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差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞外泌体提取中的应用对比观察 被引量:12
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作者 罗靖莹 贺宏丽 +2 位作者 郭阳 黄玮玮 黄晓波 《山东医药》 CAS 2019年第12期48-52,共5页
目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心... 目的观察差速离心、密度梯度离心、超滤离心技术在骨髓间充质干细胞(BMSCs)外泌体提取中的应用,筛选外泌体最佳离心提取方法。方法取BMSCs培养48 h后收集细胞上清,平均分成A、B、C组,分别使用差速离心技术、密度梯度离心技术、超滤离心技术提取外泌体;记录各组外泌体提取时间;采用负染色技术观察各组外泌体形态;使用纳米颗粒跟踪分析仪测算各组外泌体浓度及大小;采用BCA法测定外泌体总蛋白浓度;采用Western blotting法检测各组外泌体表面标志蛋白CD9、CD63、Alix。将肺微血管内皮细胞(PMVECs)分成5组,EC组上室加入PMVECs及培养基; LPS组上室加入PMVECs及含LPS的培养基(构建内皮细胞损伤模型); A、B、C组上室加入方法同LPS组,下室分别加入A、B、C组外泌体;采用葡聚糖渗漏实验检测外泌体内皮细胞通透性(观察外泌体对内皮细胞的修复作用),以内皮细胞通透指数表示。结果 A、B、C组的外泌体的提取时间分别为(180±8)、(203±10)、(40±5) min,A、B组外泌体的提取时间与C组相比,P均<0. 05。各组外泌体均为大小不等的椭圆形或圆形的膜性结构,边界清晰,但仅A组外泌体可见到典型的杯状结构。A、B、C组的外泌体浓度分别为(4. 46±0. 38)×108/m L、(5. 11±0. 16)×108/m L、(2. 18±0. 17)×108/m L,A、B组与C组外泌体浓度相比,P均<0. 05。A、B、C组的外泌体大小均为20~100 nm。A、B组外泌体总蛋白浓度及CD63、Alix的相对表达量均显著高于C组(P均<0. 05)。A、B、C、LPS、EC组的内皮细胞通透指数分别为2. 17±0. 15、1. 77±0. 32、2. 37±0. 42、2. 93±0. 15、1. 00±0. 00,A、B、C、LPS组的内皮细胞通透指数与EC组相比,P均<0. 05; A、B组的内皮细胞通透指数与LPS组相比,P均<0. 05。结论密度梯度离心技术虽耗时较长,但提取的外泌体纯度、浓度较高,对内皮细胞的修复作用较强,可以作为科研和临床研究的首选外泌体� 展开更多
关键词 外泌体 外泌体提取方法 差速离心技术 密度梯度离心技术 超滤离心技术 间充质干细胞 骨髓间充质干细胞 肺微血管内皮细胞
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血浆低密度脂蛋白胆固醇测定参考方法的建立 被引量:2
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作者 陈永梅 张吉才 +3 位作者 郑芳 吕军 李德奎 陈炜 《现代检验医学杂志》 CAS 2010年第3期47-49,54,共4页
目的建立一种新的预期用作低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)准确测定的参考方法。方法采用密度梯度超速离心技术,从新鲜血浆中分离出低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)和其它各类脂蛋白... 目的建立一种新的预期用作低密度脂蛋白胆固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDL-C)准确测定的参考方法。方法采用密度梯度超速离心技术,从新鲜血浆中分离出低密度脂蛋白(low density lipoprotein,LDL)和其它各类脂蛋白。参考并筒化应用目前国际上公认的胆目醇测定参考方法Abell—Levy—Brodie—Kendall(ALBK)法,以分离的LDL为检测样本,重复多次测定LDL—C,用Excel软件对结果进行统计分析,计算总不精密度(总变异系数CV)、平均批内不精密度(平均批内变异系数CV)和测量不确定度(u)等精密度检验标度,对所建立方法进行精密度评价;并通过回收实验、干扰实验的结果分析对建立方法进行准确度评价。结果密度梯度超速离心成功分离出LDL和其它几类脂蛋白,用ALBK法测定LDL—C的方法学精密度为:总CV为3.21%~4.51%,平均批内CV为1.78%~4.05%,测量不确定度u为0.031~0.042,胆田醇平均回收率达107.2%,血红蛋白(Hb)〈1.95g/L时对该方法干扰度较小。结论密度梯度超速离心技术分离LDL耗费低、易操作;ALBK法直接测定LDL—C,方法学精密度统计分析结果显示该方法重复性好,回收实验、干扰实验的准确度评价结果显示所建立方法稳定、抗干扰能力强,超速离心结合ALBK法可望用作LDL—C的参考方法。 展开更多
关键词 脂蛋白 胆固醇 密度梯度超速离心技术 ALBK参考方法
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