌α因子分泌信号的DNA序列后,构建成pPICZαC-PoIFN-α分泌型重组表达载体,电转化进入野生型毕赤酵母菌X-33中,经Zeoc inTM抗性筛选后获得大量多拷贝重组子,SDS-PAGE和W estern-b lot分析结果表明,所获得的重组子能够分泌表达出相对分子质量约为19 000的PoIFN-α特异蛋白,其有效蛋白表达量较高达54.105 mg/L.经Vero-VSV系统测定,PoIFN-α效价达到5.87×107U/L.试验将PoIFN-α成熟肽全基因密码子进行改造,并实现了其在毕赤酵母菌表达系统中的高效分泌表达. 展开更多
关键词 Α干扰素 密码子改造 毕赤酵母 分泌表达
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山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶基因的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析
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作者 刘威 蒋鹏程 +7 位作者 杨克礼 袁芳艳 周丹娜 刘泽文 高婷 郭锐 孙裴 田永祥 《动物医学进展》 北大核心 2023年第2期35-40,共6页
旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761... 旨在获得山羊支原体山羊肺炎亚种MCCG-0521乳酸脱氢酶(L-lactate dehydrogenase,LDH)的蛋白表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究LDH蛋白的功能奠定基础。试验完成了LDH基因的克隆和密码子改造,成功将LDH基因中473、761、779 nt处的A突变为G,使改造后的LDH基因能在大肠埃希氏菌Rosetta中正确表达。SDS-PAGE电泳结果显示,IPTG诱导目的蛋白表达后获得一条大小约34 ku的蛋白条带,Western blot结果表明获得的原核表达产物可与抗6×His tag的单克隆抗体发生特异性反应,研究采用DNAStar Protean模块分析了LDH的二级结构、蛋白骨架柔性区域和可能的B细胞抗原优势表位,为进一步研究其功能奠定了基础。 展开更多
关键词 山羊支原体山羊肺炎亚种 MCCG-0521 乳酸脱氢酶 密码子改造 二级结构
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猪肺炎支原体脂蛋白LppB的克隆表达及其编码氨基酸的生物学分析 被引量:1
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作者 刘威 袁芳艳 +9 位作者 周丹娜 刘泽文 杨克礼 段正赢 郭锐 蔡行 刘保亮 吴修竹 肖少波 田永祥 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2275-2280,共6页
本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改... 本研究旨在获得猪肺炎支原体脂蛋白LppB的表达产物,分析其编码氨基酸的生物学特性,为进一步研究脂蛋白LppB的功能奠定基础。试验构建重组表达质粒pET30a-LppB,通过快速定点突变试剂盒将LppB基因中1 068,1 353,1 578nt处的A突变为G,使改造后的LppB基因能在大肠杆菌系统中正确表达,IPTG诱导重组蛋白的表达并进行蛋白纯化。SDS-PAGE分析结果显示,IPTG诱导表达后获得一条特异性蛋白条带,相对分子质量约为70 000,与预期蛋白大小一致。可溶性分析结果表明目的蛋白主要以可溶的形式表达于上清中;Western blot鉴定结果表明纯化的蛋白能与抗6×His标签的单抗发生特异性反应。采用DNAStar Protean模块对脂蛋白LppB进行了二级结构、蛋白质骨架柔性区域、抗原指数的预测,并确定了B细胞抗原优势表位的可能分布。 展开更多
关键词 猪肺炎支原体 脂蛋白 密码子改造 二级结构
原文传递
一种快速获得基因密码子偏爱性改造的方法——SOE-PCR 被引量:6
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作者 王艳君 杨谦 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第8期96-99,共4页
SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质... SOE-PCR采用具有互补末端的引物,使PCR产物形成重叠链,在不需要内切酶消化和连接酶处理的条件下实现DNA片段的拼接,能够高效、快速地实现基因的定点突变。应用SOE-PCR原理成功地实现了对几丁质酶基因chi58的5个位点的突变,构建了几丁质酶基因密码子偏爱性改造突变体—chi58A。实验证明,SOE-PCR具有简捷、快速、高效的优点。扩增过程中未引入其他突变,获得的chi58A突变体基因片段可以用于后续的分子克隆。 展开更多
关键词 SOE—PCR 多点突变 密码子偏爱性改造
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