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CTAB法制备超螺旋质粒DNA 被引量：6
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作者 徐英黔 吴蕾 甘一如 《过程工程学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第2期390-394,共5页
研究了基因治疗用载体质粒DNA的一种非色谱的大规模纯化方法—CTAB沉淀法,并对其进行了工艺优化．首先采用高纯过滤介质CelPure去除大量杂质,并利用CTAB浓度梯度溶液研究了不同形式DNA(超螺旋质粒DNA、切口质粒DNA、线性质粒DNA、染色体... 研究了基因治疗用载体质粒DNA的一种非色谱的大规模纯化方法—CTAB沉淀法,并对其进行了工艺优化．首先采用高纯过滤介质CelPure去除大量杂质,并利用CTAB浓度梯度溶液研究了不同形式DNA(超螺旋质粒DNA、切口质粒DNA、线性质粒DNA、染色体DNA)沉淀能力的差异,选择性地从蛋白质、RNA及其他形式DNA中提取超螺旋质粒DNA．针对含有pcDNA3的DH5α菌株,确定CTAB完全沉淀超螺旋质粒DNA的浓度为2．0g/L,由NaCl对不同沉淀的溶解能力,确定溶解沉淀的最优盐浓度为0．75 mol/L．用此方法得到的超螺旋质粒DNA的纯度达90％以上,收率为78．94％．RNA、蛋白质残量以及内毒素均符合药品质量标准要求．CTAB对质粒DNA的沉淀效果与质粒DNA的初始浓度有关,并且超螺旋质粒DNA浓度的降低与CTAB的添加量呈一定的线性关系．超螺旋质粒的分子量越小越不易被分离,并且结构特性比分子量在分离过程中更据主导作用． 展开更多
关键词 质粒DNA 大规模纯化 溴化十六烷三甲基铵(CTAB)
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rhBMP-2m大规模制备纯化过程中使用尿素的分析
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作者 赵玮钦 陈苏民 +4 位作者 陈南春 王涛 秦云 关露媛 张晓楠 《科学技术与工程》 2006年第6期746-750,共5页
为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体。洗涤后的包涵体中,rhBMP-2m占蛋白量的75．1％。为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,... 为大规模制备rhBMP-2m,将高表达rhBMP-2m的工程菌株进行高密度发酵、温度诱导表达,收集菌体,经裂菌和超声洗涤得到并纯化的包涵体。洗涤后的包涵体中,rhBMP-2m占蛋白量的75．1％。为获得高纯度的rhBMP-2m,采用尿素作变性剂将包涵体溶解,经SP-Sepharose FF柱和Q-Sepharose FF柱两步纯化。rhBMP-2m包涵体经pH6．5尿素溶解后,经SP-Sepharose FF柱纯化,蛋白纯度为91％;若rhBMP-2m在碱性尿素中作用时间超过48 h,再经Q-Sepharose FF柱纯化后,纯化产物中在还原性SDS- PAGE中会出现少量与rhBMP-2m二聚体大小接近的蛋白带,显示出碱性尿素对rhBMP-2m的共价修饰作用,会严重地影响 rhBMP-2m的纯化效果和活性:若24 h内完成分离纯化则影响较小,纯化后rhBMP-2m单体的纯度达98％以上。本研究表明尿素适合rhBMP-2m包涵体的大规模纯化。文章对使用尿素的利弊进行了讨论,提出大规模制备蛋白质时最好避免在碱性环境使用高浓度尿素。 展开更多
关键词 人骨形成蛋白2成熟肽 高密度发酵 大规模蛋白质纯化 尿素
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