多重实时荧光定量PCR同时检测冷冻蔬菜中4种食源性致病菌 被引量：12

1

作者 王晓 《食品安全质量检测学报》 CAS 2018年第22期5917-5921,共5页

目的建立一种基于TaqMan探针的多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-timePCR,multiplex qPCR)同时检测冷冻蔬菜中4种食源性致病菌的方法。方法针对金黄色葡萄球菌nuc基因、痢疾志贺菌rfc基因、沙门氏菌invA基因、单增李斯... 目的建立一种基于TaqMan探针的多重实时荧光定量PCR(multiplex quantitative real-timePCR,multiplex qPCR)同时检测冷冻蔬菜中4种食源性致病菌的方法。方法针对金黄色葡萄球菌nuc基因、痢疾志贺菌rfc基因、沙门氏菌invA基因、单增李斯特氏菌hly基因,设计4对引物和探针,优化反应体系,建立稳定的多重qPCR反应体系。通过阳性菌株污染的方法验证体系的特异性,并确定了冷冻蔬菜样品在细菌水平的检出限。结果各对引物和探针对目标菌有较强的特异性,对其他非目标菌进行检测均未检出,人工污染冷冻蔬菜中志贺菌的检出限为10~2CFU/g,沙门氏菌和单增李斯特氏菌的检出限均为10~3 CFU/g,金黄色葡萄球菌的检出限为10~4 CFU/g。结论本研究可以实现冷冻蔬菜样品中4种致病菌qPCR高效检测。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 冷冻蔬菜 食源性致病菌

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呼吸道病原体多重实时荧光定量PCR的检测 被引量：12

2

作者 姚亚萍 徐冉行 吕棠山 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期592-594,共3页

目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳... 目的建立多重实时荧光定量PCR检测方法,为实现对呼吸道病原体的快速、灵敏特异性检测。方法采用经报道的引物和探针对合胞病毒、腺病毒等8种呼吸道病原体进行多重实时荧光定量PCR检测。结果多重荧光定量PCR阳性检测率高达57.8%,无假阳性及假阴性,特异性强。结论多重实时荧光定量PCR具有经济、快速、特异性强等优点,在呼吸道病原体检测方面有巨大应用价值。 展开更多

关键词 呼吸道 病原体 多重实时荧光定量pcr

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一种从羊奶中检测牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR方法的建立 被引量：10

3

作者 范阳阳 张荦嘉 +5 位作者 刘艳艳 卞如如 霍胜楠 张卉 张全芳 步迅 《山东农业科学》 2016年第6期118-123,共6页

羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以... 羊奶制品因其良好的营养功效备受消费者的青睐,也是乳制品主要掺假对象。本研究参考市场可能掺假现状,分别根据羊和牛线粒体基因组16S rRNA基因序列和大豆的KTi-S基因(GI:510514)序列,设计一对牛和羊特异性引物、一对大豆特异性引物以及相应的Taq Man-MGB探针,建立羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测方法,并引入内标质控有效保证检测体系的准确性。本检测体系对羊奶、牛奶及豆浆的基因组DNA检测敏感度为0.01 ng;对羊奶中掺入牛奶和豆浆的体积掺假检测灵敏度均为0.1%。因此,本研究建立的羊奶中牛奶和大豆成分多重实时荧光定量PCR检测体系具有通量大、灵敏度高、特异性好等优点,实现了对羊奶中其他源性成分快速、准确的检测,对保障相关产品市场安全具有重要意义。 展开更多

关键词 羊奶 牛奶 豆浆 多重实时荧光定量pcr

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高致病性猪链球菌2型多重实时荧光定量PCR检测方法的建立 被引量：9

4

作者 朱静 张锦海 +5 位作者 胡丹 石洁 张先云 李先富 潘秀珍 王长军 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2012年第5期325-328,共4页

目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪... 目的建立对高致病性猪链球菌2型毒力基因SalK、virB4-89K、cps2J同步检测的多重实时荧光定量PCR检测方法。方法根据SalK、virB4-89K、cps2J基因保守区域设计并合成3对引物及其探针;通过反应体系和扩增条件优化,建立快速鉴定高致病性猪链球菌2型的方法,并对方法的特异性、敏感性、重复性指标进行评估。结果反应体系具有良好的扩增效率,全部扩增检测可在60min内完成。SalK、virB4-89K、cps2J基因检测灵敏度分别为19cfu/ml、27cfu/ml和32cfu/ml。重复性试验中变异系数均小于3%。用该方法考核33株猪链球菌,包括1/2型、1型、3型至33型,以及9株常见对照菌株,仅猪链球菌1/2型检测到cps2J基因荧光信号增强。对疫情现场获得的SS2感染者血液进行检测,3个基因均阳性。结论建立的多重实时荧光定量PCR方法可快速检测高致病性猪链球菌2型,并能鉴定是否含有89K毒力岛基因SalK、virB4-89K,具有敏感、特异、重复性好的特点。 展开更多

关键词 猪链球菌2型 多重实时荧光定量pcr SalK基因 virB4-89K基因 cps2J基因

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改良多重实时荧光定量PCR检测流感A型和B型病毒 被引量：6

5

作者 邸红芹 杨永辉 +5 位作者 朱桂云 王晓玲 杨庆志 范海霞 王亮 张辉 《河北医药》 CAS 2016年第23期3529-3532,共4页

目的：建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT－PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果成功建立了基于... 目的：建立改良多重实时荧光定量PCR体系快速检测流感A型和B型病毒。方法根据生物信息学分析结果选定流感A型和B型病毒的靶序列，建立MRT－PCR检测体系。构建质粒标准品，评估所建立体系的灵敏度、特异性和重复性。结果成功建立了基于同源加尾系统和Taqman－分子灯标探针的改良多重实时荧光定量PCR检测体系；该方法最低检测限为102 copies／μl，特异性良好，重复性良好，变异系数（CV）为0．99％～2．50％。结论建立了快速、敏感、特异、稳定地改良多重实时荧光定量PCR（ MRT－PCR）检测体系，具有良好的临床应用前景。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 同源加尾系统 Taqman-分子灯标 流感病毒

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多重实时荧光定量PCR鉴别欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV检测方法的建立 被引量：6

6

作者 温青娜 周玲玲 +2 位作者 申红 杨菊凤 林祥群 《动物医学进展》 北大核心 2015年第6期1-8,共8页

根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,... 根据欧洲型N基因、美洲型M基因和高致病性猪繁殖与呼吸综合征病毒(Porcine reproductive and respiratory syndrome virus,PRRSV)nsp2基因的各自保守序列设计特异性的引物和不同荧光标记的TaqMan荧光探针,通过优化反应体系和扩增条件,建立了能够检测欧洲型、美洲型和高致病性PRRSV的多重实时荧光定量PCR方法。该方法的重复试验表明其批内和批间的变异系数最高值分别为1.84%和1.76%;灵敏性试验表明其检测下限为10copies/μL;特异性试验表明与其他一些猪源病毒无交叉反应,具有良好的特异性;临床试验表明,该方法能够快速准确地检测出临床组织样本中美洲型及高致病性PRRSV的核酸;此外,本研究用欧洲型PRRSV质粒进一步验证了该方法可以检测出欧洲型PRRSV的目的基因。该方法的建立为不同类型的PRRSV快速检测提供了有效手段,可用于猪繁殖与呼吸综合征疫情的监测及防控。 展开更多

关键词 欧洲型 美洲型 高致病性 猪繁殖与呼吸综合征病毒 多重实时荧光定量pcr

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猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌多重实时荧光PCR方法的建立 被引量：5

7

作者 刘艳艳 吕婷婷 +7 位作者 吴家强 刘飞 任素芳 张玉玉 郝小静 蒋皓静 李华 于江 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第12期5112-5125,共14页

【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌... 【背景】猪链球菌(Streptococcus suis,SS)和猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida,Pm)都是能引起宿主致病的人畜共患病原菌,常出现混合感染,临床诊断上易与猪瘟、猪丹毒等混淆。【目的】快速、有效鉴别猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病,建立一种能同时检测2种病原的多重实时荧光定量PCR检测方法。【方法】基于猪链球菌的gdh基因和猪多杀性巴氏杆菌的plpE基因,设计2对特异引物及TaqMan探针,以细菌16S rRNA基因设计通用引物及探针,通过对反应条件优化,建立了一种能同时检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌的多重实时荧光定量PCR检测方法。【结果】该方法能够特异性地检测猪链球菌和猪多杀性巴氏杆菌,与细菌分离后的测序结果验证完全一致。此方法对重组质粒标准品的最低检出浓度分别为4.53×10^(2)copies/μL和3.97×10^(2) copies/μL。重复性试验结果显示,该方法的组内和组间变异系数均小于3%。【结论】本实验所建立的方法准确、简便、可靠,能够用于2种病原菌的同时检测,为猪链球菌病和猪多杀性巴氏杆菌病的防治提供了有效的检测工具,具有重要的流行病学意义和临床应用价值。 展开更多

关键词 猪链球菌(SS) 猪多杀性巴氏杆菌(Pm) 多重实时荧光定量pcr

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3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法的建立

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作者 胡伟超 李晋宇 +3 位作者 赵宁 刘起勇 温红玲 吴海霞 《中国媒介生物学及控制杂志》 CAS 2024年第3期334-338,共5页

目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的... 目的建立一种多重实时荧光定量PCR法,同时检测常见蜱传病原体嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体及斑点热群立克次体(SFGR)。方法针对各病原体的保守区序列设计特异性引物及TaqMan探针,建立并优化多重实时荧光定量PCR反应体系,评价方法的特异性、灵敏度、重复性及对蜱样本的检测准确性。结果建立的多重实时荧光定量PCR法检测嗜吞噬细胞无形体、伯氏疏螺旋体、SFGR,与大肠埃希菌、问号钩端螺旋体、布鲁氏菌等病原体间无交叉反应,特异性良好;灵敏度均达到102拷贝/μl,重复性变异系数均<2.00%;蜱样本检测中,多重实时荧光定量PCR法与单重实时荧光定量PCR法检测结果一致性为100%。结论研究建立的3种蜱传细菌性病原体多重实时荧光定量PCR法特异性好、灵敏度高,为蜱传病原体的检测提供了技术手段。 展开更多

关键词 嗜吞噬细胞无形体 伯氏疏螺旋体 斑点热群立克次体 多重实时荧光定量pcr法

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基于FMPA技术的口罩中致病性化脓菌快速检测方法研究 被引量：1

9

作者 邱希斌 郑栩 顾晓璐 《海峡科学》 2023年第10期126-134,共9页

该文研制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌四种常见的致病性化脓菌选择性前共生增菌培养基(ESSP),同时基于FMPA技术,构建高效稳定的多重qPCR反应体系快速检测口罩中这四种致病性化脓菌的方法。结果表明,以BHI为基... 该文研制大肠杆菌、金黄色葡萄球菌、溶血性链球菌、铜绿假单胞菌四种常见的致病性化脓菌选择性前共生增菌培养基(ESSP),同时基于FMPA技术,构建高效稳定的多重qPCR反应体系快速检测口罩中这四种致病性化脓菌的方法。结果表明,以BHI为基础,添加谷氨酰胺0.5 g、丙酮酸钠4.0 g等10种物质的ESSP培养基,可实现8 h内目标菌的快速富集;所建立的qPCR法可实现口罩中常见致病性化脓菌的高效检测,对33株非目标菌均未检出,特异性良好。其中,大肠杆菌及铜绿假单胞菌的检出限均为10^(3)cfu/mL,金黄色葡萄球菌和溶血性链球菌的检出限菌均为10^(4)cfu/mL。该文确定的共生增菌培养基和检测方法为口罩致病菌快速检测奠定理论基础,对实际应用具有指导意义。 展开更多

关键词 口罩 多重实时荧光定量pcr 致病性化脓菌 培养基

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多重RT-PCR快速检测转基因油菜 被引量：1

10

作者 钟婷婷 郭诗芬 +2 位作者 卢文斌 张振乾 肖钢 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2023年第5期1576-1582,共7页

全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸... 全球转基因油菜的数量和种类日益增多,其所带来的潜在风险也备受人们的关注,迫切需要开发一套精准、高效、便捷检测转基因油菜的技术体系。本研究针对花椰菜花叶病毒35 S启动子(pCaMV 35S)、膦丝菌素乙酰转移酶(bar)、5-莽草酸-3-磷酸合成酶基因(epsps)3个目标基因的序列,以及油菜内源基因cruciferinA (CruA)序列设计四重实时荧光定量聚合酶链式反应(Multiplex real-time fluorescence quantitative,PCR)特异性强的引物和多重荧光探针。通过对多个转基因油菜材料验证,结果表明该方法检测特异性强,重复性好,4个基因的扩增效率都在90%~105%之间,标准曲线相关系数R2都大于0.99。转基因成分bar,epsps和pCaMV35S的检出限为0.1 ng/μL,内参基因CruA的检出限为0.01 ng/μL。本研究建立了一种能快速、高效、准确检测转基因油菜四重实时荧光定量PCR技术的检测体系。 展开更多

关键词 转基因油菜 多重实时荧光定量pcr 检测

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多重qPCR在快速检测临床常见病原菌中的应用

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作者 徐健 周广 +2 位作者 邹立新 吴晓燕 赵思阳 《海南医学》 CAS 2023年第20期2966-2970,共5页

目的 构建基于多重实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测9种临床常见病原菌的体系。方法 针对达州市中心医院2021年1月至2021年12月分离的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌... 目的 构建基于多重实时荧光定量PCR(qPCR)快速检测9种临床常见病原菌的体系。方法 针对达州市中心医院2021年1月至2021年12月分离的金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌、阴沟肠杆菌、肺炎克雷伯菌、鲍曼不动杆菌、粪肠球菌和屎肠球菌等9种临床常见病原菌进行特异性引物和探针的设计,通过多重q PCR检测不同拷贝数的病原菌,利用PCR特异性和抗干扰能力强的优点,建立病原菌快速检测的多重qPCR反应体系,并用阳性样本进行验证。结果 9种病原菌的多重q PCR检测灵敏度可达5 Copies,重复性良好。通过对构建的体系进行特异性和抗干扰能力检测,发现该系统能够在杂菌的干扰下特异性地检测出病原菌,抗干扰能力强。最后通过对9份阳性病原菌样本进行检测,准确率达100%。结论 本研究通过针对临床9种常见病原菌多重q PCR快速检测方法的构建,能够及时准确地获得病原菌的鉴定结果,对于早期合理使用抗生素具有重要意义。 展开更多

关键词 临床常见病原菌 多重实时荧光定量pcr 快速检测 抗生素

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三种奶牛常见病菌多重PCR诊断方法的建立 被引量：3

12

作者 高瑞娜 张婷 《畜牧兽医杂志》 2015年第4期15-18,22,共5页

根据GenBank公布的布鲁氏菌Bcsp31、牛分枝杆菌pncA、炭疽杆菌capA三种特异基因的保守序列分别设计引物,在引物前添加通用引物(Tag),建立3种奶牛常见病菌的多重实时荧光定量PCR方法;通过构建3种病菌PCR扩增目的基因的质粒用于制备标准... 根据GenBank公布的布鲁氏菌Bcsp31、牛分枝杆菌pncA、炭疽杆菌capA三种特异基因的保守序列分别设计引物,在引物前添加通用引物(Tag),建立3种奶牛常见病菌的多重实时荧光定量PCR方法;通过构建3种病菌PCR扩增目的基因的质粒用于制备标准品进行敏感性验证;利用大肠杆菌、沙门氏菌和金黄色葡萄球菌用于特异性试验,并对30份样本进行了检测。结果表明,本研究构建的多重实时荧光定量PCR检测时间仅需2h,灵敏度为100个拷贝/uL,与其它细菌无交叉反应,特异性为100%,阳性检出率为88.89%。因此,本试验成功建立了检测3种奶牛常见病菌早期诊断的方法,可以在奶牛养殖中应用。 展开更多

关键词 奶牛 布鲁氏菌 牛分枝杆菌 炭疽杆菌 多重实时荧光定量pcr

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多重实时荧光定量PCR检测急性肝炎患者HBV和HCV方法的建立与意义分析 被引量：2

13

作者 陈泽惠 李欣钰 +3 位作者 肖湘文 丁渭 刘淑园 陈华云 《热带医学杂志》 CAS 2014年第6期751-754,F0004,共5页

目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。... 目的建立一种新的可以快速筛查急性肝炎患者HBV和HCV感染的多重实时荧光定量PCR方法。方法收集596例急性肝炎患者血清或血浆样本,应用自主构建的多重实时荧光定量PCR方法同时检测HBV和HCV,同时应用HBV和HCV单管检测试剂进行检测分析。结果新建立的多重实时荧光定量PCR体系,可以有效地检测HBV和HCV的阳性质控品及阳性样本。多重实时荧光定量PCR体系特异性较好,检测HBV和HCV时,两者之间无交叉反应,且以多种血浆病毒的核酸样品为模板进行检测时结果全为阴性;多重实时荧光定量PCR体系检测HBV、HCV的灵敏度分别为20 IU/ml、50 IU/ml;多重实时荧光定量PCR体系精密度好,检测HBV、HCV的CV值分别为0.11%、0.096%。在检测临床样本时,多重复合体系检测血清或血浆中HBV和HCV的检出率与单独检测HBV和HCV具有很好的一致性,且HBV和HCV的一致率分别达到97.7%(k=0.952)、98.8%(k=0.976);同时有6例样本出现HBV和HCV共感染。结论新型多重实时荧光定量PCR方法对快速检测及筛查HBV和HCV较快捷,而且特异性好、灵敏度高、精密度好。因此多重实时荧光定量PCR方法对2种肝炎病毒的检测具有重要意义。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 急性肝炎B C病毒 快速检测

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多重荧光定量PCR甄别霍乱弧菌方法的建立 被引量：2

14

作者 张政 金大智 +2 位作者 朱水荣 叶菊莲 罗芸 《中华流行病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期1026-1029,共4页

目的 利用多重荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别霍乱弧菌的定量方法.方法 分别根据霍乱弧菌霍乱毒素A亚单位基因（ctxA）和糖基转移酶基因（LPSgt）作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan-MGB探针,探针的5＇端分别用FAM和VIC... 目的 利用多重荧光定量PCR技术,建立一种快速、准确、特异甄别霍乱弧菌的定量方法.方法 分别根据霍乱弧菌霍乱毒素A亚单位基因（ctxA）和糖基转移酶基因（LPSgt）作为检测的靶基因,设计引物和TaqMan-MGB探针,探针的5＇端分别用FAM和VIC进行荧光标记,3＇端标记MGB.优化PCR扩增体系,对多重实时荧光定量PCR方法的特异性、灵敏度、重复性评价,同时进行一定数量临床样本考核鉴定,与常规方法进行比较.结果 该方法可准确、特异地鉴定霍乱弧菌,同时能够甄别O139群霍乱弧菌.全部的霍乱弧菌用ctxA基因对应引物和探针检测均为阳性,其中只有O139群霍乱弧菌出现LPSgt基因阳性,其他菌株均无阳性结果.检测的灵敏度为2×102 cfu/ml.同时对收集的45例临床样本进行鉴定,结果显示10例为霍乱弧菌,其中O139群有4例,其余均为阴性结果,与常规鉴定方法一致.结论 研究建立的多重荧光定量PCR方法特异、灵敏、快速,可有效鉴定产毒霍乱弧菌及甄别O139群霍乱弧菌,可用于霍乱监测和防制工作中的实验室诊断. 展开更多

关键词 霍乱弧菌 多重实时荧光定量pcr

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多重荧光定量PCR甄别3种霍乱弧菌相关毒素基因 被引量：2

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作者 金大智 张政 +4 位作者 罗芸 叶菊莲 程苏云 吴方 金郁 《中国人兽共患病学报》 CAS CSCD 北大核心 2011年第12期1065-1070,共6页

目的为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法。方法针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方... 目的为了判定霍乱弧菌是否携带相关毒力因子,研发一种快速、准确、特异检测霍乱弧菌3种毒素基因的多重荧光定量PCR方法。方法针对霍乱弧菌ctxA、ace、zot基因设计引物和探针,建立PCR体系,对70株霍乱弧菌分离株进行鉴定,采用直接测序方法对鉴定结果进行验证。结果建立的多重实时荧光定量PCR方法可同时准确、特异地鉴定霍乱弧菌菌体携带的3种毒素基因,不携带毒素基因的菌株均未出现阳性检测结果。菌体检测的最低检出限度ctxA基因:102 CFU/mL,ace基因和zot基因:10CFU/mL。构建了3种毒素相关基因阳性质粒,ace基因和zot基因的最低检出限度为10copies/μL,ctxA基因的最低检出限度为102 copies/μL,定量检测批间和批内的变异系数均小于5%;对70株霍乱弧菌分离株进行评价,结果显示其中40株(57.2%)携带ctxA毒素基因、31株(44.3%)携带ace毒素基因、46株(65.7%)携带zot毒素基因,通过测序方法验证,符合率达到100%。结论本文建立的多重实时荧光定量PCR方法操作简便、特异性好、灵敏度高,为霍乱弧菌的现场流行病学调查和疫情监测提供了快速、可靠的鉴定工具。 展开更多

关键词 多重实时荧光定量pcr 霍乱弧菌 毒素

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猪流行性腹泻病毒、传染性胃肠炎病毒和轮状病毒多重实时荧光定量RT-PCR检测方法的建立 被引量：2

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作者 刘邓 贾泽颖 +5 位作者 张丹 全炎铭 郭又春 刘莉如 刘修全 陈华林 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2017年第8期45-50,288,289,共8页

为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化... 为了建立一种能够同时检测猪流行性腹泻病毒(PEDV)、传染性胃肠炎病毒(TGEV)和轮状病毒(RV)的多重实时荧光定量PCR方法,试验根据PEDV CV777株、TGEV Purdue P115株全基因序列和RV OSU毒株的VP6基因序列,设计出3对特异性引物及探针,优化反应条件,开展特异性、敏感性、重复性和验证试验。结果表明:该方法的检测最低限为1×10~2拷贝/μL的RNA标准品或1×10^(-2)TCID_(50)/mL的疫苗毒,具有较高的敏感性;变异系数均小于10%,符合统计学要求;利用本试验所建立的方法以及商品化试剂盒对20份临床样品进行检测,符合率为100%。说明本试验建立的方法特异性好,敏感性高,重复性稳定,可用于PEDV、TGEV和RV的鉴别诊断和防控。 展开更多

关键词 传染性胃肠炎病毒(TGEV) 猪流行性腹泻病毒(PEDV) 轮状病毒(RV) 检测 多重实时荧光定量pcr

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基于16S rRNA基因的食源性致病菌实时荧光定量PCR检测研究 被引量：2

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作者 刘玲雪 孙红炜 +4 位作者 李凡 徐晓辉 高瑞 杨淑珂 路兴波 《山东农业科学》 2017年第6期126-134,共9页

本研究以16S rRNA基因作为靶基因,利用TaqMan探针技术建立了针对志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三种主要食源性致病菌的多重实时荧光定量PCR检测技术。结果表明,建立的荧光定量PCR... 本研究以16S rRNA基因作为靶基因,利用TaqMan探针技术建立了针对志贺氏菌(Shigella)、沙门氏菌(Salmonella)和金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)三种主要食源性致病菌的多重实时荧光定量PCR检测技术。结果表明,建立的荧光定量PCR检测体系特异性良好、灵敏度高、简便快捷,大大缩短了检测时间,在食源性致病菌快速筛查方面具有良好的应用前景。 展开更多

关键词 食源性致病菌 16S RRNA基因 多重实时荧光定量pcr TAQMAN探针

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抗草甘膦转基因大豆DNA标准分子构建及多重荧光PCR检测体系的建立

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作者 赖心田 刘小青 +2 位作者 洪晓明 陈国培 杨国武 《检验检疫学刊》 2012年第1期4-7,共4页

[目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有C... [目的]将抗草甘膦转基因大豆中的CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS 3种外源基因融合在PMD-18T载体并建立三重实时荧光PCR检测方法,实现通过一次PCR反应就能完成抗草甘膦转基因大豆的转基因成分检测。[方法]通过PCR扩增和基因克隆的方法构建含有CaMV35S、NOS和CP4 EPSPS外源基因的质粒,设计TaqMan探针建立三重荧光PCR检测体系。[结果]成功构建融合抗草甘膦转基因大豆3种外源基因质粒PMD18T/SOY,并建立三重荧光PCR检测体系,检测限值为10-3 ng/μL,线性关系良好r,2在0.998以上。[结论]构建同时含有多种外源基因的质粒作为转基因检测的阳性参照物并建立多重PCR检测体系,不仅可降低试剂成本、节省时间和人力,而且可以减少PCR反应次数和加样环节,降低PCR污染的几率。 展开更多

关键词 抗草甘膦转基因大豆 多重实时荧光定量pcr 转基因成分检测

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多重实时荧光定量PCR对下呼吸道感染病原体检测分析 被引量：11

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作者 刘馨玉 李萌 +1 位作者 石璞玉 陈明伟 《中华肺部疾病杂志（电子版）》 CAS 2019年第5期559-562,共4页

目的比较多重实时荧光定量PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction,MRTPCR)和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对成人呼吸道病毒及非典型病原体检测结果。方法收集2014年1月至2017年12月间呼吸内科21... 目的比较多重实时荧光定量PCR(multiplex real-time polymerase chain reaction,MRTPCR)和间接免疫荧光法(indirect immunofluorescence assay,IFA)对成人呼吸道病毒及非典型病原体检测结果。方法收集2014年1月至2017年12月间呼吸内科210例成人呼吸道感染的标本,采用MRTPCR检测8种常见呼吸道病原体,同时应用IFA检测血清8种病原体Ig M抗体,并全部进行PCR及测序分析,比较两种方法的特异性及敏感性,评估MRT-PCR的临床应用价值。结果 210例下呼吸道感染标本经MRT-PCR和IFA检测,阳性率分别为58.57%和38.10%,混合感染率分别为7.62%和4.76%。两种方法的灵敏度分别为94.74%和35.96%,特异度分别为84.38%和59.38%。灵敏度和特异度差异有统计学意义(P<0.05)。结论与IFA相比,MRT-PCR灵敏度、特异度好,检测性能优于IFA。 展开更多

关键词 下呼吸道感染 呼吸道病毒 非典型病原体 间接免疫荧光法 多重实时荧光定量pcr

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改良多重实时荧光定量PCR法测定抑癌基因MGMT、p16、CDH13和RASSF1A甲基化在肺癌早期诊断中的作用 被引量：6

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作者 钟云华 李燕 《东南大学学报（医学版）》 CAS 2019年第1期33-38,共6页

目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量... 目的:建立改良多重实时荧光定量PCR法,检测抑癌基因MGMR、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,探讨其在肺癌早期诊断中的应用。方法:选取30例病理确诊为肺癌的患者作为肺癌组,30例病理确诊为良性病变的患者作为对照组。建立改良实时荧光定量PCR体系。检测受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化,对比两组基因甲基化阳性率,计算四项基因甲基化单独及联合用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度。结果:肺癌组受试者血清MGMT、p16、CDH13和RASSF1A显著高于对照组(P<0.05);MGMT、p16、CDH13和RASSF1A四项基因甲基化联合检测用于肺癌早期诊断的敏感度和特异度显著高于单项指标检测(P<0.05)。结论:建立了多重实时荧光定量PCR法用于MGMT、p16、CDH13和RASSF1A基因甲基化检测,联合检测用于肺癌早期诊断具有较高的敏感度和特异度。 展开更多

关键词 改良多重实时荧光定量pcr法 抑癌基因 MGMT P16 CDH13 RASSF1A 肺癌早期诊断

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