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题名桦褐孔菌酸性蛋白酶的基因克隆及其在菌核中的表达
被引量：1
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作者
李健
王鑫
胡志强
亢学平
杜忠伟
王旭
陈艳秋
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机构
延边朝鲜族自治州农业科学院
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出处
《食用菌学报》
CSCD
北大核心
2018年第2期42-48,共7页
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基金
国家自然科学基金项目(31160408)
延边食药用菌工程技术研究中心建设(2016JH02)
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文摘
根据桦褐孔菌(Inonotus obliquus)酸性蛋白酶(Acid protease,AP)基因(IO-AP)序列密码子的偏好性优化选择酶切位点和载体,成功构建pGEX-4T1-IO-AP原核表达载体;用热激法将该载体转化到大肠杆菌(Escherichia coli)BL21(DE3)中,构建桦褐孔菌酸性蛋白酶(IO-AP)重组菌。以此重组菌表达的IO-AP以包涵体形式存在,重组蛋白分子质量约为60kDa。以获得的较高纯度的重组IO-AP作为免疫原,采用传统3-2-2-2免疫方式免疫4只Balb/c小鼠,通过间接ELISA法测定抗血清效价,4免之后,4只小鼠抗血清效价均大于121500,成功制备了IO-AP多克隆抗体。Western Blotting检测表明,IO-AP在桦褐孔菌菌核形成过程中的表达呈现先上升后下降的趋势,以第二个时期(栽培130d,菌核长至1.33g时)AP蛋白表达量最高。
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关键词
大肠杆菌重组蛋白
桦褐孔菌
ELISA法
WESTERN
Blotting检测
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Keywords
Escherichia coli recombinant protein
Inonotus obliquus
ELISA method
Western blot
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分类号
S567.3
[农业科学—中草药栽培]
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