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广东10个屠宰场猪肉中3种食源性致病菌的检测 被引量：11
1
作者 韩依辛 田雅 +5 位作者 马广宇 丁立 邓森荣 魏琦麟 徐志宏 向蓉 《动物医学进展》 北大核心 2021年第2期50-54,共5页
为了解肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和空肠弯曲菌等3种食源性致病菌在生猪屠宰场的污染情况。采集广东惠州和清远两地共10家生猪屠宰场498头猪肉样品,分别经改良EC新生霉素增菌肉汤、SC(亚硒酸盐胱氨酸增菌液)和Bolton肉汤增... 为了解肠出血性大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和空肠弯曲菌等3种食源性致病菌在生猪屠宰场的污染情况。采集广东惠州和清远两地共10家生猪屠宰场498头猪肉样品,分别经改良EC新生霉素增菌肉汤、SC(亚硒酸盐胱氨酸增菌液)和Bolton肉汤增菌,用大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和空肠弯曲菌的特异性引物进行PCR扩增及测序检测,阳性菌液再分别涂抹于山梨醇麦康凯平板、DHL(胆硫乳琼脂)和Skirrow血琼脂,挑取疑似菌落再次PCR验证,计算检出率。结果显示,检出大肠埃希氏菌O157:H7阳性样本2份,检出率0.4%,检出沙门氏菌阳性样本70份,检出率14.06%,空肠弯曲菌未检出。结果表明,惠州和清远两地屠宰场均存在食源性致病菌污染情况,其中沙门氏菌污染较为严重,惠州地区检出率高于清远地区。提示屠宰场应加强屠宰过程中环境和加工用具的消毒,以保证屠宰环节的食品安全。 展开更多
关键词 屠宰场 大肠埃希氏菌o157:h7 沙门氏菌 空肠弯曲菌 污染
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基于实时荧光聚合酶链式反应快速检测食源性大肠埃希氏菌O157:H 被引量：5
2
作者 任宝红 付燕峰 +5 位作者 娄亚坤 苗银萍 曾小宇 杨楠 姬建生 郭瑞 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第2期264-270,共7页
目的 建立一种快速、灵敏、特异、高效的食源性大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法 针对大肠埃希氏菌O157:H7型的O抗原特异基因rfbE保守区域设计特异性引物和探针,合成基因片... 目的 建立一种快速、灵敏、特异、高效的食源性大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)检测方法。方法 针对大肠埃希氏菌O157:H7型的O抗原特异基因rfbE保守区域设计特异性引物和探针,合成基因片段绘制标准曲线,在菌液基因组DNA和质粒双层面调试优化以完成方法的初步建立。其后,对该方法的特异性、敏感性、重复性等进行全面的质量评估验证。结果 该方法特异性100%;基因组DNA检测敏感性为7.11×10^(2)fg/μL;纯培养物水平检测敏感性为1.0×10^(2)CFU/mL;重复性变异系数在0.10%~1.00%之间;标准曲线相关系数r^(2)为0.9994。结论 成功建立了一种性能良好的大肠埃希氏菌O157:H7型实时荧光探针PCR快速检测方法,该方法具有灵敏度高、特异性强、扩增时间短,仅为35 min的特点,可用于疑似大肠埃希氏菌O157:H7型污染样品的快速诊断检测。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157:h7 rfbE保守区域 实时荧光聚合酶链式反应技术 探针 快速扩增
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致病菌快速检测管联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法鉴定即食食品中的大肠埃希氏菌O157:H 被引量：5
3
作者 史方 李轲 +3 位作者 阴甜甜 张莹莹 张璐 唐慧骥 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2023年第1期253-260,共8页
目的建立基于致病菌快速检测管技术联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速、高效、准确鉴定即时食品中大肠埃希氏菌(Escherichia c... 目的建立基于致病菌快速检测管技术联合基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF MS)快速、高效、准确鉴定即时食品中大肠埃希氏菌(Escherichia coli,E.coli)O157:H7的方法。方法选取改良胰蛋白胨大豆肉汤(modified tryptone soya broth,mTSB)为初筛培养基,制作出针对即时食品中E.coli O157:H7的致病菌快速检测管,初筛阳性结果采用MALDI-TOF MS技术鉴定。结果5株常见E.coli O157:H7菌株均能特异检出,而其他非E.coli O157:H7均未检出,灵敏度可达51 CFU/mL;通过对人工污染样品和自然样品检测,鉴定结果和GB 4789.36—2016《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》方法完全一致,且检测效率提高了30%。结论两种技术联合应用建立的鉴定即时食品中E.coli O157:H7的新方法,操作简便、成本低廉,适合推广,为快速、准确鉴定即时食品中E.coli O157:H7打开了新思路。 展开更多
关键词 即时食品 致病菌快速检测管 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法 大肠埃希氏菌o157:h7
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5种食源性致病菌PCR检测方法的建立 被引量：8
4
作者 刘骆强 姚艳玲 +1 位作者 管佳丽 朱洪亮 《食品安全质量检测学报》 CAS 2019年第5期1330-1335,共6页
目的建立食品中的沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌的PCR快速检测方法。方法以缓冲蛋白胨水为增菌培养基,采用直接提取法提取DNA并测定其核酸浓度。对PCR的退火温度、模板浓度进... 目的建立食品中的沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌的PCR快速检测方法。方法以缓冲蛋白胨水为增菌培养基,采用直接提取法提取DNA并测定其核酸浓度。对PCR的退火温度、模板浓度进行优化,把5种目标菌分为两组进行检测分析,并进行特异性和灵敏度实验。结果 5种目标菌培养后均表现出良好的生长趋势。PCR扩增最佳退火温度为59℃, 5种目标菌的引物特异性好,方法的检测灵敏度高。沙门氏菌、副溶血性弧菌、大肠埃希氏菌O157:H7、金黄色葡萄球菌和单核细胞增生李斯特氏菌最低检出核酸浓度分别为0.0202、0.158、0.187、2.30和1.05μg/mL。结论该方法简便、快速、灵敏度高,能满足食品安全检测要求。 展开更多
关键词 沙门氏菌 副溶血性弧菌 大肠埃希氏菌o157:h7 金黄色葡萄球菌 单核细胞增生李斯特氏菌 聚合酶链式反应
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基于内参的大肠埃希氏菌O157∶H7实时荧光定量PCR快速检测方法的建立 被引量：8
5
作者 王建昌 王金凤 +3 位作者 段永生 李静 陈志敏 陈瑞春 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第20期226-231,共6页
针对大肠埃希氏菌O157∶H7 rfb E和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方... 针对大肠埃希氏菌O157∶H7 rfb E和Flic靶基因保守序列,设计特异性引物和探针,优化反应体系,并加入内参(internal amplification control,IAC),建立能够实时监控反应过程的荧光定量聚合酶链式反应(polymease chain reaction,PCR)检测方法。结果表明,该方法对E.coli O157∶H7基因组DNA的最低检测限为1 pg/μL;对含有靶基因质粒的最低检测限为103 copies/μL;对细菌的最低检测限为5×103 CFM/m L;Ct值与模板拷贝数均呈良好的线性关系(R2=0.999)。人工污染实验结果表明,在初始菌量为7 CFM/25 g时,采用水洗加试剂盒法提取DNA,E.coli O157∶H7在增菌6 h后即可检出;而采用水煮法提取DNA,则在增菌10 h后方可检出。建立的E.coli O157∶H7实时荧光定量PCR方法,既能有效检测食品中O157∶H7,又能实时监测PCR反应过程,有效防止"假阴性"的发生。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157∶h7 rfb E FLIC 实时荧光定量PCR 内参
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三重荧光PCR检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌和大肠埃希氏菌O157:H7 被引量：8
6
作者 汪华 左靖文 +1 位作者 杨学军 汪胜 《食品安全质量检测学报》 CAS 北大核心 2021年第10期4179-4187,共9页
目的建立一种检验沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7的TaqMan探针三重荧光PCR方法。方法针对沙门氏菌属特异性invA基因、金黄色葡萄球菌rpoB基因、大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因设计引物与探针,建立三重荧光PCR体系,对引... 目的建立一种检验沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7的TaqMan探针三重荧光PCR方法。方法针对沙门氏菌属特异性invA基因、金黄色葡萄球菌rpoB基因、大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因设计引物与探针,建立三重荧光PCR体系,对引物与探针浓度及退火温度优化,并进行特异性和敏感性研究。结果引物与探针的最优添加量为:invA 0.2μL、ropB 0.4μL、rfbE 0.5μL;最优退火温度为60℃。特异性试验显示16株非目标菌株扩增结果为阴性;目标菌株均出现显著扩增。敏感性试验显示,3种微生物对应的最低菌体数量检出量依次为:230、38、670 CFU。结论该方法特异性好、灵敏度高,能够快速检测沙门氏菌、金黄色葡萄球菌、大肠埃希氏菌O157:H7。 展开更多
关键词 TAQMAN探针 三重荧光PCR 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 大肠埃希氏菌o157:h7
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多重重组酶介导等温扩增技术检测食品中3种食源性致病菌 被引量：1
7
作者 秦爱 李根容 +3 位作者 邓方进 张明娟 周朝旭 肖昭竞 《食品安全质量检测学报》 CAS 2024年第5期97-104,共8页
目的 建立快速、灵敏的多重重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)同时检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。方法 根据大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因、沙门氏菌的invA基因以及金黄色葡... 目的 建立快速、灵敏的多重重组酶介导等温扩增法(recombinase aided amplification, RAA)同时检测食品中的大肠埃希氏菌O157:H7、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌。方法 根据大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因、沙门氏菌的invA基因以及金黄色葡萄球菌的nuc基因的序列保守区域设计RAA特异性引物,筛选出最优的引物组合并优化各项实验条件;通过标准菌株验证方法特异性和灵敏度,并通过人工污染实验,验证方法在实际食品样本中的检测能力。结果 多重RAA方法最佳扩增温度为37℃,反应时间为50min;方法特异性良好,仅对目标菌株存在特异性扩增条带,与其他常见食源性致病菌无交叉反应;方法对基因组DNA的检测灵敏度为0.10 ng/μL;对经过简单增菌的人工污染牛奶样本和牛肉干样本中目标菌株的检出限为100 CFU/mL。结论 本研究建立的多重RAA扩增方法具有特异性好、灵敏度高、检测通量高等优势,适用于多种场景下食品样本中3种食源性致病菌的快速检测。 展开更多
关键词 重组酶介导扩增技术 大肠埃希氏菌o157:h7 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌
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动物性食品中大肠埃希氏菌O157∶H7特异性二重PCR检测方法的建立 被引量：4
8
作者 贺晓龙 张桂芝 方维焕 《中国兽医科技》 CSCD 北大核心 2005年第8期626-629,共4页
根据大肠埃希氏菌O157∶H7 wzx和fliC基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠埃希氏菌O157∶H7的二重PCR体系,扩增产物为395bp(wzx)和1057bp(fliC).人工培养基中大肠埃希氏菌O157∶H7的检测下限为2.3×102CFU/mL,... 根据大肠埃希氏菌O157∶H7 wzx和fliC基因的保守序列设计了2对引物,建立并优化了特异性检测大肠埃希氏菌O157∶H7的二重PCR体系,扩增产物为395bp(wzx)和1057bp(fliC).人工培养基中大肠埃希氏菌O157∶H7的检测下限为2.3×102CFU/mL,人工污染的牛乳、猪肉及牛肉中大肠埃希氏菌O157∶H7的检测下限分别为5.8×102CFU/mL、4.3×102CFU/g和3.1×103CFU/g.样品经3h预增菌后检测下限可达3.1×100～5.8×100CFU/mL(或CFU/g).试验结果提示,针对wzx及fliC基因的二重PCR方法可以快速特异地检测出牛乳、猪肉及牛肉中大肠埃希氏菌O157∶H7的污染. 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157:h7 二重PCR fliC基因 wzx基因
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4株E.coli O157:H7毒力基因检测及其冷应激损伤 被引量：6
9
作者 水新云 王虎虎 +1 位作者 高峰 江芸 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2016年第4期176-180,共5页
采用多重聚合酶链式反应对4株大肠埃希氏菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)进行毒力特性评价,研究3种常用选择性生长基质对E.coli O157:H7的精确定量对比,筛选出的适宜选择性培养基用于冷应激时菌体损伤的研究。结果显示,菌株CICC 21... 采用多重聚合酶链式反应对4株大肠埃希氏菌O157:H7(Escherichia coli O157:H7)进行毒力特性评价,研究3种常用选择性生长基质对E.coli O157:H7的精确定量对比,筛选出的适宜选择性培养基用于冷应激时菌体损伤的研究。结果显示,菌株CICC 21530的stx1、stx2、eae基因均为阳性,NCTC 12900和牛肉分离菌1的eae呈现阳性,牛肉分离菌2三种毒力基因均为阴性,表明4株菌的致病性不同;4株测试菌在改良山梨醇麦康凯琼脂(cefiximetellurite sorbitol macconkey agar,CT-SMAC)上计数均显著低于胰蛋白胨大豆琼脂(tryptose soya agar,TSA)上计数(P<0.05),而SMAC和改良伊红美蓝琼脂(modified eosin methylene blue agar,m EMB)上的计数与TSA相比无显著性差异,表明改良SMAC对正常菌体既有较强抑制作用,不适合用于E.coli O157:H7的精确计数,可以选用SMAC或m EMB;进一步以SMAC和m EMB作为选择性培养基研究菌体在4℃冷应激时的损伤情况,结果表明冷藏过程中SMAC、mEMB及TSA上的菌数均逐渐下降,第10天时4株菌均发生了一定程度的损伤或死亡。本方法可为食品安全中E.coli O157:H7的定量评估和风险控制提供科学依据。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157:h7 毒力基因 半致死损伤 冷应激 选择性培养基
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靶序列富集多重PCR结合DHPLC同时检测5种食源性致病菌 被引量：5
10
作者 刘忠梅 曾繁华 +5 位作者 罗佳 徐义刚 曲敏 莫春生 刘新亮 李苏龙 《食品安全质量检测学报》 CAS 2015年第6期2275-2282,共8页
目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构... 目的建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157、金黄色葡萄球菌和志贺氏菌5种食源性致病菌的简便、灵敏的高通量方法。方法根据GenBank公布的5种致病菌的特异性靶基因序列,设计5对特异性引物,与通用引物连接构成复合引物。经过反应条件的优化,建立了5种致病菌的靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)扩增方法,扩增产物采用变性高效液相色谱(denaturing high-performance liquid chromatography,DHPLC)技术进行检测。结果采用Tem-PCR-DHPLC方法,检测48株试验菌株,未发现非特异性结果。对5种致病菌检测灵敏度,除金黄色葡萄球菌为620 cfu/mL外,其余都小于100 cfu/mL。对4种样品的检测结果与国家标准方法相符合。结论 Tem-PCR-DHPLC检测方法,相比传统多重PCR方法,能有效地解决引物扩增效率不均衡的问题,不需优化引物浓度,方法特异性强,灵敏度高,具有较好的实用性。 展开更多
关键词 靶序列富集多重PCR 变性高效液相色谱 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌o157 金黄色葡萄球菌 志贺氏菌
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不同方法检测食品中大肠埃希氏菌O157:H7/HM能力验证结果比较与分析
11
作者 燕妮 段鹏 杨雅珺 《甘肃科技》 2024年第1期70-73,共4页
为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃... 为提高实验室对食品中大肠埃希氏菌O157∶H7的检验检测能力,笔者单位参加了由中国检验检疫科学研究院测试评价中心组织的食品中大肠埃希氏菌O157∶H7检测能力验证计划。此次实验采用国家标准《食品安全国家标准食品微生物学检验大肠埃希氏菌O157∶H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)中的第一法和实时荧光PCR方法,分别对能力验证样品进行检测。结果显示,样品23-G520中未检出大肠埃希氏菌O157∶H7;样品23-F568中检出大肠埃希氏菌O157∶H7,结果反馈为满意。在能力验证实验中,不同检测方法同时使用、综合判断,能有效提高检测能力和结果的准确性。 展开更多
关键词 能力验证 大肠埃希氏菌o157:h7 实时荧光PCR
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大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测方法的建立 被引量：5
12
作者 王建广 雷质文 +7 位作者 石琰璟 付静芸 房保海 祝素珍 姜英辉 刘云国 张健 杨大伟 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第2期271-274,共4页
采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性... 采用自行建立和优化的依赖解旋酶DNA恒温扩增(HDA)检测体系,建立HDA检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7进行检测。采用大肠埃希氏菌O157:H7的rfbE基因为目的片段设计特异性引物,建成可快速检测大肠埃希氏菌O157:H7的HDA检测法,进行了特异性和灵敏度试验,并与普通PCR方法进行了比较。结果表明:所建立起的检测法,灵敏度为4.3×103 cfu·mL-1,灵敏度与普通PCR方法相当。大肠埃希氏菌O157:H7的依赖解旋酶DNA恒温扩增检测方法具有普通PCR的特异、灵敏等特点,并且对仪器要求更低,用普通水浴槽即可进行反应。具有广阔的推广前景。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157:h7 检测 依赖解旋酶DNA恒温扩增技术
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屠宰场分离大肠埃希氏菌O157:H7药敏试验及耐药基因分析 被引量：4
13
作者 钟巧贤 袁淑英 +4 位作者 梁秋燕 袁明贵 彭新宇 徐志宏 向蓉 《动物医学进展》 北大核心 2021年第6期140-144,共5页
为了解2018年-2019年从广东省内生猪屠宰场分离的19株大肠埃希氏菌O157:H7耐药情况,采用微量肉汤稀释法测定阿莫西林等16种抗菌药物对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC),并用普通PCR法检测blaNDM-1等10种耐药基因。结果表明,19株大肠埃希氏菌... 为了解2018年-2019年从广东省内生猪屠宰场分离的19株大肠埃希氏菌O157:H7耐药情况,采用微量肉汤稀释法测定阿莫西林等16种抗菌药物对分离菌株的最小抑菌浓度(MIC),并用普通PCR法检测blaNDM-1等10种耐药基因。结果表明,19株大肠埃希氏菌O157:H7分离菌株对不同抗生素存在耐药差异,其中对阿莫西林、氨苄西林、青霉素、氯霉素和恩诺沙星的耐药率均为100%,对头孢哌酮的耐药率最低为5.26%,其余10种抗菌药物的耐药率位于31.58%~84.21%之间;mcr-1、tetM、floR和rmtB 4种耐药基因未检出,blaNDM-1等6种耐药基因检出率范围为5.26%~89.47%。生猪屠宰场大肠埃希氏菌O157:H7耐药且多重耐药严重,分离株携带丰富的耐药基因。 展开更多
关键词 屠宰场 大肠埃希氏菌o157:h7 微量肉汤稀释法 耐药
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级联信号转导系统结合免疫层析法检测大肠埃希氏菌O157:H7 被引量：4
14
作者 山珊 黄艳梅 +4 位作者 赵雪龙 陈文瑶 刘成伟 龙中儿 刘道峰 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第18期314-320,共7页
首先通过免疫磁技术实现目标菌的有效富集,然后经同时标记了大量抗体与β-内酰胺酶的胶体金纳米探针介导,利用β-内酰胺酶高效水解青霉素实现检测信号转导及放大,再通过免疫层析法对青霉素含量变化的灵敏甄别,最终实现大肠埃希氏菌O157... 首先通过免疫磁技术实现目标菌的有效富集,然后经同时标记了大量抗体与β-内酰胺酶的胶体金纳米探针介导,利用β-内酰胺酶高效水解青霉素实现检测信号转导及放大,再通过免疫层析法对青霉素含量变化的灵敏甄别,最终实现大肠埃希氏菌O157:H7的超灵敏检测。建立的检测方法对大肠埃希氏菌O157:H7的检测灵敏度为2×10^(2) CFU/mL,相比传统的免疫层析法检测灵敏度提高了570倍。实现超灵敏检测食源性致病菌的同时规避了双抗夹心免疫层析法中Hook效应的影响,为免疫层析高灵敏准确检测大分子目标物提供了新的思路。 展开更多
关键词 信号转导 免疫层析技术 超灵敏检测 大肠埃希氏菌o157:h7
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肉制品中大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法的研究
15
作者 杨滴 《食品安全导刊》 2023年第19期95-98,共4页
以大肠埃希氏菌O157:H7菌体抗原基因rfbE基因为靶标,设计特异性引物和探针,建立大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法。对方法的特异性与灵敏性研究,并选取市售的10种肉类制品验证方法可行性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和... 以大肠埃希氏菌O157:H7菌体抗原基因rfbE基因为靶标,设计特异性引物和探针,建立大肠埃希氏菌O157:H7实时荧光PCR检测方法。对方法的特异性与灵敏性研究,并选取市售的10种肉类制品验证方法可行性。实验结果表明该方法具有良好的特异性和灵敏性,具有很好的研究价值和应用前景。 展开更多
关键词 大肠埃希氏菌o157:h7 实时荧光PCR 检测
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食品分析能力评估计划能力验证样品中大肠埃希氏菌O157:H7的分离鉴定及质量控制 被引量：4
16
作者 林秀敏 蒋佳希 +4 位作者 梁美丹 陈楷 张彬彬 尹玮璐 肖剑 《食品安全质量检测学报》 CAS 2017年第8期3213-3217,共5页
目的从食品分析能力评估计划能力验证样品沙拉中分离、鉴定大肠埃希氏菌O157:H7,判断2份样品是否有检出。方法参照GB 4789.36-2016《食品安全国家标准食品微生物学大肠埃希氏菌O157:H7/NM》进行检测,将VITEK 2 compact生化结果符合的菌... 目的从食品分析能力评估计划能力验证样品沙拉中分离、鉴定大肠埃希氏菌O157:H7,判断2份样品是否有检出。方法参照GB 4789.36-2016《食品安全国家标准食品微生物学大肠埃希氏菌O157:H7/NM》进行检测,将VITEK 2 compact生化结果符合的菌株进行O157和H7抗原血清学鉴定。结果样品编号M221d11B检出大肠埃希氏菌O157:H7,样品编号M221d11A未检出大肠埃希氏菌O157:H7。测试样品的背景干扰菌是成团泛菌和铜绿假单胞菌。结论取得满意的能力验证结果需要注意以下因素:培养基试剂的质量、样品之间的交叉污染、样品的正确复苏和制备、菌落特征的识别以及干扰菌株的排查等。 展开更多
关键词 食品分析能力评估计划 能力验证 大肠埃希氏菌o157:h7 菌株鉴定
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餐饮食品中6病原菌叠氮丙啶-定量聚合酶链反应检测方法开发与检验数据分析 被引量：3
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作者 柯振华 《食品安全质量检测学报》 CAS 2020年第19期6855-6861,共7页
目的建立叠氮丙啶-定量聚合酶链反应法(propidiummonoazide-quantitativepolymerasechain reaction,PMA-qPCR)快速检测餐饮食品中6病原菌的方法。方法开发6种病原菌前增菌通用型培养基,采用热裂解方法提取样品DNA,采用PMA技术鉴别活菌... 目的建立叠氮丙啶-定量聚合酶链反应法(propidiummonoazide-quantitativepolymerasechain reaction,PMA-qPCR)快速检测餐饮食品中6病原菌的方法。方法开发6种病原菌前增菌通用型培养基,采用热裂解方法提取样品DNA,采用PMA技术鉴别活菌与死菌,运用分子生物学技术检测样品中目标菌的特异性基因片段,建立病原菌的PMA-qPCR检测方法,开展餐饮食品样品病原菌筛查检测。结果本方法特异性良好,灵敏度较高, 1533份餐饮食品样品中检出病原菌71株,检出率为4.63%(71/1533)。结论本研究运用PMA-qPCR开展病原菌活菌检测技术研究,所建立研究方法可广泛应用于餐饮食品及相关食品中病原菌的快速筛查检测,具有较好的应用前景和现实意义。 展开更多
关键词 叠氮丙啶-定量聚合酶链反应 餐饮食品 沙门氏菌 金黄色葡萄球菌 副溶血性弧菌 单核细胞增生李斯特氏菌 蜡样芽胞杆菌 大肠埃希氏菌o157:h7
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餐饮及相关食品中病原菌活菌多重实时荧光PCR检测方法的研究与开发 被引量：2
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作者 柯振华 《生物技术进展》 2020年第6期717-727,共11页
为了应对餐饮等食品中病原菌快速检测的需求、研究建立病原菌筛查方法,选取痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)... 为了应对餐饮等食品中病原菌快速检测的需求、研究建立病原菌筛查方法,选取痢疾志贺氏菌(Shigella dysenteriae)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、副溶血性弧菌(Vibrio parahaemolyticus)、阴沟肠杆菌(Enterobacter cloacae)、产气肠杆菌(Enterobacter aerogenes)、沙门氏菌(Salmonella)、蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus)、大肠埃希氏菌O157∶H7(Escherichia coli O157∶H7)、单核细胞增生李斯特氏菌(Listeria monocytogenes)等9种病原菌开展多重实时荧光PCR方法研究工作。为了节约预增菌时间与提升检测效率,研发了适用于多种病原菌预增菌的通用型培养基,采取高温裂解法提取菌液核酸,利用PMA染料灭活死亡细菌DNA,筛选出活菌DNA,采用多重实时荧光PCR技术检测目标菌,该方法可在16 h内完成检测,对于目标病原菌的检测低限可达103 CFU·mL^-1。 展开更多
关键词 餐饮食品 PMA-qPCR 病原菌 痢疾志贺氏菌 金黄色葡萄球菌 副溶血性弧菌 阴沟肠杆菌 产气肠杆菌 沙门氏菌 蜡样芽胞杆菌 大肠埃希氏菌o157∶h7 单核细胞增生李斯特氏菌
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大肠埃希氏菌O157:H7能力验证结果分析及讨论 被引量：1
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作者 刘霓 《食品安全导刊》 2022年第6期105-107,共3页
目的:从FAPAS能力验证样品(沙拉)中分离、鉴定大肠埃希氏菌O157:H7,分别判定两个样品是否检出目标菌。方法:本实验采用国家标准《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)第一法和基质辅助... 目的:从FAPAS能力验证样品(沙拉)中分离、鉴定大肠埃希氏菌O157:H7,分别判定两个样品是否检出目标菌。方法:本实验采用国家标准《食品安全国家标准 食品微生物学检验 大肠埃希氏菌O157:H7/NM检验》(GB 4789.36—2016)第一法和基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法(Matrix-assisted Laser Desorption Ionization-time of Flight Mass Spectrometry,MALDI-TOF MS)对能力验证样品进行鉴定。结果:样品M248d11A中未检出大肠埃希氏菌O157:H7,鉴定干扰菌株为大肠埃希氏菌;样品M248d11B中检出大肠埃希氏菌O157:H7,结果为满意。结论:在进行能力验证实验中,为避免交叉污染,尽量选择不同生物安全柜进行试验;MALDI-TOF MS对于血清型的鉴定可以参考聚类树状谱系图,但不建议作为判定的主要依据。 展开更多
关键词 能力验证 大肠埃希氏菌o157:h7 基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱法
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应用Tem-PCR技术同时检测3种致病菌的研究 被引量：1
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作者 曲敏 莫春生 +3 位作者 刘佳 刘忠梅 徐义刚 李苏龙 《哈尔滨商业大学学报（自然科学版）》 CAS 2016年第1期33-37,共5页
应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly... 应用靶序列富集多重PCR(target enriched multiplex PCR,Tem-PCR)技术建立同时检测沙门氏菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠埃希氏菌O157三种致病菌的高通量简易检测方法.实验分别以沙门氏菌的inv A基因、单核细胞增生李斯特氏菌的hly基因、大肠埃希氏菌O157 rfb E基因为靶基因,设计3对特异性引物,并与通用引物连接组成Tem-PCR引物,通过反应条件优化,建立了TemPCR检测方法.结果表明,建立的Tem-PCR方法特异性强,其检测灵敏度分别为沙门氏菌1.1×103CFU/m L、单核细胞增生李斯特氏菌5.6×102CFU/m L、大肠埃希氏菌O157 2.3×103CFU/m L.方法不需要优化调整各引物对的浓度,易于使用,有效地解决了传统多重PCR方法扩增效率不均衡的问题. 展开更多
关键词 靶序列富集多重PCR方法 沙门氏菌 单核细胞增生李斯特氏菌 大肠埃希氏菌o157
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