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微小RNA-423-5p靶向乙醛脱氢酶2减轻脂多糖诱导的人脐静脉血管内皮细胞损伤 被引量:1
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作者 刘文芳 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第6期868-876,共9页
目的探讨微小RNA-423-5p(miR-423-5p)对脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞损伤的保护及作用机制。方法用1 mg/L LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)24 h,Real-time PCR和Western blotting检测细胞中miR-423-5p和乙醛脱氢酶2(ALDH2)的表达... 目的探讨微小RNA-423-5p(miR-423-5p)对脂多糖(LPS)诱导血管内皮细胞损伤的保护及作用机制。方法用1 mg/L LPS诱导人脐静脉血管内皮细胞(HUVECs)24 h,Real-time PCR和Western blotting检测细胞中miR-423-5p和乙醛脱氢酶2(ALDH2)的表达。通过转染anti-miR-423-5p和pc DNA-ALDH2下调miR-423-5p和上调ALDH2表达,流式细胞术检测细胞凋亡率,Western blotting检测凋亡相关蛋白Bcl-2和Bax的表达,并用ELISA试剂盒检测LPS诱导后细胞上清液中白细胞介素6(IL-6)和肿瘤坏死因子α(TNF-α)的含量;双荧光素酶报告系统验证miR-423-5p与ALDH2的调控关系。结果与对照相比,LPS可诱导HUVECs凋亡和损伤,使HUVECs中miR-423-5p、Bax表达量及IL-6和TNF-α分泌量均显著升高(P<0.05),ALDH2的mRNA和蛋白表达量及Bcl-2量显著降低(P<0.05);下调miR-423-5p表达和过表达ALDH2均可减轻LPS诱导的HUVECs损伤并抑制细胞凋亡;miR-423-5p靶向负调控ALDH2的表达;抑制ALDH2表达逆转了下调miR-423-5p表达对LPS诱导的HUVECs损伤的作用。结论下调miR-423-5p表达可靶向ALDH2减轻LPS对HUVECs的损伤并抑制细胞凋亡。 展开更多
关键词 脐静脉血管内皮细胞 脂多糖 微小RNA-423-5p 乙醛脱氢2 实时定量聚合酶反应 流式细胞术
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联合检测EB病毒不同抗体及EB病毒DNA在鼻咽癌血清学诊断中的价值 被引量:43
2
作者 叶倩 李筱莉 +5 位作者 陈岩松 郭俊英 高嫣妮 余小龙 崔兆磊 陈燕 《现代肿瘤医学》 CAS 2016年第19期3045-3048,共4页
目的:评价EB病毒(EBV)抗衣壳抗原VCA-IgA抗体、抗早期抗原EA-IgA抗体、抗立即早期抗原Rta-IgG抗体和EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法:收集160例初治鼻咽癌,133例症状相似的非鼻咽癌患者和163名健康体检者的血清和血浆。采用酶联... 目的:评价EB病毒(EBV)抗衣壳抗原VCA-IgA抗体、抗早期抗原EA-IgA抗体、抗立即早期抗原Rta-IgG抗体和EBV-DNA检测在鼻咽癌诊断中的价值。方法:收集160例初治鼻咽癌,133例症状相似的非鼻咽癌患者和163名健康体检者的血清和血浆。采用酶联免疫法检测血清VCA-IgA、EA-IgA和RtaIgG抗体的水平,用实时荧光定量PCR检测血浆EBV-DNA的相对含量。按鼻咽癌2008临床TNM分期法进行分期,计算不同分组、各临床分期以及鼻咽癌治疗前后的各抗体阳性率、抗体水平以及EB-DNA的检测结果并进行数据分析。结果:鼻咽癌组VCA-IgA、EA-IgA、Rta-IgG和EBV-DNA阳性率均高于鼻咽相关疾病组及健康对照组(均P<0.05)。血清VCA-IgA和EA-IgA结果相对A值(即r A或S/CO值)在Ⅰ、Ⅱ期低于Ⅲ、Ⅳ期,差异有统计学意义(P<0.05),但阳性率在各期间比较差异无统计学意义(P>0.05);Ⅰ、Ⅱ期患者Rta-IgG的r A值和阳性率明显低于Ⅲ、Ⅳ期患者(P<0.05);血浆中EBV-DNA阳性率及EBVDNA中位数水平随着临床分期的升高而增高,Ⅰ、Ⅱ期与Ⅲ、Ⅳ期比较差异有统计学意义(P<0.05)。治疗有效(CR+PR)患者的EBV-DNA含量明显低于治疗前水平(P<0.05)。结论:VCA-IgA、EA-IgA、RtaIgG、EBV-DNA检测有助于鼻咽癌的辅助诊断、临床分期预测及疗效评估。 展开更多
关键词 鼻咽癌 抗体 EB病毒DNA 实时荧光定量聚合酶反应
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联合检测EB病毒相关抗体和抗原对诊断鼻咽癌的价值 被引量:41
3
作者 罗耀凌 欧国萍 +3 位作者 池沛冬 梁永能 刘宇辉 黄马燕 《癌症》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2009年第1期96-99,共4页
背景与目的:近年来随着分子生物学的发展,提供了多项EB病毒(Epstein-Barr virus)相关的检测指标。本研究通过同时检测EB病毒VCA-IgA、EA-IgA、EBV-特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体、EB病毒DNA(EBV-DNA),评价联合检测对诊断鼻咽癌的价值。方... 背景与目的:近年来随着分子生物学的发展,提供了多项EB病毒(Epstein-Barr virus)相关的检测指标。本研究通过同时检测EB病毒VCA-IgA、EA-IgA、EBV-特异性DNA酶(EBV-DNase)抗体、EB病毒DNA(EBV-DNA),评价联合检测对诊断鼻咽癌的价值。方法:收集160例治疗前的鼻咽癌患者和76例健康成人的血清和血浆,应用免疫酶染色法检测血清VCA-IgA、EA-IgA;用正丁酸与巴豆油激发Raji细胞方法检测EBV-DNase抗体;用实时荧光定量聚合酶链反应(real-time fluorescence quantitative PCR,RQ-PCR)分析血浆EBV-DNA,评估其在诊断鼻咽癌中的价值。结果:单项检测时对鼻咽癌患者诊断的敏感性和特异性分别为:VCA-IgA90.0%、89.5%,EA-IgA75.0%、94.7%,EBV-DNase抗体76.3%、90.8%,EBV-DNA68.8%、88.2%。联合检测的敏感性和特异性分别为98.8%和84.2%。VCA-IgA、EA-IgA阳性率与临床分期无关(P﹥0.05),各临床分期中EBV-DNase抗体阳性率、EBV-DNA水平与阳性率的差异有统计学意义(P<0.05)。结论:VCA-IgA、EA-IgA、EBV-DNase和EBV-DNA单项检测时VCA-IgA敏感性最高,EA-IgA特异性最好;四项指标联合检测可提高鼻咽癌诊断的敏感性和准确度。EBV-DNase抗体、EBV-DNA有助于评估鼻咽癌病程和协助判断临床分期。 展开更多
关键词 鼻咽肿瘤 诊断 EBV-特异性DNA抗体 EB病毒DNA 实时荧光定量聚合酶反应
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乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系 被引量:34
4
作者 杨旭 罗红雨 +3 位作者 张永红 钱焕英 曾晓波 黄力 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 2002年第4期269-271,共3页
目的 探讨乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系,为乙型肝炎的诊治、预防提供科学依据。方法用实时荧光定量聚合酶链反应和ELISA检测HBV DNA和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式的HBV DNA量。结果 在HBsAg和HBeAg阳性模式中,HBV DNA... 目的 探讨乙型肝炎病毒载量与抗原抗体模式的关系,为乙型肝炎的诊治、预防提供科学依据。方法用实时荧光定量聚合酶链反应和ELISA检测HBV DNA和抗原抗体,统计分析不同抗原抗体模式的HBV DNA量。结果 在HBsAg和HBeAg阳性模式中,HBV DNA拷贝数>103/ml者占87.3%,其中>107/ml者占66.7%;在HBsAg阳性,抗-HBe阳性模式中,HBV DNA拷贝数<103/ml者占74.5%,>107/ml者占8.3%;在HBsAg阳性,抗-HBc阳性模式中,HBV DNA拷贝数>103/ml者占48.0%,>107/ml者占29.1%。HBeAg阳性模式HBV载量显著高于HBeAg阴性模式(P<0.01)。抗-HBe阴性模式 HBV载量显著高于抗-HBe阳性模式(P<0.01)。在HBsAg阴性模式中,HBV DNA拷贝数>103/ml占 7.9%,1例拷贝数高达1.59× 109/ml。结论HBeAe阳性模式HBV载量显著高于HBeAe阴性模式,抗-HBe阴性模式病毒载量显著高于抗-HBe阳性模式,HBeAg阳性模式中的少数人HBV载量很低,HBeAg阴性模式中少数人HBV载量很高,HBsAg阴性模式中少数人存在病毒复制,因此,对于一具体患者来说,根据抗原抗体模式,难以准确地判断病毒复制程度及其传染性的强弱。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒载量 抗原抗体模式 链免疫试验 实时荧光定量聚合酶反应 病毒复制
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实时荧光PCR技术的研究及其应用进展 被引量:21
5
作者 高斌 刘敬忠 《诊断学理论与实践》 2005年第6期507-509,共3页
关键词 实时荧光定量聚合酶反应 荧光标记探针 DNA结合染料 标准曲线
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自锁托槽与传统托槽对牙周指数和牙龈卟啉单胞菌影响的对比研究 被引量:28
6
作者 石晶 刘昱新 +3 位作者 侯景秋 闫征斌 彭惠 常星 《华西口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第3期228-231,共4页
目的对比正畸患者粘接自锁托槽与传统托槽后牙周指数和牙龈卟啉单胞菌的变化。方法将正畸患者30例按托槽类型分为2组,每组15例。试验组粘接Clippy自锁托槽,对照组粘接O-PAK传统直丝弓托槽。分别在矫治器戴入前,戴入后第1、3个月检查牙... 目的对比正畸患者粘接自锁托槽与传统托槽后牙周指数和牙龈卟啉单胞菌的变化。方法将正畸患者30例按托槽类型分为2组,每组15例。试验组粘接Clippy自锁托槽,对照组粘接O-PAK传统直丝弓托槽。分别在矫治器戴入前,戴入后第1、3个月检查牙周临床指标(包括菌斑指数、牙龈指数、探诊深度),同时采集龈下菌斑样本,利用实时荧光定量聚合酶链反应检测样本中牙龈卟啉单胞菌和总细菌的数量,计算出牙龈卟啉单胞菌的构成比。结果治疗前试验组与对照组牙周指数、牙龈卟啉单胞菌构成比差异无统计学意义(P>0.05)。治疗中,2组牙周指数、牙龈卟啉单胞菌构成比均随时间延长而升高(P<0.05);试验组在粘接矫治器后第1、3个月,牙周指数、牙龈卟啉单胞菌构成比均低于对照组(P<0.05)。结论与传统托槽对比,自锁托槽更利于口腔卫生维护,但仍会对口腔卫生造成不利影响。 展开更多
关键词 自锁托槽 传统托槽 牙周指数 牙龈卟啉单胞菌 实时荧光定量聚合酶反应
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TNF-α对肠上皮细胞紧密连接蛋白表达的作用 被引量:19
7
作者 崔巍 刘冬妍 +1 位作者 马力 刘沛 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2007年第16期1788-1793,共6页
目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/ L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长... 目的:研究肿瘤坏死因子α(TNF-α)对肠上皮细胞紧密连接蛋白claudin-1定位和表达的影响,探讨TNF-α增加肠上皮细胞屏障通透性的作用机制.方法:Caco-2细胞(20-30代)应用含有2 mmol/ L谷氨酰胺、20%胎牛血清的DMEM培养液培养7d,细胞生长达到融合后加入不同浓度的TNF-α(0,10,100μg/L)继续培养24h,提取细胞蛋白制备NP-40可溶性及不溶性蛋白框架,Western blot检测磷酸化和非磷酸化的claudin-1蛋白含量,并应用间接免疫荧光法检测claudin-1的定位,实时定量PCR技术检测claudin-1 mRNA的表达.结果:免疫荧光染色可见对照组claudin-1沿细胞膜分布,呈蜂巢状线性荧光,10μg/L TNF-α引起claudin-1荧光信号减弱,并呈锯齿状异常分布;Western blot分析显示claudin-1蛋白有两种表达形式,一种为20 kDa(非磷酸化claudin-1),主要存在于NP-40可溶性蛋白样品中;另一种为25 kDa(磷酸化claudin-1),只存在于NP-40不溶性蛋白样品中.TNF-α不影响20 kDa claudin-1蛋白的表达,但可使25 kDa claudin-1蛋白表达下降且具有浓度依赖性(10,100μg/L:0.31±0.02.0.24±0.05 vs 0.43±0.09 P>0.05,P<0.05);实时定量PCR结果显示不同浓度的TNF-α(10,100μg/L)作用24h或100μg/L TNF-α作用不同时间(4,8和24h)与正常对照组相比均不能引起claudin-1 mRNA的改变.结论:TNF-α对Caco-2细胞紧密连接蛋白claudin-1 mRNA的表达没有影响,但可以引起有功能的磷酸化claudin-1蛋白表达减少. 展开更多
关键词 肿瘤坏死因子-Α 紧密连接蛋白CLAUDIN-1 CACO-2细胞 免疫荧光 免疫印迹 实时定量聚合酶链式反应
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DLC-1基因表达与肝细胞癌复发转移的关系 被引量:21
8
作者 宋丽杰 叶胜龙 +6 位作者 王凯峰 翁永强 梁春敏 孙瑞霞 赵燕 刘银坤 汤钊猷 《中华肝脏病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期428-431,共4页
目的已报道人类染色体8p缺失可能与肝癌转移有关,本文应用实时定量聚合酶链反应(RQ- PCR)研究位于8p的DLC-1基因mRNA表达与肝细胞癌侵袭转移的关系。方法收集51例复旦大学中山医院外科手术切除的肝细胞癌(HCC)及癌旁正常组织标本,根据... 目的已报道人类染色体8p缺失可能与肝癌转移有关,本文应用实时定量聚合酶链反应(RQ- PCR)研究位于8p的DLC-1基因mRNA表达与肝细胞癌侵袭转移的关系。方法收集51例复旦大学中山医院外科手术切除的肝细胞癌(HCC)及癌旁正常组织标本,根据临床病理学指标,分为高低侵袭性两组,用RQ-PCR对不同侵袭性HCC之间的DLC-1基因表达进行分析。对不同侵袭转移潜能MHCC97-L、MHCC97-H、HCCLM3、Hep3B及HepG2肝癌细胞系用同样方法分析DLC-1基因的表达差异。结果非转移细胞系Hep3B和HepG2与转移细胞系MHCC97-L、MHCC97-H和HCCLM3之间DLC—1基因表达差异有统计学意义(P<O.01),并随着侵袭与转移潜能的逐步提高DLC-1表达水平也相应逐步降低;HCCLM3 细胞系显著低于MHCC97-L细胞系(P<0.01)。HCC组织中,高侵袭性HCC组DLC-1基因表达明显低于低侵袭性HCC组(P<0.05)。结论DLC-1基因表达与肝癌的侵袭转移的抑制相关,其表达可能在抑制肝癌的侵袭转移中发挥重要作用。 展开更多
关键词 肝细胞癌 复发转移 MHCC97-L MHCC97-H 实时定量聚合酶反应 HCCLM3 基因mRNA表达 HepG2 Hep3B 侵袭转移 外科手术切除 RQ-PCR 基因表达差异 低侵袭性 转移潜能 染色体8P 病理学指标 肝癌细胞系 肝癌转移 组织标本 中山医院
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实时荧光聚合酶链反应结合融解曲线分析在α-地中海贫血基因诊断中的价值 被引量:12
9
作者 刘敬忠 闫梅 +3 位作者 王立荣 王战勇 周艳 肖白 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第8期858-861,共4页
目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α地中海贫血基因型的技术。方法运用SYBRGreen1和ABI7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBRQPCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型... 目的建立自动化、高通量、准确快速检测缺失型α地中海贫血基因型的技术。方法运用SYBRGreen1和ABI7000热循环仪分别进行3个实时荧光定量聚合酶链反应(SYBRQPCR),同时进行融解曲线(D.C)和Tm值分析,根据特定Tm值对应的D.C峰值判定基因型,即以该峰值≥Cutoff值定为PCR结果阳性。将PCR产物重组到T载体,筛选到含正确扩增片段的克隆,以梯度稀释重组质粒DNA为模板,进行SYBRQPCR得出标准曲线。从而定量未知标本。结果优化了3个SYBRQPCR反应的引物及其浓度,热循环条件等。检测SEA等位基因的PCR产物长800bp,Tm=82.5℃±1℃。αα等位基因的PCR产物长206bp,Tm=83.0℃±1℃。非SEA等位基因的PCR产物长436bp,Tm=84.0℃±1℃。重组质粒拷贝数在1至105范围内,其对数值与CT值均呈良好线性关系。该检测技术的灵敏度较常规PCR结合琼脂糖凝胶电泳法高出16倍以上。联合运用3个SYBRQPCR反应可以为SEA缺失携带者、缺失型HbH病、非缺失型HbH病、α地贫2纯合子、Bart′s水肿胎儿综合征做出基因诊断,并可用于产前诊断。结论该技术具有自动化程度高、不需荧光标记探针、成本低、易质控、防污染、高通量等优点,适于临床推广应用。 展开更多
关键词 实时聚合酶反应 Α-地中海贫血 缺失型Α-地中海贫血 实时荧光聚合酶反应 基因诊断 曲线分析 实时荧光定量聚合酶反应 融解 重组质粒DNA 缺失型HbH病
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耐碳青霉烯鲍曼不动杆菌临床分离株的流行病学与耐药机制研究 被引量:22
10
作者 张广慧 曹雪萍 +2 位作者 俞静 刘瑛 葛艳 《检验医学》 CAS 2015年第1期53-57,共5页
目的了解耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌流行病学情况以及耐药机制,帮助临床合理使用抗菌药物,为控制医院感染提供依据。方法收集耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌110株及敏感株6株,进行来源病区和标本种类的统计分析;应用重复... 目的了解耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌流行病学情况以及耐药机制,帮助临床合理使用抗菌药物,为控制医院感染提供依据。方法收集耐碳青霉烯类抗菌药物的鲍曼不动杆菌110株及敏感株6株,进行来源病区和标本种类的统计分析;应用重复序列聚合酶链反应(REP-PCR)进行基因型分型;使用PCR检测β-内酰胺酶基因(OXA、IMP、VIM等)及外排泵编码基因(ade A、ade B、ade C、ade J、ade G)的携带情况;采用实时荧光定量PCR对比耐药菌株与敏感菌株的外排泵基因表达量的差异。结果 110株菌株主要来自痰标本,重症监护病房(ICU)分离率最高;所有菌株REP-PCR电泳图谱分为A^G 7型,110株耐药菌株均为A型,且均被检测到含有OXA-23、OXA-51基因,均未检测到含有OXA-24、OXA-58、IMP-1、IMP-2、VIM-1、VIM-2基因;外排泵编码基因ade A、ade B、ade C、ade J及ade G的阳性率均为100%;耐药菌株外排泵编码基因ade A、ade B、ade C表达量明显高于敏感菌株。结论耐碳青霉烯类鲍曼不动杆菌的流行型别基本相同,均为A型,应引起临床医护人员的高度重视;β-内酰胺酶基因(OXA-23、OXA-51)的表达以及外排泵基因(ade A、ade B、ade C)的过度表达与其对碳青霉烯类抗菌药物的耐药性有关。 展开更多
关键词 鲍曼不动杆菌 Β-内酰胺 外排泵 重复序列聚合酶反应 实时荧光定量聚合酶反应
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3种肺炎支原体感染检测方法的临床效果比较 被引量:21
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作者 王佳贺 牛慧彦 +2 位作者 白雪 李岩 何平 《新乡医学院学报》 CAS 2011年第1期51-53,共3页
目的比较实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法、培养-增强套式PCR(培养-增强nPCR)法和培养法检测肺炎支原体感染的临床应用价值。方法分别采用实时FQ-PCR法、培养-增强nPCR法和培养法对临床诊断为肺炎支原体肺炎和疑似肺炎支原体肺炎的9... 目的比较实时荧光定量聚合酶链反应(FQ-PCR)法、培养-增强套式PCR(培养-增强nPCR)法和培养法检测肺炎支原体感染的临床应用价值。方法分别采用实时FQ-PCR法、培养-增强nPCR法和培养法对临床诊断为肺炎支原体肺炎和疑似肺炎支原体肺炎的97例患儿的咽拭子标本进行检测。结果实时FQ-PCR法检测的阳性率明显高于培养法(P<0.001),实时FQ-PCR法的检出率和培养-增强nPCR法比较无显著差别(P>0.05),但实时FQ-PCR法更加简便、快速。结论实时FQ-PCR法较培养-增强nPCR法和培养法更适用于肺炎支原体的早期快速诊断。 展开更多
关键词 肺炎支原体 实时荧光定量聚合酶反应 套式聚合酶反应 培养法
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外周血与尿PCA3基因表达和尿PCA3评分在前列腺癌诊断中的意义 被引量:21
12
作者 刘龙亚 温端改 +3 位作者 何军 侯健全 岑建农 浦金贤 《中华泌尿外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期278-281,共4页
目的 探讨外周血、尿液中PCA3和PSA基因表达在前列腺癌诊断中的应用价值。方法2009年6月至12月因前列腺疾病住院患者105例,收集前列腺按摩后的初始尿液和外周血标本,经病理证实前列腺癌37例、BPH68例;8例泌尿系结石患者作为正常对照... 目的 探讨外周血、尿液中PCA3和PSA基因表达在前列腺癌诊断中的应用价值。方法2009年6月至12月因前列腺疾病住院患者105例,收集前列腺按摩后的初始尿液和外周血标本,经病理证实前列腺癌37例、BPH68例;8例泌尿系结石患者作为正常对照。应用实时定量PCR检测尿沉渣、外周血单个核细胞中PCA3、PSAmRNA表达,以Bactin为内参照。结果外周血PCA3的mRNA表达敏感性为48.6%,特异性为100%。尿PCA3评分经ROC曲线分析,ROC—AUC=0.908,以截断值64.6为诊断前列腺癌的临界值,前列腺癌患者中尿PCA3阳性率为81.1%,BPH患者中尿PCA3阴性率为86.8%。5例血清tPSA〈4μg/L前列腺癌患者,尿PCA3评分诊断前列腺癌4例;3例血清tPSA4~10I.zg/L前列腺癌患者,尿PCA3评分诊断前列腺癌2例;29例血清tPSA〉10Ixg/L前列腺癌患者,尿PCA3评分诊断前列腺癌24例(82.8%)。22例血清tPSA〈4Ixg/LBPH者,PCA3评分诊断阴性率为89.4%(20/22);19例血清tPSA4~10μg/LBPH者中,PCA3评分诊断阴性率为84.2%(16/19);27例血清tPSA〉10Ixg/LBPH者中,PCA3评分诊断阴性率为81.5%(22/27)。尿PCA3评分、外周血PCA3联合检测的敏感性为86.5%,高于两者单独测定。结论外周血中的PCA3mRNA表达是诊断前列腺癌的特异性指标,尿PCA3评分联合检测外周血中PCA3基因表达可以提高前列腺癌的诊断敏感性。 展开更多
关键词 前列腺癌基因3 前列腺特异抗原基因 尿前列腺癌基因3评分 前列腺癌 实时定量聚合酶反应
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中医“血分论治”对寻常型银屑病患者外周血单个核细胞IFN-γ/IL-4表达影响的实验研究 被引量:17
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作者 李斌 王婕 +2 位作者 范斌 李福伦 顾荻青 《上海中医药杂志》 北大核心 2007年第11期5-6,共2页
目的从T细胞免疫角度探讨从"血分论治"寻常型银屑病的作用机制。方法选择32例寻常型银屑病患者(血热证组17例,血瘀证组15例),以10例健康人为对照,提取、体外培养外周血单一核细胞(PBMC);选取清洁级雄性Wistar大鼠,制作灌胃清... 目的从T细胞免疫角度探讨从"血分论治"寻常型银屑病的作用机制。方法选择32例寻常型银屑病患者(血热证组17例,血瘀证组15例),以10例健康人为对照,提取、体外培养外周血单一核细胞(PBMC);选取清洁级雄性Wistar大鼠,制作灌胃清热凉血方和益气活血方血清。采用实时荧光定量聚合酶链反应方法(FQ-PCR)分别观察不同中药血清刺激前后PBMC中IFN-γ/IL-4mRNA的表达变化情况。结果中药干预后,血热证(进行期)组IL-4mRNAIFN-γmRNA和血瘀证(静止期)组表达水平均明显下降(P<0.05)。结论从"血分论治"寻常型银屑病可通过调节IFN-γ/IL-4的平衡发挥治疗作用。 展开更多
关键词 寻常型银屑病 从血分论治 干扰素-γ/白介素4 实时荧光定量聚合酶反应
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高通量测序技术在传统发酵食品微生物群落中的应用研究 被引量:20
14
作者 夏梦雷 杨帆 +3 位作者 陆锴 王頔 郑宇 王敏 《中国酿造》 CAS 北大核心 2021年第5期1-7,共7页
传统发酵食品风味独特,营养丰富,历史悠久,生产方式多采用自然接种,部分食品的生产工艺已有数千年的历史,其最终质量与发酵过程中存在的多种微生物密切相关。研究表明,运用现代分子生物学技术,可从基因水平上揭示微生物的多样性和群落... 传统发酵食品风味独特,营养丰富,历史悠久,生产方式多采用自然接种,部分食品的生产工艺已有数千年的历史,其最终质量与发酵过程中存在的多种微生物密切相关。研究表明,运用现代分子生物学技术,可从基因水平上揭示微生物的多样性和群落结构的动态变化,系统阐明其发酵机理。该文综述高通量测序技术在传统发酵食品微生物群落中的应用研究,对聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)、实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-FQPCR)、宏基因组、宏转录组测序等研究方法的原理、操作方法及其研究成果进行了总结,并对各分析技术优缺点进行了比较,旨在为传统发酵食品的微生物群落研究提供参考。 展开更多
关键词 高通量测序技术 传统发酵食品 微生物群落 聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳 实时荧光定量聚合酶链式反应 宏基因组测序技术 宏转录组测序技术
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活动期与缓解期溃疡性结肠炎患者黏膜主要菌群研究 被引量:19
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作者 曹卉 王伟 +2 位作者 卢锐锋 胥欣 陈立平 《中华实验外科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期1109-1112,共4页
目的 比较活动期与缓解期溃疡性结肠炎(UC)之间的黏膜微生态(MAM).方法 收集21例正常对照、41例活动期UC和9例缓解期UC的结、直肠黏膜.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测MAM主要菌群的数量.结果 与健康对照比较,UC黏... 目的 比较活动期与缓解期溃疡性结肠炎(UC)之间的黏膜微生态(MAM).方法 收集21例正常对照、41例活动期UC和9例缓解期UC的结、直肠黏膜.采用实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测MAM主要菌群的数量.结果 与健康对照比较,UC黏膜总菌数无显著改变.球形梭菌(C.coccoides)、普拉梭菌在(F.prausnitzii)活动、缓解期UC结肠和直肠溃疡中显著减少(8%比22%,10%比22%,10%比22%,10%比22%,P<0.05;4%比13%,7%比13%,4%比13%,4%比13%,P<0.05).柔嫩梭菌(C.leptum)在活动、缓解期结肠溃疡,活动期直肠溃疡与非溃疡中显著减少(9%比22%,11%比22%,9%比22%,16%比22%,P<0.05).大肠杆菌(E.coli)在活动、缓解期结肠溃疡以及活动期直肠溃疡与非溃疡中显著增加(21%比6%,21%比6%,P<0.05;11%比6%,21%比6%,P<0.05).缓解期结肠C.leptum显著高于活动期结肠(11%比9%,P <0.05),缓解期直肠普氏菌属(Prevotella)数量显著高于活动期直肠(2%比0%,P<0.01).结论 活动与缓解期UC的MAM与健康对照不同,活动与缓解期之间黏膜主要菌群差异无统计学意义;MAM益生菌的减少及条件致病菌的增多,提示它们可能参与UC的发病与炎症的维持. 展开更多
关键词 溃疡性结肠炎 黏膜微生态 实时定量聚合酶反应
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实时荧光定量PCR在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌中的应用评估 被引量:19
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作者 陈旭 肖淑珍 +4 位作者 董丹凤 杨海慧 李生香 倪语星 韩立中 《检验医学》 CAS 2012年第12期1035-1039,共5页
目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实... 目的评价实时荧光定量聚合酶链反应(PCR)在快速检测耐甲氧西林金黄色葡萄球菌(MRSA)中的应用。方法采用头孢西丁纸片扩散法和mecA基因PCR检测法,将85株临床分离的金黄色葡萄球菌区分为MRSA和甲氧西林敏感金黄色葡萄球菌(MSSA),并采用实时荧光定量PCR对这些菌株进行检测,评价MRSA检测中实时荧光定量PCR与目前常规检测方法的一致性。结果根据头孢西丁纸片扩散法和mecA基因扩增结果进行分组,85株金黄色葡萄球菌中MRSA组菌株45株,MSSA组菌株40株;实时荧光定量PCR检测结果与上述结果完全一致,符合率为100%。结论实时荧光定量PCR检测MRSA的结果与常规方法一致性好,且具有操作简便、耗时短等特点。作为一种快速检测方法,实时荧光定量PCR能将金黄色葡萄球菌的鉴定和MRSA的筛选结合起来,对于指导临床用药及MRSA医院感染控制具有重要意义。 展开更多
关键词 金黄色葡萄球菌 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌 实时荧光定量聚合酶反应 快速检测
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中药WCA对人胃癌细胞SGC-7901体内作用基因的筛选与验证 被引量:16
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作者 赵爱光 杨金坤 +4 位作者 尤圣富 李婷 赵海磊 顾缨 唐莱娣 《中国中药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第19期2028-2036,共9页
目的:探讨以四君子汤等健脾中药为基础的复方胃肠安(WCA)对胃癌细胞的体内作用分子机制。方法:采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型系统评价WCA对胃癌细胞的体内抑瘤作用;链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP法)检测增殖细胞核抗原PCN... 目的:探讨以四君子汤等健脾中药为基础的复方胃肠安(WCA)对胃癌细胞的体内作用分子机制。方法:采用人胃癌细胞SGC-7901裸小鼠皮下移植瘤模型系统评价WCA对胃癌细胞的体内抑瘤作用;链霉素抗生物素-过氧化酶法(SP法)检测增殖细胞核抗原PCNA表达,末端脱氧核苷酸转移酶介导的dUTP缺口末端标记(TUNEL法)检测凋亡指数以及SP法检测caspase-3的活化表达;cDNA array筛选出WCA组N.S.对照组差异表达2倍以上基因,Real-tim e Quantitative PCR验证与增殖、凋亡、分化及信号转导密切相关的19条基因的表达;SP法检测部分有差异表达的基因在细胞内的蛋白表达。结果:与对照组比较,WCA组对皮下移植瘤生长的平均抑制率为(44.32+5.67)%,3次实验WCA组的平均瘤重分别为(0.99±0.76),(1.02±0.16),(0.88±0.47)g,分别低于对照组的(1.93±0.58),(1.65±0.46),(1.63±0.52)g(P<0.05);WCA组移植瘤PCNA阳性表达率(35.73±6.01)%、强阳性表达率(3.39±1.48)%和总阳性率(39.03±7.37)%均分别低于对照组的(53.48±9.34)%,(8.78±5.43)%,(62.26±13.80)%(P<0.05);凋亡指数为(9.72±4.51)%高于对照组的(2.45%±1.37)%(TUNEL法);WCA组活化caspase-3表达阳性率为(5.20±2.26)%,较对照组的(2.82±1.84)%高(P=0.0367);与对照组比较,全基因表达谱芯片筛选出WCA组共45个2倍以上差异表达基因,其中上调表达24个,下调表达21个。35个已克隆基因,10个表达序列标签(expression sequence tag,EST);2-ΔΔCT法对19条目标基因的表达量进行评估,与对照组比较,表达量显著差异4倍以上的有Stat3(2-ΔΔCT=0.16),R IPX(2-ΔΔCT=0.18),ROD1(2-ΔΔCT=0.23),bc l-2(2-ΔΔCT=0.10),均为下调表达作用;WCA组P-Stat3阳性表达率(35.93±12.67)%、强阳性表达率(3.64%±1.72)%和总阳性率(39.57±13.31)%均分别低于对照组的(56.49±9.34)%,(13.16±7.06)%,(69.65±10.80)%,差异有显著性;bc l-2蛋白阳性表达率(1.62±0.82)%低于对照组的(7.53±3.73)%(P<0.05)。结论:健脾中药复方WCA在� 展开更多
关键词 胃癌 健脾中药 基因表达 CDNA微阵列 实时定量聚合酶反应
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系统性红斑狼疮与肠道菌群的相关研究 被引量:17
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作者 李苗 付冰冰 +2 位作者 吴霞 胡泽昆 孙晓鹏 《新医学》 2016年第11期735-741,共7页
目的探讨SLE与肠道菌群、炎症因子及疾病活动度之间的关系,以及经糖皮质激素(激素)联合羟氯喹治疗后三者的变化及其治疗作用机制。方法选择25名健康体检者(正常对照组)及30例初诊SLE患者(SLE组),后者接受为期3个月的激素联合羟氯喹治疗... 目的探讨SLE与肠道菌群、炎症因子及疾病活动度之间的关系,以及经糖皮质激素(激素)联合羟氯喹治疗后三者的变化及其治疗作用机制。方法选择25名健康体检者(正常对照组)及30例初诊SLE患者(SLE组),后者接受为期3个月的激素联合羟氯喹治疗,分别收集正常对照组及SLE组患者治疗前后的粪便标本,应用SYBR Green I实时荧光定量PCR对大肠埃希菌、双歧杆菌、乳酸杆菌定量,同时应用ELISA法对外周血中IL-17、转化生长因子-β(TGF-β)的表达水平进行检测,并行SLE疾病活动指数(SLEDAI)评价SLE患者的病情活动程度。结果与正常对照组相比,治疗前SLE患者大肠埃希菌数较多(P<0.01),双歧杆菌、乳酸杆菌数较少(P均<0.01);外周血中IL-17水平较高(P<0.05),且与SLEDAI评分呈正相关(r=0.699,P<0.05);TGF-β水平下降(P<0.05),且与乳酸杆菌的数量呈正相关(r=0.416,P<0.05)。与治疗前相比,激素联合羟氯喹治疗3个月后SLE患者粪便中双歧杆菌、乳酸杆菌数减少(P均<0.05),大肠埃希菌数无明显变化(P>0.05);SLE患者SLEDAI评分降低(P<0.05),血清IL-17水平下降(P<0.01)、但仍高于正常对照组(P<0.01),TGF-β水平升高(P<0.01)、但仍低于正常对照组(P<0.05)。结论 SLE患者存在较明显的肠道菌群失调状态。激素联合羟氯喹治疗可改善SLE患者的病情,但同时可能会进一步加重肠道菌群失调状态。IL-17及TGF-β等炎症因子可能参与SLE的发病及治疗作用机制。SLE状态下,乳酸杆菌与TGF-β可能有关。 展开更多
关键词 系统性红斑狼疮 肠道菌群 糖皮质激素 羟氯喹 实时荧光定量聚合酶链式反应
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实时荧光定量PCR法测定发酵乳中双歧杆菌 被引量:17
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作者 吴燕涛 刘晓莉 +1 位作者 曹悦 王立平 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2013年第8期172-175,共4页
对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以... 对实时荧光定量聚合酶链式反应(PCR)技术检测发酵乳中双歧杆菌的DNA提取方法、PCR扩增效率、标准曲线绘制进行探讨,通过比较分析碱式提取法、玻璃珠破碎法和酶解法3种提取方法对发酵乳中总DNA提取效率、4种不同参考菌株的PCR扩增效率以及单一菌株标准曲线与混合菌株标准曲线的计数结果,建立实时荧光定量PCR快速测定发酵乳制品中双歧杆菌数量方法。结果表明:酶解法提取发酵乳中总DNA效果最好,OD260/280比值基本接近1.80,且提取的质量浓度含量最高;不同菌株的PCR扩增效率不同,其中参考菌株1.2213的Ct值与其他3菌株的Ct值存在显著性差异;根据单一菌株绘制标准曲线与混合菌株绘制标准曲线计数结果无显著性差异,后者计数结果更客观、准确。采用酶解法获取样品中的菌体细胞,基于混合菌液绘制标准曲线,采用实时荧光定量PCR技术确定发酵乳中双歧杆菌种属数量,可快速、准确地测定发酵乳中双歧杆菌的数量。 展开更多
关键词 发酵乳 双歧杆菌 实时荧光定量聚合酶链式反应
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黄芪多糖联合顺铂对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移的影响 被引量:16
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作者 明海霞 陈彦文 +4 位作者 张帆 王强 李杨 郭超 胡永浩 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第4期493-501,共9页
目的观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移、核因子(NF)-κB、P38、P53及Caspase-9表达的影响。方法将90只Lewis小鼠随机分为模型组、顺铂组(6mg/kg DDP)、APS组(50、100、200)mg/kg,联合用药组[1/2 DDP+APS,即:(3... 目的观察黄芪多糖(APS)联合顺铂(DDP)对小鼠Lewis肺癌细胞肺转移、核因子(NF)-κB、P38、P53及Caspase-9表达的影响。方法将90只Lewis小鼠随机分为模型组、顺铂组(6mg/kg DDP)、APS组(50、100、200)mg/kg,联合用药组[1/2 DDP+APS,即:(3+25、3+50、3+100)mg/kg]。各组均于造模第2天起用药,APS每日1次,DDP每周1次,连续20d。观察肿瘤肺转移情况,采用Real-time PCR法和Western blotting法检测肿瘤组织中NF-κB、P38、P65蛋白和基因,并用免疫组织化学检测Caspase-9的表达。结果与模型组相比,各治疗组均可降低肺转移灶数目(P<0.05或P<0.01);除P38外,APS中、高剂量组可使小鼠Lewis肺癌组织中NF-κB p65、P53表达降低,Caspase-9表达增高;联合用药高剂量组作用则接近DDP组。结论 APS可抑制小鼠Lewis肺癌细胞的转移,抑制NF-κB和丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)信号通路的激活,这可能是其抑制肿瘤转移的机制之一;APS与减半剂量的DDP铂类化疗药物联合使用时,作用增强,APS对DDP有增效减毒作用。 展开更多
关键词 黄芪多糖 LEWIS肺癌细胞 肺转移 实时定量聚合酶反应 免疫印迹法 小鼠
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