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PCR技术及影响扩增大片段基因产量的因素 被引量:3
1
作者 段子渊 《草食家畜》 1997年第4期18-20,共3页
从PCR技术的原理和操作程序出发,分析与综述了影响扩增大片段目的基因的因素,提出了提高扩增大片段基因产量及特异性的可能途径。
关键词 PCR 片段基因 产量 特异性
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基因倍增研究进展 被引量:4
2
作者 李鸿健 谭军 《生命科学》 CSCD 2006年第2期150-154,共5页
基因倍增是指DNA片段在基因组中复制出一个或更多的拷贝,这种DNA片段可以是一小段基因组序列、整条染色体,甚至是整个基因组。基因倍增是基因组进化最主要的驱动力之一,是产生具有新功能的基因和进化出新物种的主要原因之一。本文综述... 基因倍增是指DNA片段在基因组中复制出一个或更多的拷贝,这种DNA片段可以是一小段基因组序列、整条染色体,甚至是整个基因组。基因倍增是基因组进化最主要的驱动力之一,是产生具有新功能的基因和进化出新物种的主要原因之一。本文综述了脊椎动物、模式植物和酵母在进化过程中基因倍增研究领域的最新进展,并讨论了基因倍增研究的发展方向。 展开更多
关键词 基因倍增 片段基因组倍增 串联倍增 功能趋异
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一种用于构建红色红曲霉基因组cosmid文库的大片段DNA制备方法 被引量:4
3
作者 安洋 杨晶 +1 位作者 徐欣欣 刘钢 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第10期1385-1388,共4页
【目的】制备用于构建红色红曲霉cosmid文库的大片段基因组DNA。【方法】采用优化的酚氯仿抽提法制备DNA,并利用Sau3AI切割至平均大小为40 kb,然后使用Stratagene包装蛋白构建cosmid文库。基于PCR法使用同源探针从该文库中进行了目的基... 【目的】制备用于构建红色红曲霉cosmid文库的大片段基因组DNA。【方法】采用优化的酚氯仿抽提法制备DNA,并利用Sau3AI切割至平均大小为40 kb,然后使用Stratagene包装蛋白构建cosmid文库。基于PCR法使用同源探针从该文库中进行了目的基因的筛选。【结果】制备了浓度为5μg/μL,平均片段大小大于48 kb的红色红曲霉大片段基因组DNA。利用该DNA构建的cosmid文库基因组覆盖倍数为10,并筛选到了含有目的片段的cosmid。【结论】通过该方法制备红色红曲霉大片段基因组DNA简便易行并且完全可以用于构建cosmid文库。 展开更多
关键词 红色红曲霉 片段基因组DNA cosmid文库
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细菌人工染色体文库的构建方法分析 被引量:1
4
作者 吴宏梅 刘长青 +4 位作者 刘帅 包阿东 陆涛峰 关伟军 马月辉 《生物技术通报》 CAS CSCD 2008年第2期83-87,共5页
细菌人工染色体是一种承载大片段DNA的新型载体系统,它具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。在高等生物基因组文库的构建和基因功能的分析等方面有广泛应用。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的... 细菌人工染色体是一种承载大片段DNA的新型载体系统,它具有插入片断大、嵌合率低、遗传稳定性好、易于操作等优点。在高等生物基因组文库的构建和基因功能的分析等方面有广泛应用。BAC文库的构建是基因组较大的真核生物基因组学研究的重要基础。介绍了近年来细菌人工染色体文库构建方法上的研究进展,对其中载体的制备和高分子量DNA的制备这两个关键环节作了较深入的探讨。 展开更多
关键词 细菌人工染色体 基因组文库 构建方法 载体制备 片段基因DNA制备
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携带大片段BIBAC克隆在不同农杆菌中的遗传稳定性研究 被引量:1
5
作者 邢俊杰 杨剑 +6 位作者 梁铃 李强 李磊 张朝良 杲修杰 曹筑荣 曹孟良 《生命科学研究》 CAS CSCD 2006年第4期291-294,共4页
大片段克隆在农杆菌中的稳定性是利用可转化大片段载体进行农杆菌介导遗传转化的关键问题.选用插入片段分子质量分别为150kb和50kb的BIBAC克隆,测定了在3种农杆菌AGL-1,EHA105和LBA4404中的遗传稳定性.从第1、3、5次继代培养的农杆菌中... 大片段克隆在农杆菌中的稳定性是利用可转化大片段载体进行农杆菌介导遗传转化的关键问题.选用插入片段分子质量分别为150kb和50kb的BIBAC克隆,测定了在3种农杆菌AGL-1,EHA105和LBA4404中的遗传稳定性.从第1、3、5次继代培养的农杆菌中抽提的质粒及酶切结果显示,由于农杆菌背景质粒的干扰,难以判断质粒的降解与否.将农杆菌质粒再转化到大肠杆菌宿主中,发现来自农杆菌AGL-1和EHA105的质粒出现了明显的降解,片段变小,而来自农杆菌LBA4404的质粒没有变化.结果表明,大片段BIBAC质粒在不同农杆菌菌株中的稳定性不同,在农杆菌LBA4404中比较稳定,适合用于遗传转化. 展开更多
关键词 片段基因文库 根癌农杆菌 遗传稳定性
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早产儿基因缺失致致死性呼吸窘迫综合征1例
6
作者 吴竞潮 林丹霞 +2 位作者 许伟鹏 韩莎莎 柳国胜 《河南医学研究》 CAS 2021年第23期4412-4415,共4页
肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)相关蛋白缺乏是新生儿呼吸窘迫综合征(respiratory distress syndrome,RDS)最为严重且罕见的病因之一,是由于编码PS相关蛋白的SFTPA1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC、SFTPD等基因突变或某些缺陷,使其... 肺表面活性物质(pulmonary surfactant,PS)相关蛋白缺乏是新生儿呼吸窘迫综合征(respiratory distress syndrome,RDS)最为严重且罕见的病因之一,是由于编码PS相关蛋白的SFTPA1、SFTPA2、SFTPB、SFTPC、SFTPD等基因突变或某些缺陷,使其表达的蛋白功能障碍,导致PS功能缺陷,不能发挥作用,从而引发RDS。 展开更多
关键词 早产儿 片段基因缺失 肺表面活性物质相关蛋白 新生儿呼吸窘迫综合征
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构建丝状真菌大片段基因组文库载体DNA的制备
7
作者 周礼红 诸葛健 《生物技术》 CAS CSCD 2004年第6期9-10,共2页
载体DNA的制备是构建大片段基因组文库的关键步骤之一。高质量载体DNA受到酶切、脱磷等因素的影响。以载体pBHYG为材料 ,优化了限制性内切酶HindIII酶切和小牛肠碱性磷酸酶 (CIAP)脱磷的作用条件 ,并在T4连接酶作用下自连 ,通过胶回收... 载体DNA的制备是构建大片段基因组文库的关键步骤之一。高质量载体DNA受到酶切、脱磷等因素的影响。以载体pBHYG为材料 ,优化了限制性内切酶HindIII酶切和小牛肠碱性磷酸酶 (CIAP)脱磷的作用条件 ,并在T4连接酶作用下自连 ,通过胶回收纯化制备了可用于进一步构建大片段基因组文库的线性载体DNA。 展开更多
关键词 片段基因组文库 载体DNA 酶切 脱磷
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紫茎泽兰高分子量核DNA制备方法的研究
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作者 张迎新 贾晓鸥 +3 位作者 张月荣 杜向红 万方浩 宋卫宁 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期2551-2557,共7页
以紫茎泽兰暗培养幼嫩叶片为材料,在细胞核提取缓冲液中加入PVP、抗坏血酸和氨基甲酸钠3种强抗氧化剂,较好地去除了多糖多酚等次生代谢物,经低熔点琼脂糖包埋细胞核及蛋白酶K原位裂解DNA胶块,以获得大分子量DNA;最后分别采用2种不同的... 以紫茎泽兰暗培养幼嫩叶片为材料,在细胞核提取缓冲液中加入PVP、抗坏血酸和氨基甲酸钠3种强抗氧化剂,较好地去除了多糖多酚等次生代谢物,经低熔点琼脂糖包埋细胞核及蛋白酶K原位裂解DNA胶块,以获得大分子量DNA;最后分别采用2种不同的限制性内切酶(BamHⅠ和HindⅢ)和5个浓度梯度(0U、0.2U、0.4U、0.6U、0.8U)进行酶切,并对不同的回收方法进行比较分析。结果表明:经脉冲电泳检测,本方法提取的DNA片段长度>600kb,基本无细胞器DNA和蛋白质污染;酶切条件以0.4U酶浓度HindⅢ的效果最好,酶切后的DNA片段主要集中在100~300kb之间,DNA片段大小满足构建BAC文库的要求;对回收方法进行比较分析,电洗脱法回收的大片段DNA浓度远远大于琼脂糖酶切法,大于8mg.L-1,这完全能够满足构建大片段基因组文库对DNA浓度的要求。 展开更多
关键词 紫茎泽兰 高分子量DNA 脉冲场凝胶电泳 片段基因组文库
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