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脑脉络丛组织中锰毒性差异表达蛋白的体外验证 被引量:3
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作者 董一文 刘君丽 +9 位作者 刘羽 敬海明 赵超英 马玲 谭壮生 李煜 李芳 李明 焦智浩 李国君 《毒理学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期27-33,34,共8页
目的本实验室前期研究在锰染毒体内实验模型的大鼠脑脉络丛组织中鉴定到32个锰毒性相关的差异蛋白。本试验挑选出其中7个差异表达蛋白,包括抑制素蛋白(PHB1)电压阴离子通道(VDAC)、肌动蛋白β亚型(β-Actin)、应激性磷蛋白1(STI1)、热... 目的本实验室前期研究在锰染毒体内实验模型的大鼠脑脉络丛组织中鉴定到32个锰毒性相关的差异蛋白。本试验挑选出其中7个差异表达蛋白,包括抑制素蛋白(PHB1)电压阴离子通道(VDAC)、肌动蛋白β亚型(β-Actin)、应激性磷蛋白1(STI1)、热休克蛋白70(HSP70)、转甲状腺素蛋白(TTR)和中间丝波形蛋白(Vimentin),在大鼠永生化脉络丛上皮Z310细胞体外染锰模型中,对其蛋白和mRNA水平的变化趋势进行验证。方法氯化锰(0、50、100和200μmol/l)染毒Z310细胞24 h,采用蛋白印迹法(Western Blot)测定7个锰毒性相关蛋白的蛋白表达水平;同样剂量的氯化锰染毒Z310细胞12 h,以实时定量逆转录聚合酶链式反应法(Real time-RT PCR)测定7个蛋白在mRNA水平的表达情况。结果随着剂量的增加PHB1、β-Actin和STIP1在蛋白表达与mRNA水平均表现为上调的效应趋势,VDAC、HSP70、TTR和Vimentin在蛋白表达与mRNA水平均表现为下调的效应趋势;PHB1、β-actin、STIP1和TTR在Z310细胞中的表达效应趋势与体内动物模型脑脉络丛中锰毒性差异蛋白的变化趋势相符,而VDAC、HSP70和Vimentin在Z310细胞中的表达效应趋势则与之相反。结论氯化锰对PHB1、β-actin、STIP1和TTR的毒性效应在体内和体外是一致的,染锰后其蛋白表达和mRNA水平的变化趋势是可靠准确的。这为开展锰致脑脉络丛组织及其上皮细胞的毒性效应及其分子机制研究提供了有价值的线索。 展开更多
关键词 锰毒性差异表达蛋白 脉络丛 永生化Z310细胞 血-脑脊液屏障 蛋白印迹 实时定量逆转录聚合酶链式反应
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大鼠伏核内注射吗啡及其受体阻断剂对其Nogo-A和CGRP mRNA表达的影响 被引量:1
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作者 王燕 孟蒂 李宁 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第8期1131-1135,共5页
目的探讨大鼠伏核(nucleus accumbens,NAc)内No-go-A在痛觉调制过程中的作用。方法制备炎性痛敏大鼠动物模型,分别向其NAc内注射生理盐水、吗啡或纳洛酮各1μl,60 min后取大鼠NAc区域脑组织,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(real-time... 目的探讨大鼠伏核(nucleus accumbens,NAc)内No-go-A在痛觉调制过程中的作用。方法制备炎性痛敏大鼠动物模型,分别向其NAc内注射生理盐水、吗啡或纳洛酮各1μl,60 min后取大鼠NAc区域脑组织,采用实时定量逆转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcription polymerasechain reaction,RT-PCR)技术,观察大鼠伏核内Nogo-A mR-NA与CGRP mRNA表达量的改变。实验中以β-actin为内参,记录大鼠伏核内Nogo-A mRNA与CGRP mRNA表达产物的CT值,并计算每一样品对应其内参的相对含量,分析炎性痛、吗啡和纳洛酮对大鼠伏核内Nogo-A mRNA和CGRPmRNA表达的影响。结果与空白对照组比较,痛敏模型对照组大鼠NAc内Nogo-A mRNA表达量降低(P<0.05),CGRP mRNA增高(P<0.01);与痛敏模型对照组比较,吗啡组Nogo-A mRNA表达量增高(P<0.01),CGRP mRNA降低(P<0.05),而纳洛酮组Nogo-A mRNA表达量降低(P<0.05),CGRP mRNA增高(P<0.05)。结论大鼠NAc注射吗啡和纳洛酮均可影响其Nogo-A和CGRP mRNA的表达,且Nogo-A与CGRP之间有反向调节关系。 展开更多
关键词 吗啡 伏核 NOGO-A 降钙素基因相关肽 痛觉调制 实时定量逆转录聚合酶链式反应 大鼠
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IL-12调节蛋白酶激活受体在肥大细胞的表达 被引量:3
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作者 张慧云 林青 +3 位作者 林丽艳 张忠芳 杨海伟 何韶衡 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第7期612-614,618,共4页
目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响。方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后,在不同时间点,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM),在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在肥大... 目的:探讨IL-12对肥大细胞蛋白酶激活受体(PARs)表达的影响。方法:不同浓度IL-12刺激肥大细胞后,在不同时间点,用实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR)和流式细胞术(FCM),在mRNA水平和蛋白水平检测PAR-1、PAR-2、PAR-3和PAR-4在肥大细胞P815表面和胞内的表达情况。结果:IL-12下调肥大细胞膜表面PAR-2蛋白的表达,上调肥大细胞膜表面和胞质内PAR-4蛋白的表达,IL-12抗体的应用可阻断IL-12对肥大细胞PARs蛋白表达的影响;IL-12上调肥大细胞PAR-1、3、4 mRNA的表达,下调PAR-2 mRNA的表达。结论:IL-12在过敏性炎症反应中的调节作用可能与IL-12调节肥大细胞PARs表达有关。 展开更多
关键词 蛋白激活受体 肥大细胞 实时定量逆转录聚合酶链式反应(q-RT-PCR) 流式细胞术(FCM)
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转录因子κB和早期生长反应因子1在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达 被引量:5
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作者 丁艳 赵雷 +3 位作者 贾德胜 黄志华 梅红 彭罕鸣 《临床儿科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期879-884,共6页
目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急... 目的研究转录因子核因子κB(nuclear factor-κB,NF-κB)和早期生长反应因子1(early growthresponse factor-1,Egr-1)在急性肝内胆汁淤积性肝损伤大鼠模型中的表达及意义。方法将α-异硫氰酸萘酯(ANIT)按50 mg/kg 一次灌胃大鼠,建立急性肝内胆汁淤积性肝损伤的动物模型,免疫组织化学法和实时荧光定量 PCR 分别检测灌胃后24、48、72 h 肝组织中 NF-κB p65蛋白表达和 Egr-1 mRNA 表达量,全自动生化分析仪检测血清总胆红素(TB)、直接胆红素(DB)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、γ-谷氨酰转肽酶(GGT)。结果模型组24、48、72 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量分别为(12.73±3.02)×10^(-2)、(8.19±2.29)×10^(-2)、(5.79±0.78)×10^(-2),24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05);模型组24、48、72 h肝组织 NF-κB p65核表达阳性细胞率分别为48.3%、26.5%、2.7%,其中24、48 h 均高于对照组(P 均<0.05),72 h 与对照组差异无统计学意义(P>0.05)。模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级分别与同一时间点的血清 TB、DB、ALT 呈正相关(P 均<0.05);模型组24、48 hEgr-1 mRNA 表达量分别与同一时间点的血清TB、DB、AIT、GGT 呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 NF-κB p65、Egr-1 mRNA 表达量与72 h 时血清 TB、DB、ALT、GGT 无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h NF-κB p65核表达阳性细胞分级与同一时间点的血清 GGT 亦无相关关系(P 均>0.05);模型组24、48 h 肝组织 Egr-1 mRNA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级呈正相关(P 均<0.05);模型组72 h 肝组织 Egr-1 mR-NA 表达量及 NF-κB p65核表达阳性细胞分级均与同一时间点肝组织病理损伤程度分级无相关关系(P 均>0.05)。结论 NF-κB和 Egr-1在肝内胆汁淤积性肝损伤肝组织中表达增高,与肝损伤程度相关,参予了肝内胆汁淤积性肝损伤的病理过程。[临床儿科杂志,2008 展开更多
关键词 核因子ΚB 早期生长反应因子1 免疫组化 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 胆汁淤积 肝损伤
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含4种食源性病毒检测靶标多联装甲RNA的制备、纯化与定值 被引量:5
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作者 姚琳 张奇 +5 位作者 李风铃 张媛 逄凤娇 江艳华 王联珠 翟毓秀 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第8期293-299,共7页
基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台构建同时含有诺如病毒(norovirus,NoV)、甲肝病毒(hepatitis Avirus,HAV)、轮状病毒(rotavirus,RV)、星状病毒(astrovirus,AstV)检测靶标RNA的多联装甲RNA(multiplexarmoredRNA,AR-MulV),并进行纯化与初步... 基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台构建同时含有诺如病毒(norovirus,NoV)、甲肝病毒(hepatitis Avirus,HAV)、轮状病毒(rotavirus,RV)、星状病毒(astrovirus,AstV)检测靶标RNA的多联装甲RNA(multiplexarmoredRNA,AR-MulV),并进行纯化与初步定值。结果表明,重组质粒在大肠杆菌中成功表达,表达产物大小约为14.1 kDa;制备的AR-MulV经纯化后无杂蛋白与残留重组质粒,电镜下可见大量结构形态完整的病毒样颗粒,大小约为25 nm。初步定值结果显示,AR-MulV中GⅠ型NoV、GⅡ型NoV、HAV、RV和AstV检测靶标RNA的含量分别为(1.24±0.2)×10~7、(2.54±0.6)×10~7、(2.24±0.3)×10~7、(2.96±0.5)×10~7 copies/μL和(3.19±0.4)×10~7 copies/μL。本研究基于Qβ噬菌体装甲RNA制备平台成功制备同时包含4种食源性病毒标准方法检测靶标的多联装甲RNA,为食源性病毒的分子检测以及多重实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应阳性质控样品的研发提供新思路。 展开更多
关键词 食源性病毒 多联装甲RNA Qβ噬菌体 阳性质控样品 实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应
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江西省2013年疑似麻疹病例病原学实验室监测结果分析 被引量:4
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作者 龚甜 熊英 +2 位作者 张艳妮 施勇 徐刚 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第10期1615-1617,共3页
目的分析2013年江西省疑似麻疹病例病原学实验室检测结果,为进一步消除麻疹提供科学依据。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)方法,对2013年疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹病毒核酸检测,对核酸阳性标本进行... 目的分析2013年江西省疑似麻疹病例病原学实验室检测结果,为进一步消除麻疹提供科学依据。方法采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)方法,对2013年疑似麻疹病例咽拭子标本进行麻疹病毒核酸检测,对核酸阳性标本进行麻疹病毒分离培养,并对分离到的麻疹毒株进行基因型别鉴定。结果 2013年全省共采集麻疹疑似病例咽拭子标本1 197份,检出麻疹核酸阳性55份,阳性率为4.59%;共获得16株麻疹毒株,分离率为29.09%,均为H1a基因型。结论江西省需要进一步提高麻疹病例咽拭子标本采集率和采集质量,充分阐述麻疹病毒基因型别特征,为努力实现消除麻疹目标提供实验室依据。 展开更多
关键词 麻疹 病原学 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应
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去氢骆驼蓬碱治疗细粒棘球蚴病的作用机制研究
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作者 林玉霞 巩月红 +2 位作者 赵一聪 潘美驰 王建华 《中国药业》 CAS 2024年第11期42-48,共7页
目的 应用网络药理学方法预测去氢骆驼蓬碱(HM)治疗细粒棘球蚴病的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库(TCMSP)、瑞士靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)、药物银行数据库(Drugbank)获取HM相关基因,在基因卡数据库(GeneCards)、D... 目的 应用网络药理学方法预测去氢骆驼蓬碱(HM)治疗细粒棘球蚴病的作用机制。方法 从中药系统药理学数据库(TCMSP)、瑞士靶点预测数据库(SwissTargetPrediction)、药物银行数据库(Drugbank)获取HM相关基因,在基因卡数据库(GeneCards)、DISGENET数据库、DrugBank数据库获取细粒棘球蚴病的作用靶点,将HM的预测靶点和细粒棘球蚴病相关基因相互映射,得到HM作用细粒棘球蚴病的靶点基因,导入String数据库进行网络拓扑属性分析,筛选重要靶点蛋白,构建蛋白质-蛋白质互作(PPI)和成分-疾病-靶点网络。采用DAVID数据库进行基因本体论(GO)功能分析和Kyoto京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析,筛选与DNA损伤相关的基因靶点。采用Autodock Vina软件及Pymol软件对相关靶点进行分子对接验证和展示。将活力不低于98%的细粒棘球蚴随机分为空白对照组、1%DMSO组、25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRTPCR)法、免疫印迹(Western blot)法体外验证HM干预细粒棘球蚴肿瘤蛋白P53(TP53)、拓扑异构酶Ⅰ(TopoⅠ)、染色体组蛋白H2A的变异体(H2AX)、共济失调毛细血管扩张突变基因(ATM)mRNA和蛋白表达水平。结果 共获得HM靶点105个,细粒棘球蚴病相关基因88个,二者共有靶点为2个。HM干预细粒棘球蚴病的作用靶点主要有促分裂原活化蛋白激酶3(MAPK3)、MAPK1、TP53、热休克蛋白90α家族A类成员1(HSPAA1)、MAPK14、Jun,机制可能涉及MAPK信号通路、受体酪氨酸激酶(ERBB)信号通路、DNA损伤与DNA修复通路、细胞凋亡等过程。体外验证结果显示,与空白对照组相比,25μmol/L HM组、50μmol/L HM组、100μmol/L HM组的TP53,TopoⅠmRNA和蛋白表达均呈下调趋势(P <0.05),H2AX,ATM mRNA和蛋白表达均呈上调趋势(P <0.05)。结论 HM可通过多种生物学过程和相关信号途径治疗细粒棘球蚴病,HM参与细粒棘球� 展开更多
关键词 去氢骆驼蓬碱 细粒棘球蚴病 DNA损伤与DNA修复 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 网络药理学 作用机制
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胶质瘤中膜型基质金属蛋白酶1mRNA水平表达 被引量:2
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作者 刘维生 肖新如 +3 位作者 耿会娟 陈善文 王硕 赵继宗 《北京医学》 CAS 2008年第1期1-4,共4页
目的探讨胶质瘤恶性程度和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA表达水平的关系,为胶质瘤的诊断、治疗及预后等提供参考。方法分别采用实时荧光定量逆转录PCR法(RT-PCR)和半定量RT-PCR法检测34例胶质瘤和7例正常脑组织中MT1-MMPmRNA的表达... 目的探讨胶质瘤恶性程度和膜型基质金属蛋白酶1(MT1-MMP)mRNA表达水平的关系,为胶质瘤的诊断、治疗及预后等提供参考。方法分别采用实时荧光定量逆转录PCR法(RT-PCR)和半定量RT-PCR法检测34例胶质瘤和7例正常脑组织中MT1-MMPmRNA的表达水平。结果实时荧光定量RT-PCR法检测正常脑组织和II级(低级别)、III级、IV级、高级别(III、IV级)胶质瘤的△△Ct值分别为0.834±0.517,4.063±2.309,6.376±4.023,7.653±4.196和7.072±4.072。半定量RT-PCR法测定结果显示,正常脑组织和II级、III级、IV级、高级别胶质瘤的相对灰度值分别为0.799±0.156,1.142±0.158,1.538±0.482,1.652±0.376和1.600±0.421。正常脑组织和II、III、IV级胶质瘤之间,II、IV级胶质瘤之间,正常脑组织和低、高级别胶质瘤之间,低、高级别胶质瘤之间MT1-MMP基因mRNA表达水平均有显著性差异。结论胶质瘤中存在MT1-MMP基因mRNA高水平的表达,随着肿瘤恶性程度的增加,MT1-MMP基因mRNA的表达水平增高。 展开更多
关键词 胶质瘤 膜型基质金属蛋白1 实时荧光定量逆转录-聚合酶链式反应 定量逆转录-聚合酶链式反应
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实时RT-PCR检测人端粒酶逆转录酶mRNA用于乳腺癌鉴别诊断及与c-Myc基因的相关性 被引量:3
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作者 唐峰 陈忠清 +5 位作者 包芸 朱腾芳 王虹 朱虹光 许祖德 胡锡琪 《复旦学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2006年第6期727-731,共5页
目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定... 目的探讨定量检测人端粒酶逆转录酶(hTERT)mRNA在乳腺癌鉴别诊断中的价值,并观察原癌基因c-Myc与hTERT mRNA表达的关系。方法收集癌旁正常乳腺组织、乳腺普通型导管增生、不典型导管增生、导管原位癌、浸润性导管癌病例,采用实时荧光定量RT-PCR技术(Real-ti me RT-PCR)定量检测hTERT和c-Myc基因的转录水平。结果以NhTERT=10为临界值,所有正常组织和良性病变NhTERT值均小于临界值,而hTERT基因转录升高的导管原位癌及浸润性导管癌其NhTERT值均大于此临界值。显示hTERT和c-Myc基因转录水平呈正相关(γ=0.7395,P<0.01)。结论实时荧光定量PCR技术检测hTERT基因表达具有高敏感性和特异性,能为常规病理学诊断提供客观的参考指标,从而提高乳腺不典型导管增生与导管原位癌鉴别诊断的准确性。原癌基因c-Myc转录水平上调可能与乳腺癌hTERT基因转录激活有关。 展开更多
关键词 乳腺癌 端粒 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 人端粒逆转录 C-MYC原癌基因
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多重实时荧光定量RT-PCR法快速检测3种蚊媒病毒 被引量:3
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作者 吴忠华 罗鹏 +1 位作者 吕沁风 郑伟 《中国卫生检验杂志》 CAS 2015年第12期1975-1977,共3页
目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq ... 目的建立多重实时荧光定量RT-PCR快速检测方法,用于黄热病毒(YFV)、登革热病毒(DFV)、基孔肯雅热病毒(CHIKV)的同时检测和鉴别诊断。方法分别针对YFV 3'UTR基因、DFV 3'UTR C-M基因和CHIKV nsp2基因保守区设计特异性引物和Taq Man探针,建立并优化多重实时荧光定量RT-PCR反应体系,评价方法的特异性、敏感性和稳定性,并用临床标本进行验证。结果该方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,检测结果的特异性强,灵敏度达1×103copy/ml,结果的重复性很好,其变异系数分别为1.03%、0.90%和0.34%。临床确诊的11例DFV标本,5例CHIKV标本和10例黄热病疫苗标本核酸检测结果皆为阳性。结论研究建立的多重实时荧光定量RT-PCR方法可同时检测YFV、DFV和CHIKV,灵敏度高、特异性强、稳定性好,是一种可同时快速检测多种蚊媒病毒的新方法。 展开更多
关键词 黄热病毒 登革热病毒 基孔肯雅热病毒 多重实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 检测
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实时荧光定量RT-PCR法检测安徽宿州市手足口病病原体结果分析 被引量:2
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作者 胡雪影 张玲 《热带病与寄生虫学》 2015年第4期208-210,218,共4页
目的 了解宿州市手足口病肠道病毒谱及感染情况,为制订手足口病预防控制策略提供依据。方法 采用实时荧光定量RT-PCR法对2012~2014年宿州市各县区哨点医院手足口病临床诊断病例进行病原学检测并分析。结果 在962份样品中,肠道病毒核酸... 目的 了解宿州市手足口病肠道病毒谱及感染情况,为制订手足口病预防控制策略提供依据。方法 采用实时荧光定量RT-PCR法对2012~2014年宿州市各县区哨点医院手足口病临床诊断病例进行病原学检测并分析。结果 在962份样品中,肠道病毒核酸检测阳性384例,阳性率为39.92%;其中EV71、Cox A16分别为154例(占40.10%)、144例(占37.50%),其他型肠道病毒共86例(占22.40%)。384例阳性病例中,男247例,女137例,阳性检出率在性别间差异无统计学意义(χ2=0.83,P〉0.05);1岁组和2岁组手足口病毒核酸检测阳性占全部阳性者的73.18%。在3~4月和6~7月的发病高峰期间,病毒主要以Cox A16型和EV71型毒株为主,10~12月以EV71型病毒株为主。在人口密集的萧县和埇桥区,其手足口核酸阳性检出率最高,分别为50.21%和42.18%。结论 宿州市手足口病病原体主要是EV71和Cox A16,主要发生在3岁以下儿童,发病时间以每年3~4月和6~7月为主,应加强在流行季节的防控工作及3岁以下手足口病患儿的病情监测与治疗。 展开更多
关键词 手足口病 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应 肠道病毒71型 柯萨奇病毒A组16型 宿州市
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房劳-倦劳肾阳虚模型小鼠睾丸LDH-x基因表达的实验研究 被引量:2
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作者 张丹 朱庆均 《山东中医杂志》 2010年第3期191-193,共3页
目的:观察"房劳-倦劳"肾阳虚模型小鼠睾丸精子特异酶LDH-x mRNA表达的改变。方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,以Colldege效应诱导雄性小鼠房事不节,建立肾阳虚小鼠模型。造模给药4周后,运用实时荧光定量RT-qPCR法检测睾丸... 目的:观察"房劳-倦劳"肾阳虚模型小鼠睾丸精子特异酶LDH-x mRNA表达的改变。方法:用强迫小鼠游泳法造成劳倦过度,以Colldege效应诱导雄性小鼠房事不节,建立肾阳虚小鼠模型。造模给药4周后,运用实时荧光定量RT-qPCR法检测睾丸中LDH-x mRNA的表达。结果:"房劳-倦劳"肾阳虚模型组LDH-x mRNA显著低于正常组(P<0.01),金匮肾气丸治疗组LDH-x mRNA则明显高于模型组(P<0.05)。结论:该肾阳虚小鼠精子特异酶LDH-x活性的下降以及经肾气丸治疗后LDH-x活性的升高,是LDH-x基因表达改变的结果。 展开更多
关键词 乳酸脱氢-x(LDH-x) 肾阳虚 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(RT-qPCR)
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LncRNAGAS5在缺血性脑卒中的表达及临床价值
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作者 杨挲挲 韩鹏飞 +3 位作者 赵乐 李梦真 查江杰 程铭 《中国实用医药》 2023年第19期17-20,共4页
目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)生长阻滞特异转录物5(GAS5)在缺血性脑卒中(IS)患者血清中的表达及临床价值。方法选取90例IS患者作为病例组,按照IS严重程度分为轻度组、中度组、重度组,每组30例;另选取同期健康体检者45例作为健康对照... 目的探讨长链非编码RNA(LncRNA)生长阻滞特异转录物5(GAS5)在缺血性脑卒中(IS)患者血清中的表达及临床价值。方法选取90例IS患者作为病例组,按照IS严重程度分为轻度组、中度组、重度组,每组30例;另选取同期健康体检者45例作为健康对照组。收集血清标本,提取总RNA,实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(qRT-PCR)测定逆转录LncRNA GAS5,分析IS患者LncRNA GAS5相对表达水平与美国国立卫生研究院卒中量表(NIHSS)评分的相关性以及LncRNA GAS5对IS的诊断效能。结果qRT-PCR结果表明:LncRNA GAS5在健康对照组以及轻度组、中度组、重度组中的表达水平分别为(1.12±0.97)、(2.17±1.16)、(3.20±1.24)、(5.07±1.97),轻度组、中度组、中度组LncRNA GAS5表达水平高于健康对照组,且重度组LncRNA GAS5表达水平高于中度组和轻度组,中度组高于轻度组,差异均具有统计学意义(P<0.001)。经Pearson相关性分析表明,病例组患者LncRNA GAS5相对表达水平与NIHSS评分呈正相关(r=0.63,P<0.01)。通过受试者工作特征(ROC)曲线分析,LncRNA GAS5的曲线下面积(AUC)为0.893(0.836~0.950),灵敏度为93.3%,特异度为68.9%,截断值为1.18。结论IS患者与健康体检者取新鲜血清检测后发现,LncRNA GAS5表达在IS患者血清中出现明显升高,且患者病情越严重表达水平越高,因此可以将LncRNA GAS5表达水平作为IS的辅助生物诊断指标。 展开更多
关键词 长链非编码RNA 生长阻滞特异转录物5 缺血性脑卒中 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应
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hMLH1及hPMS2 mRNA在胃癌组织中荧光定量RT-PCR的检测及其临床意义 被引量:1
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作者 潘光松 刘希双 杨堃 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2010年第24期2599-2603,共5页
目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1及hPMS2在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者的癌组织、40例癌旁胃炎组织及21例慢性胃炎患者的慢性胃炎组织hMLH1 mRNA及hPMS2 mRNA... 目的:探讨DNA错配修复基因hMLH1及hPMS2在胃癌组织中的表达水平及其临床意义.方法:应用实时荧光定量逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术对40例胃癌患者的癌组织、40例癌旁胃炎组织及21例慢性胃炎患者的慢性胃炎组织hMLH1 mRNA及hPMS2 mRNA进行定量检测,以三磷酸甘油醛脱氢酶基因(hGAPDH)为内参照.结果:胃癌组织、癌旁组织、慢性胃炎组织中hMLH1 mRNA的相对含量分别是7.23±11.91,3.80±5.13,2.01±1.25,三组相比差异有统计学意义(F=3.272,均P=0.042),胃癌组织中hMLH1 mRNA含量明显高于其他两组,癌旁组织中含量明显高于慢性胃炎组织中的含量(均P<0.05);各组织中hPMS2 mRNA的相对含量分别是0.43±0.35,0.55±0.39,0.32±0.15,3组相比差异有统计学意义(F=3.349,均P=0.039),胃癌组织与癌旁组织中hPMS2mRNA的含量差异无统计学意义,但均高于慢性胃炎组织中的含量(均P<0.05).除hMLH1 mRNA含量在有、无淋巴结转移的胃癌组织中有显著差异(均P<0.05)外,在胃癌组织中hMLH1 mRNA及hPMS2 mRNA相对含量受肿瘤直径、浸润深度、淋巴结转移的影响不大(均P>0.05).结论:胃癌组织和癌旁组织与慢性胃炎组织相比存在hMLH1及hPMS2 mRNA转录差异,这种基因的转录差异可能与胃癌的发生有关,而与胃癌的发展关系不显著. 展开更多
关键词 HMLH1 MRNA hPMS2 MRNA 胃癌 DNA错配修复基因 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应
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PCR检测贵州遵义地区蝙蝠BDV-P40基因片段及同源性分析
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作者 雷以会 徐平 杨利玲 《重庆医学》 CAS 北大核心 2016年第25期3475-3477,共3页
目的探讨贵州遵义地区蝙蝠是否存在博尔纳病毒(BDV)自然感染,分析比较其与国外标准株的同源性。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测82只蝙蝠额颞叶脑组织中BDV-P40基因片段,将阳性扩增产物测序,与国外标准株比较同源性。... 目的探讨贵州遵义地区蝙蝠是否存在博尔纳病毒(BDV)自然感染,分析比较其与国外标准株的同源性。方法采用实时定量逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测82只蝙蝠额颞叶脑组织中BDV-P40基因片段,将阳性扩增产物测序,与国外标准株比较同源性。结果蝙蝠额颞叶脑组织中BDV-P40基因片段阳性率为12.2%(10/82)。贵州遵义地区蝙蝠自然感染的BDV-P40核苷酸序列与标准株Strain V和H1766同源性均为96.2%,与He/80比对同源性为94.9%,所编码的氨基酸无改变。结论贵州遵义地区蝙蝠存在BDV自然感染,该地区BDV-P40核苷酸序列与Strain V和H1766存在高度同源性,人感染BDV可能为动物源性。 展开更多
关键词 博尔纳病毒 实时定量逆转录-聚合酶链式反应 蝙蝠 BDV-P40基因片段
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雌激素受体α在动脉粥样硬化兔体内的表达
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作者 崔亚利 赵德明 +4 位作者 梁万宁 宁章勇 杨建民 吴长德 马李颖 《中国比较医学杂志》 CAS 2005年第5期274-277,共4页
目的通过定量分析雌激素受体在动脉粥样硬化兔心脏和肝脏内的相对基因表达,研究雌激素受体基因mRNA的表达水平与动脉粥样硬化(AS)发生的关系。方法手术法去势新西兰雌兔,高胆固醇饮食法复制AS模型,以管家基因-βactin作为内源性校准基因... 目的通过定量分析雌激素受体在动脉粥样硬化兔心脏和肝脏内的相对基因表达,研究雌激素受体基因mRNA的表达水平与动脉粥样硬化(AS)发生的关系。方法手术法去势新西兰雌兔,高胆固醇饮食法复制AS模型,以管家基因-βactin作为内源性校准基因,用SYBR Green I作为荧光染料,采用实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应(real-time RT-PCR)对ERαmRNA的表达进行了分析。结果对照组(N)、模型组(C)和假手术组(SC)主动脉硬化斑块面积分别为0、(0.75±0.24)和(0.56±0.27),饮食法复制AS模型成功;ER在对照组兔心脏和肝脏内的相对基因拷贝数分别为0.46、0.49,在模型组的去势雌兔心脏和肝脏内的相对基因拷贝数分别为0.29、0.32,在假手术组兔心脏和肝脏内的相对表达量分别为0.53、0.51。结论兔心脏、肝脏内都有雌激素受体α分布;去势AS雌兔组织内雌激素受体表达量的减少可能与动脉硬化的形成有关。 展开更多
关键词 动脉硬化 受体Α 雌激素 实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应
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