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禽流感病毒夹心ELISA快速检测方法的研究 被引量：22
1
作者 肖运才 李自力 +6 位作者 胡思顺 石德时 许青荣 程峰 刘梅 毕丁仁 王桂枝 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第5期536-541,共6页
以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗A... 以禽流感病毒(AIV)湖北分离株(H9N2亚型)提纯物为免疫原,制备出鸡抗AIV和兔抗AIV抗体,经用琼脂扩散法测得效价分别为1∶32和1∶16。以纯化的鸡抗AIVIgG为包被抗体,兔抗AIVIgG为第二抗体,建立了检测AIV抗原的夹心ELISA法。结果表明,鸡抗AIVIgG的最佳包被浓度为1μg/mL,兔抗AIVIgG的最适工作浓度为5μg/mL;对已知的阳性样品,用夹心ELISA法测得的病毒滴度比血球凝集滴度高16倍以上,且能检出其它亚型的禽流感病毒;与新城疫病毒、传染性支气管炎病毒、减蛋综合征病毒、传染性喉气管炎病毒、传染性法氏囊病病毒、鸡痘病毒、马立克氏病病毒等无交叉反应,说明本方法有很高的特异性及敏感性。对14个鸡场送检的、患有呼吸道疾病或有腹膜炎、眼炎、产蛋下降、怀疑为禽流感感染的病鸡进行了检测,结果有7个鸡场为阳性。本方法的建立为禽流感病鸡群的临床检验提供了一种方便、敏感、快速的检测方法。 展开更多
关键词 禽流感病毒 夹心elisa 快速检测方法 禽流感
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ELISA法检测犬腹泻粪样中的犬冠状病毒 被引量：17
2
作者 张伯强 陆承平 陈怀青 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1997年第5期437-439,共3页
用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ... 用ＦＥ细胞增殖犬冠状病毒（ＣＣＶ）参考株，分别免疫家兔和ＢＡＬＢ／ｃ小鼠制备ＣＣＶ多抗和单抗，建立了夹心ＥＬＩＳＡ及Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ诊断方法。在检测的８４例犬腹泻粪样中，多抗、单抗夹心法显示ＣＣＶ阳性１６例，Ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ阳性１３例，后１３例包括在前１６例中。从８４例腹泻犬粪样中随机取３８例作ＣＣＶ、犬细小病毒（ＣＰＶ）双项检测，ＣＣＶ阳性１６例，ＣＰＶ阳性６例，ＣＣＶ、ＣＰＶ混合感染４例。结果显示，在南京地区流行的犬腹泻中，ＣＣＶ感染比例有超过ＣＰＶ的趋势。 展开更多
关键词 犬冠状病毒 夹心elisa DOT-elisa
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逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)检测轮状病毒 被引量：14
3
作者 倪艳秀 林继煌 +2 位作者 陆承平 江杰元 何孔旺 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 1998年第5期437-440,共4页
为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段，选取Ａ组轮状病毒ＶＰ７基因上的２段高度保守序列作为引物，在优化逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）条件的基础上，建立了检测轮状病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。通... 为了给轮状病毒感染的诊断和流行病学研究提供更为敏感和可靠的手段，选取Ａ组轮状病毒ＶＰ７基因上的２段高度保守序列作为引物，在优化逆转录－聚合酶链反应（ＲＴ－ＰＣＲ）条件的基础上，建立了检测轮状病毒的ＲＴ－ＰＣＲ方法。通过对比试验，确定了ＰＣＲ的最优模式：９４℃变性１ｍｉｎ→５５℃退火１ｍｉｎ→７２℃延伸２ｍｉｎ，３０个循环后再在７２℃下延伸１０ｍｉｎ。用此模式进行了ＲＴ－ＰＣＲ的特异性和敏感性试验。检测的６株轮状病毒分离株（牛ＨＮ－７、ＢＲＶ００７、ＢＲＶ０１４、ＢＲＶ６５５５、猪Ｌｉ９９、Ｎａｎ８６）及２株参考株（牛ＮＣＤＶ、猴ＳＡ１１），都能扩增出唯一的３４２ｂｐ的目的条带；对猪流行性腹泻病毒（ＰＥＤＶ）及传染性胃肠炎病毒（ＴＧＥＶ）感染猪的粪样、正常ＭＡ１０４细胞检测结果均呈阴性；检测的敏感度可达１ｐｇ水平。对４０份猪、牛、兔的腹泻粪样检测，３０份呈阳性，而用作平行对照的夹心ＥＬＩＳＡ法检测，有２５份呈阳性，两者符合率为８７．５％。两法检测不符的５份粪样的ＰＣＲ扩增产物，用地高辛标记探针进行了斑点杂交，结果均呈阳性，表明ＲＴ－ＰＣＲ法比ＥＬＩＳＡ法敏感性高。 展开更多
关键词 轮状病毒 夹心elisa PT-PCR 检测
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夹心ELISA方法检测生肉混合物中的猪肉成分的研究 被引量：18
4
作者 骆训国 栗绍文 +5 位作者 周蕾蕾 赵苏红 皮远鹏 王倩 孟宪荣 毕丁仁 《动物医学进展》 CSCD 北大核心 2010年第S1期20-22,共3页
肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体,以猪IgG作为检测标志物,建立了检测猪肉成分的夹心ELISA方法。单抗最佳包被浓度为1μg/mL,酶标抗体最佳浓度为1∶5 000稀释。结果混合物中猪肉掺杂... 肉品掺假的鉴别是影响食品安全的一个重要问题。采用抗猪IgG-Fc单克隆抗体作为捕获抗体,以猪IgG作为检测标志物,建立了检测猪肉成分的夹心ELISA方法。单抗最佳包被浓度为1μg/mL,酶标抗体最佳浓度为1∶5 000稀释。结果混合物中猪肉掺杂仅为1%时,有明显反应。该方法具有快速、简便、灵敏度高、特异性强等优点。 展开更多
关键词 夹心elisa 检测 猪肉 IGG
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可溶性PTA1分子的发现及其检测方法的建立 被引量：10
5
作者 贾卫 金伯泉 +2 位作者 李琦 闵密克 刘雪松 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 2000年第4期282-284,共3页
目的建立检测sPTA1的方法 ,探讨正常人和肿瘤患者血清中是否存在可溶性PTA1(sPTA1)分子。方法以亲和层析法从血小板纯化的天然PTA1分子作为免疫原 ,制备抗PTA1分子的多克隆抗体(PcAb) ,并以此建立检测sP TA1的双抗体夹心ELISA法。结果... 目的建立检测sPTA1的方法 ,探讨正常人和肿瘤患者血清中是否存在可溶性PTA1(sPTA1)分子。方法以亲和层析法从血小板纯化的天然PTA1分子作为免疫原 ,制备抗PTA1分子的多克隆抗体(PcAb) ,并以此建立检测sP TA1的双抗体夹心ELISA法。结果建立的双抗体夹心ELISA法敏感性达100ng/L,应用此方法从经TPA ,PHA及抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sPTA1。与膜型PTA1(mPTA1)分子表达的动态相关研究发现,sPTA1的产生晚于mPTA1分子的表达 ,且可持续存在。检测60例正常人血清sPTA1的水平为(36.2±4.5)μg/L ,16例肿瘤患者为(57.3±5.0)μg/L。血清中sPTA1相对分子质量(Mr)约为50000。结论首次发现sPTA1分子 ,建立了具有较高敏感性和特异性的检测sPTA1的方法 ,为进一步深入研究PTA1分子的生物学功能提供了新的手段。 展开更多
关键词 夹心elisa PTA1 可溶性粘附分子
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单抗夹心ELISA检测李斯特氏菌方法的建立及其初步应用 被引量：13
6
作者 焦新安 范红洁 +2 位作者 文其乙 刘秀梵 张如宽 《肉品卫生》 1996年第6期1-2,共2页
本研究以李斯特氏菌属特异单抗为核心试剂，建立了快速检测该的单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验，该法敏感。特异，且检测时间缩短来２－４天，对李斯特氏菌的最低检测 为１０＾６ｃｆｕ／ｍｌ。经对实际样品的初步检测结果显示，具有重要应用... 本研究以李斯特氏菌属特异单抗为核心试剂，建立了快速检测该的单抗夹心ＥＬＩＳＡ试验，该法敏感。特异，且检测时间缩短来２－４天，对李斯特氏菌的最低检测 为１０＾６ｃｆｕ／ｍｌ。经对实际样品的初步检测结果显示，具有重要应用价值。 展开更多
关键词 李斯特氏菌 单抗 夹心elisa 检测 肉制品
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双抗夹心ELISA法及荧光抗体法检测猪瘟抗原的应用与分析 被引量：12
7
作者 曹兴萍 张以芳 +2 位作者 何从忠 高自寿 饶梅 《中国兽医杂志》 CAS 北大核心 2008年第1期66-67,共2页
关键词 夹心elisa 猪瘟病毒 elisa法 检测法 荧光抗体法 应用 抗原 VIRUS
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牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒的研制与评价 被引量：12
8
作者 李昕 徐正中 +7 位作者 单法 夏爱鸿 孟闯 沈也驰 陈义平 南文龙 陈祥 焦新安 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期1060-1065,共6页
目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对96... 目的研制一种牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒,并在奶牛结核病检疫中进行初步应用和评价。方法建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,基于此法试制3批试剂盒,并对试剂盒的灵敏度、可重复性和保存期进行评价,其后进行初步应用,对961头奶牛采用单纯颈部皮试变态反应、商品化BOVIGAMTM试剂盒与试制的牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测试剂盒进行同步检测。结果该试剂盒对质控样品的最低检出量达到8.21ng/mL,而且检测重复性良好,试剂盒保存期达12个月以上。在进行临床试验时,试制的试剂盒与单纯颈部皮试变态反应相比,阳性一致率为70.59%,阴性一致率为99.20%,总一致率为98.44%;与BOVIGAMTM试剂盒相比,阳性一致率为91.30%,阴性一致率为99.78%,总一致率为99.58%。其灵敏度为85.00%,特异性为100.00%。结论成功建立牛结核γ-干扰素夹心ELISA检测方法,并研制出相应试剂盒,具有良好应用前景。 展开更多
关键词 牛结核病 Γ-干扰素 夹心elisa 试剂盒 敏感性 特异性
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夹心ELISA检测可溶型LAIR-1方法的建立及其应用的研究 被引量：8
9
作者 薛江楠 欧阳为明 +6 位作者 贾卫 谢鑫 刘京梅 宁双飞 户义 宋朝君 金伯泉 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期268-271,共4页
为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏... 为了探讨血清可溶型白细胞相关免疫球蛋白样受体 1 (sLAIR 1 )的水平与疾病的关系 ,用生物传感器鉴定了 3种抗LAIR 1分子胞膜外区mAb识别的表位 ,并应用 2种识别不同LAIR 1表位的mAb首次建立了检测sLAIR 1的夹心ELISA方法 ,其检测灵敏度达到 1 5 μg/L。以此方法检测了活化的人PBMC培养上清以及正常人和肾综合征出血热 (HFRS )患者血清中sLAIR 1的水平。在经PMA、PHA、LPS和抗CD3mAb活化的人PBMC细胞培养上清中检测到sLAIR 1。 2 4例正常人血清sLAIR 1的平均水平为 (6 2± 3 3) μg/L ,6 2例HFRS患者血清sLAIR 1的平均水平为 (4 7 2± 35 9) μg/L。证明体内和体外存在天然sLAIR 1。HFRS患者血清sLAIR 1水平明显升高。为进一步研究LAIR 展开更多
关键词 MAB 夹心elisa LAIR-1 HFRS
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应用斑点金免疫渗滤法诊断日本血吸虫病 被引量：7
10
作者 张恩英 吴琛耘 沈大康 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1998年第6期454-456,共3页
目的：探索一种便捷的血吸虫病诊断方法。方法：在原已建立的ＥＬＩＳＡ法的基础上，应用３个针对日本血吸虫抗原的不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法。抗原与抗体通过渗滤... 目的：探索一种便捷的血吸虫病诊断方法。方法：在原已建立的ＥＬＩＳＡ法的基础上，应用３个针对日本血吸虫抗原的不同表位的单克隆抗体标记胶体金，建立检测日本血吸虫病患者血清中血吸虫抗原的斑点金免疫渗滤法。抗原与抗体通过渗滤在硝酸纤维薄膜上进行反应，数分钟用肉眼观察结果。结果：本法检测ＳＥＡ的敏感度为１６ｎｇ／ｍｌ，在６９例慢性日本血吸虫病患者血清的检测中，阳性率为６０．８％，特异性为９５．２％；同时用ｄｏｔ－ＥＬＩＳＡ检测１３７例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为５４．７％、特异性为９４．６％；夹心ＥＬＩＳＡ检测１１８例慢性日本血吸虫病患者，阳性率为６１．９％、特异性为９５．７％。结论：经数理统计Ｇ检验证实斑点金免疫渗滤法的敏感性和特异性同ＥＬＩＳＡ相近，且操作更简便且快速。 展开更多
关键词 DIFA DOT-elisa 夹心elisa 日本血吸虫病 诊断
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羊痘病毒双抗体夹心ELISA检测方法的建立 被引量：8
11
作者 吴国华 张强 +4 位作者 颜新敏 李健 朱海霞 邵长春 邬向东 《江西农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期860-864,共5页
用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清。经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数。通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA诊断方法。用建立的ELISA... 用纯化的山羊痘病毒分别免疫家兔和豚鼠,制备高效价的抗血清。经方阵滴定测定捕获抗体、检测抗体、酶结合物和标准抗原的稀释倍数。通过对阴性样品的检测,确定阴阳性的判定标准,初步建立羊痘病毒间接夹心ELISA诊断方法。用建立的ELISA方法对31份已知背景样品进行检测,总符合率为93.5%。经特异性试验、批内重复试验和对比试验,说明建立的夹心ELISA诊断方法具有良好的特异性、重复性和敏感性。对田间样品的检测表明,该ELISA诊断方法可应用于对羊痘的鉴别诊断。 展开更多
关键词 羊痘病毒 夹心elisa 诊断
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重组人碱性成纤细胞生长因子单克隆抗体的制备、鉴定及初步应用 被引量：9
12
作者 车莹 李校堃 +6 位作者 胡培声 颜江华 姚娜 蔡琳 林绍强 王生育 朱佳男 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2011年第6期514-518,共5页
目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFG... 目的制备重组人碱性成纤维细胞生长因子(recombinant human basic fibroblast growth factor,rhbFGF)单克隆抗体,鉴定其特性,建立双抗体夹心ELISA检测方法。方法以rhbFGF为免疫原,免疫Balb/c小鼠,通过细胞融合技术建立能稳定分泌抗rhbFGF杂交瘤细胞株,制备抗rhbFGF单克隆抗体,采用Ig亚类ELISA试剂盒鉴定抗体亚类,间接ELISA法检测抗体效,Western blot鉴定抗体特异性。HRP标记McAb并建立夹心ELISA检测方法。结果获得2株(分别命名2D3、5F7)可分泌特异性McAb的强阳性细胞株,腹水抗体效价在10-5以上,IgG亚类均为IgG1,轻链为K链。Western blot证明2株McAb特异性良好,双抗体夹心ELISA检测rhbFGF最低检测限达到2 ng/ml。结论成功制备高效价的抗rhbFGF单克隆抗体,建立抗rhbFGF双抗体夹心ELISA定量检测方法。 展开更多
关键词 碱性成纤维细胞生长因子 单克隆抗体 夹心elisa
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禽流感病毒单克隆抗体的研制及初步应用 被引量：3
13
作者 孔晶 吴艳涛 +1 位作者 刘文博 刘秀梵 《中国动物检疫》 CAS 2004年第10期20-22,共3页
接种H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后 ,差速离心提纯病毒 ,三次免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠脾细胞与骨髓细胞SP2/0-Ag-14融合。用间接ELISA和血凝抑制 (HI)试验筛选阳性杂交瘤细胞株。本研究共获14株能够稳定分泌特异... 接种H5N1亚型禽流感病毒 (AIV)鸡胚尿囊液,经甲醛灭活后 ,差速离心提纯病毒 ,三次免疫BALB/c小鼠 ,取免疫小鼠脾细胞与骨髓细胞SP2/0-Ag-14融合。用间接ELISA和血凝抑制 (HI)试验筛选阳性杂交瘤细胞株。本研究共获14株能够稳定分泌特异性单克隆抗体 (McAbs)的杂交瘤细胞株 ,其中McAbA6具有HI特性 ,并可以与重组鸡痘病毒表达的H5亚型AIVHA蛋白反应。用间接ELISA试验测定McAbs与125株AIV分离株的反应性。用反应谱广的McAbs(4B3和F2)进行交叉反应实验 ,确定了McAbs可用于夹心ELISA的最佳包被和酶标方式。以McAb4B3为基础建立的夹心ELISA对175株各亚型的AIV的阳性检出率在90 展开更多
关键词 禽流感病毒 单克隆抗体 研制 间接elisa 夹心elisa 禽流感
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LAIR-2单克隆抗体的制备、鉴定和夹心ELISA方法的建立 被引量：7
14
作者 谢鑫 曹云新 +4 位作者 王薇 薛江楠 欧阳为明 王春艳 金伯泉 《现代免疫学》 CAS CSCD 北大核心 2004年第1期32-35,共4页
为了制备LAIR 2单克隆抗体并建立夹心ELISA方法。应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗LAIR 2单克隆抗体 (mAb )。采用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定LAIR 2的细胞分布。辣根过氧化物酶 (HRP )标记LAIR 2mAb ,并建立检测LAIR 2的夹心ELISA... 为了制备LAIR 2单克隆抗体并建立夹心ELISA方法。应用淋巴细胞杂交瘤技术制备抗LAIR 2单克隆抗体 (mAb )。采用间接免疫荧光染色和流式细胞术鉴定LAIR 2的细胞分布。辣根过氧化物酶 (HRP )标记LAIR 2mAb ,并建立检测LAIR 2的夹心ELISA方法。用重导向杀伤实验 (RCA )鉴定LAIR分子参与调节杀伤功能的关系。结果成功地制备了 3株特异识别LAIR 2的mAb ,1株mAb (3G4 )能够识别LAIR 1和LAIR 2的共同表位 ,但不能在重导向杀伤实验中抑制CD16诱导的杀伤功能。夹心ELISA方法检测LAIR 2的敏感性为 5ng/ml,为LAIR 展开更多
关键词 LAIR-2 单克隆抗体 制备 鉴定 夹心elisa
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猪繁殖与呼吸综合征病毒S1株单抗AG1的生物学特性及夹心ELISA诊断方法的建立 被引量：5
15
作者 祁贤 张婉华 +1 位作者 叶向阳 朱永军 《上海农业学报》 CSCD 2002年第3期87-91,共5页
用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应... 用纯化的猪繁殖呼吸综合征病毒沪1株（PRRSV-SI）病毒液作抗原,免疫BALB/C小鼠,获得1株稳定分泌抗PRRSV单抗的杂交瘤细胞株,命名为AG1。ELISA交叉试验和阻断试验表明,AGI具有高度特异性。AGI可与PRRSV-S1、美洲株VR-2332、欧洲株LV反应,对猪细小病毒（PPV）、猪伪狂犬病毒（PRV）、猪乙型脑炎病毒（JEV）均不反应。阳性杂交瘤细胞的上清液效价是1:256～512,腹水效价在1:10-3～10-5之间。AG1有100条染色体,琼脂双扩散试验结果表明AG1属于IgG2b。Western blotting试验表明 AG1是针对 N蛋白抗原表位的特异性单抗。以AG1为捕捉抗原抗体和酶标抗体,建立了快速检测PRRSV抗原的单抗夹心ELISA法,该方法具有快速、灵敏、准确、广谱等特点。 展开更多
关键词 生物学特性 诊断方法 繁殖呼吸综合征病毒 单克隆抗体 S1株 夹心elisa 猪
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单克隆抗体夹心ELISA检测SARS病毒抗原的研究 被引量：2
16
作者 李佳明 杨保安 +5 位作者 杨银辉 常国辉 刘洪 吕富双 尉继征 祝庆余 《生物技术通讯》 CAS 2006年第1期34-36,共3页
目的:建立单克隆抗体(McAb)夹心ELISA法,用于检测SARS病毒(SARS-CoV)抗原。方法:用间接夹心ELISA法筛选捕捉和标记用单克隆抗体的组合,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),优化后用于检测SARS-CoV。结果:从12株抗SARS-CoV鼠单克隆... 目的:建立单克隆抗体(McAb)夹心ELISA法,用于检测SARS病毒(SARS-CoV)抗原。方法:用间接夹心ELISA法筛选捕捉和标记用单克隆抗体的组合,采用过碘酸钠法标记辣根过氧化物酶(HRP),优化后用于检测SARS-CoV。结果:从12株抗SARS-CoV鼠单克隆抗体中筛选出2A3/1C5组合用于捕捉SARS-CoV,1A5/1B4组合标记HRP作为指示抗体。优化后2A3/1C5的最适工作浓度为1∶4000,HRP-1A5/1B4的最适工作浓度为1∶2000。本方法检测SARS-CoV的敏感度为105pfu/mL。结论:单克隆抗体夹心ELISA法可特异性检测SARS-CoV抗原。 展开更多
关键词 SARS病毒 夹心elisa 单克隆抗体
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夹心ELISA法快速检测肝病患者血清中金属蛋白酶组织抑制剂-1 被引量：7
17
作者 邵彬 聂青和 +3 位作者 王平忠 李光玉 张亚飞 苟艳子 《细胞与分子免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2006年第1期82-83,85,共3页
目的建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的双抗体夹心ELISA,了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系。方法以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体(mAb)为包被抗体,加入待测抗原以及辣根过氧化物酶(... 目的建立一种快速检测肝病患者血清基质金属蛋白酶组织抑制剂-1(TIMP-1)的双抗体夹心ELISA,了解血清TIMP-1的水平与肝纤维化病程进展程度的关系。方法以不同浓度的抗人TIMP-1单克隆抗体(mAb)为包被抗体,加入待测抗原以及辣根过氧化物酶(HRP)标记的抗TIMP-1mAb作为标记抗体进行方阵滴定,建立双抗体夹心ELISA,并用于临床检测408例肝病患者血清TIMP-1的水平。结果方阵滴定的结果表明包被抗体浓度为1mg/L,血清稀释倍数1∶100,HRP标记mAb的最佳工作浓度为1∶400。以此条件建立的夹心ELISA法具有良好的可重复性,中和抑制率在85%以上,稳定性良好,与国外检测TIMP-1的ELISA试剂盒进行对比试验,具有良好的相关性(r=0.988)。用于临床快速检测肝硬化的检出阳性率为76.4%,明显高于慢性肝炎(40.2%)和急性肝炎(19.5%,P<0.005),并随着患者肝纤维化程度的加重而升高(P<0.001)。结论血清TIMP-1水平的变化可作为诊断肝纤维化良好指标。本法简便、快速,敏感性高、特异性强,用于肝纤维化的人血清学快速诊断。尤其适于医院及基层医疗单位应用。 展开更多
关键词 金属蛋白酶组织抑制剂-1 夹心elisa 肝纤维化
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禽呼肠孤病毒S1733株单克隆抗体的制备及夹心ELISA检测方法的建立 被引量：7
18
作者 谢志勤 谢芝勋 +4 位作者 刘加波 庞耀珊 邓显文 谢丽基 范晴 《畜牧与兽医》 北大核心 2013年第5期49-52,共4页
将禽呼肠孤病毒(ARV)S1733株进行鸡胚增殖,增殖的病毒经浓缩、纯化后灭活,按每鼠100μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠5次,每次间隔7 d,第五次免疫3 d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合及筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,用克隆的杂交... 将禽呼肠孤病毒(ARV)S1733株进行鸡胚增殖,增殖的病毒经浓缩、纯化后灭活,按每鼠100μg的病毒用量免疫BALB/c小鼠5次,每次间隔7 d,第五次免疫3 d后取其脾细胞与骨髓瘤细胞SP2/0进行融合及筛选,阳性孔经3次有限稀释法克隆,用克隆的杂交瘤细胞株制备单克隆抗体。抗体经Western blotting、Dot-ELISA、直接免疫荧光等方法进行检测验证。经验证的的单克隆抗体作为包被抗体,建立双抗体夹心ELISA方法检测ARV。对建立的方法进行特异性和敏感性试验。结果:筛选成功获得1株能稳定分泌抗ARV的单克隆抗体杂交瘤细胞株SF6-3 K3;免疫荧光和Dot-ELISA方法证明该单克隆抗体能特异性地检测ARV;间接ELISA方法测定腹水单克隆抗体效价达105以上,经亚型测定为IgG1,并且具有良好的特异性;用单克隆抗体建立的双抗体夹心ELISA方法特异性强,与对照的毒株新城疫病毒(NDV)、禽流感病毒(AIV)、传染性支气管炎病毒(IBV)、传染性喉气管炎病毒(ILTV)、传染性法氏囊病病毒(IBDV)无交叉反应,检测的敏感性为5×10-5μg/μL的病毒量。结果表明,本试验建立的夹心ELISA检测ARV方法具有较高的特异性和敏感性,可以用于ARV的检测。 展开更多
关键词 禽呼肠孤病毒(ARV) 单克隆抗体 制备 夹心elisa 检测
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早期凋亡细胞抑制LPS诱导炎症反应的研究 被引量：6
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作者 张文瑾 郑树森 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第3期208-213,共6页
目的　研究早期凋亡细胞的炎症抑制作用。方法　以紫外线照射诱导早期凋亡及坏死的Jurkat细胞 ,用流式细胞仪检测早期凋亡率。建立LPS诱导的小鼠炎症反应模型 ,分别向炎症部位滴注 1 0 0 μl灭菌磷酸缓冲液、坏死及早期凋亡Jurkat细胞。... 目的　研究早期凋亡细胞的炎症抑制作用。方法　以紫外线照射诱导早期凋亡及坏死的Jurkat细胞 ,用流式细胞仪检测早期凋亡率。建立LPS诱导的小鼠炎症反应模型 ,分别向炎症部位滴注 1 0 0 μl灭菌磷酸缓冲液、坏死及早期凋亡Jurkat细胞。以HE染色切片病理学检查及激光共聚焦显微镜检查各处理组小鼠肺组织炎症反应程度 ;以双夹心ELISA、Westernblot、RT PCR等方法检测不同处理后小鼠炎症反应状态下细胞因子分泌和表达变化。结果　和注入灭菌磷酸缓冲液及坏死细胞相比 ,向炎症部位滴注早期凋亡细胞后 ,病理检查肺组织炎症反应程度明显减轻 ;激光共聚焦显微镜检查 ,肺间质CD3阳性荧光明显减少 ;肺组织Westernblot及RT PCR结果表明 ,注入外源性早期凋亡细胞后 ,LPS刺激下肺组织炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的分泌及表达减少 ,抗炎性细胞因子TGF β1分泌增强 ;当TGF β1中和抗体和早期凋亡细胞共同滴入后 ,炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的表达及分泌有所上调。腹腔灌洗液ELISA结果表明 ,早期凋亡细胞增强了LPS刺激的炎症性腹腔内抗炎性细胞因子TGF β1的分泌 ,抑制炎症性细胞因子MIP 2、TNF α的分泌。加入TGF β1中和抗体后逆转了早期凋亡细胞对MIP 2、TNF α分泌的抑制作用。结论　早期凋亡细胞通过增强炎症? 展开更多
关键词 LPS诱导 早期凋亡 细胞抑制 Jurkat细胞 共聚焦显微镜检查 炎症性细胞因子 TGF-β1 肺组织炎症反应 抗炎性细胞因子 MIP-2 TNF-α WESTEM RT-PCR 流式细胞仪检测 夹心elisa 凋亡细胞 抑制作用 HE染色切片 细胞因子分泌
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双抗体夹心ELISA检测ASFV抗原方法的建立与评价
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作者 李其炫 岳慧贤 +5 位作者 蒋依倩 张艳艳 陈腾 王述超 张守峰 扈荣良 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第8期1579-1584,1592,共7页
非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种猪的急性、热性、高度接触传染性出血性传染病,具有高度致死性,给养猪业造成巨大经济损失。ASF的实验室确诊目前多采用特异性核酸扩增技术,但该方法受多种因素影响,尤其是环境中核酸扩增产物的... 非洲猪瘟(African swine fever,ASF)是一种猪的急性、热性、高度接触传染性出血性传染病,具有高度致死性,给养猪业造成巨大经济损失。ASF的实验室确诊目前多采用特异性核酸扩增技术,但该方法受多种因素影响,尤其是环境中核酸扩增产物的污染给扩增结果判定带来诸多困扰。为了对ASF临床样品进行高通量诊断检测,本研究以ASF阳性猪血清IgG为捕获抗体,HRP标记的p72单克隆抗体为检测抗体,以细胞培养的非洲猪瘟病毒(African swine fever virus,ASFV)绘制标准曲线,建立了双抗体夹心ELISA抗原检测方法,并评价了其敏感性、特异性和重复性,进一步比较了不同因素对抗原检测的影响。结果显示,本研究建立的夹心ELISA检测方法对重组蛋白和ASFV的最低检测限分别为0.1 mg/L和10^(3.7)TCID_(50)/mL,与5种常见致病性猪源性病毒均不发生交叉反应,试验批间变异系数小于10%;与实时荧光定量PCR对临床血液病毒检测的总符合率为92%(23/25)。在对灭活ASFV抗原的检测中证明,BEI灭活会显著降低ASFV抗原检测的灵敏度,铝胶佐剂和纳米佐剂会干扰抗原的检出。综上,本研究建立的双抗体夹心ELISA抗原检测方法具有良好的特异性、灵敏度和重复性,与qPCR法有良好的一致性,为ASFV临床诊断以及灭活ASFV抗原评价提供了一种高通量检测方法。 展开更多
关键词 非洲猪瘟病毒 高免血清 单克隆抗体 夹心elisa
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