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实时逆转录环介导等温扩增检测GⅡ.4型诺如病毒的研究 被引量：3
1
作者 赵剑虹 张登城 +3 位作者 高艳 焦洋 张士尧 李书明 《中国卫生检验杂志》 CAS 2018年第8期945-948,960,共5页
目的建立快速检测诺如病毒GⅡ.4型的实时逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。方法选取GⅡ.4型诺如病毒的ORF1与ORF2接头处较为保守的基因序列设计RT-LAMP引物并进行筛选,优化反应条件,分析方法的灵敏度、分析特异性和稳定性,采用优化... 目的建立快速检测诺如病毒GⅡ.4型的实时逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP)。方法选取GⅡ.4型诺如病毒的ORF1与ORF2接头处较为保守的基因序列设计RT-LAMP引物并进行筛选,优化反应条件,分析方法的灵敏度、分析特异性和稳定性,采用优化的方法检测40例临床病毒性腹泻样本,结果与实时荧光逆转录PCR(RT-PCR)比较。结果该研究建立的诺如病毒GⅡ.4型RT-LAMP的最佳反应温度为65℃;该方法检测GⅠ型和GⅡ非诺如病毒4型、轮状病毒、札如病毒、星状病毒、腺病毒、CA16、EV71、CA6和CA10等常见10种其他腹泻病毒的结果为阴性;该方法对诺如病毒GⅡ.4型的检测能力与实时荧光RT-PCR相当;与实时荧光RT-PCR相比,该研究建立的RT-LAMP法检测诺如病毒GⅡ.4型阳性样本和诺如病毒阴性样本的符合率为100%。结论该研究建立的诺如病毒GⅡ.4型RT-LAMP快速检测方法灵敏度高,特异性好,为建立诺如病毒其他基因型的RT-LAMP检测方法奠定了基础。 展开更多
关键词 诺如病毒GⅡ.4型 实时逆转录环介导等温扩增 检测
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建立新型冠状病毒实时荧光逆转录环介导等温扩增快速检测方法 被引量：6
2
作者 殷宏 金涌 +4 位作者 邹明强 刘波 任荔荔 段天宇 陈乃中 《中国国境卫生检疫杂志》 CAS 2020年第6期381-384,392,共5页
目的建立实时荧光逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP),对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)进行现场快速检测。方法在充分比对SARS-CoV-2与其他相关病毒基因组序列后,针对其核衣壳蛋白N基因序列设计了RT-LAMP引物组,经优化反应条件后,进行特异... 目的建立实时荧光逆转录环介导等温扩增方法(RT-LAMP),对新型冠状病毒(SARS-CoV-2)进行现场快速检测。方法在充分比对SARS-CoV-2与其他相关病毒基因组序列后,针对其核衣壳蛋白N基因序列设计了RT-LAMP引物组,经优化反应条件后,进行特异性、灵敏度与添加回收试验。结果建立的RT-LAMP方法对SARS-CoV-2的检测特异性良好,优化条件后在102~107体外转录RNA拷贝/反应的范围内,RT-LAMP反应荧光信号达到最大值的扩增时间(peak time)与每个反应内模板RNA初始拷贝数的对数值的线性方程为y=-1.486x+19.63,R2=0.9921,线性关系良好。检测可在30 min内完成,检出限以体外转录RNA为模板达到200拷贝/μl。结论自主研发建立了可以特异性检测SARS-CoV-2的实时荧光逆转录环介导等温扩增快速检测方法,可用于新冠肺炎病例确诊和人群筛查。 展开更多
关键词 新型冠状病毒 实时荧光逆转录环介导等温扩增 核衣壳 冠状病毒
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