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多酶恒温核酸快速扩增法检测大肠杆菌O157∶H7 被引量：8
1
作者 王淑娟 范一灵 +6 位作者 冯震 蒋波 宋明辉 李琼琼 刘浩 秦峰 杨美成 《上海预防医学》 CAS 2022年第6期511-518,共8页
【目的】采用多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)荧光法,结合金属有机骨架免疫磁珠富集功能,开发大肠杆菌O157∶H7快速富集和检测方法。【方法】以rfbE基因为靶标,筛选引物、探针及优化反应体系,同时考察该方法的特异性、灵敏度和实际应用情况... 【目的】采用多酶恒温核酸快速扩增(MIRA)荧光法,结合金属有机骨架免疫磁珠富集功能,开发大肠杆菌O157∶H7快速富集和检测方法。【方法】以rfbE基因为靶标,筛选引物、探针及优化反应体系,同时考察该方法的特异性、灵敏度和实际应用情况。【结果】检测大肠杆菌O157∶H7菌体的检测限为1.18×10^(5) CFU‧mL^(-1),菌体DNA质量浓度检测限为9 pg‧µL^(−1),检测过程可在20 min内完成。47株菌(24株目标菌和23株非目标菌)特异性验证结果与实时荧光定量聚合酶链式反应(RT⁃PCR)方法一致。【结论】该研究开发了一种基于金属有机骨架免疫磁珠富集结合MIRA的检测方法,该法操作简单、反应迅速,适用于食品中大肠杆菌O157∶H7的快速富集和检测。 展开更多
关键词 多酶恒温核酸快速扩增技术 金属有机骨架免疫磁珠 rfbE基因 大肠杆菌O157∶H7
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重组酶扩增技术概述及应用研究进展
2
作者 陈兴浩 李鑫 +10 位作者 沈海潇 张校培 徐丽娜 张鹤平 葛菲菲 杨显超 刘健 白艺兰 王建 杨德全 赵洪进 《中国动物检疫》 CAS 2023年第11期76-81,共6页
重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒... 重组酶扩增技术是近几年快速发展起来的一类等温扩增技术,相对于传统的核酸检测方法,具有设备要求低、操作简单等优势,在现场快速检测方面有着广阔的应用前景。本文简要介绍了重组酶扩增技术的技术原理、优点和难点,重点阐述了其在病毒、细菌、寄生虫及其他微生物检测领域的应用研究进展,旨在为重组酶扩增技术的进一步发展与应用提供参考。 展开更多
关键词 重组酶聚合酶扩增技术 酶促重组等温扩增技术 重组酶介导等温扩增技术 多酶恒温核酸快速扩增技术
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基于MIRA技术的霍乱弧菌胶体金试纸条快速检测方法的建立 被引量：5
3
作者 李盛杰 江海涛 吴雨龙 《江苏农业科学》 北大核心 2021年第24期167-171,共5页
为了建立一种快速、灵敏、便捷的针对霍乱弧菌的检测方法,利用多酶恒温核酸快速扩增技术,对不同引物组在胶体金试纸条检测中的特异性和灵敏度进行研究。研究结果表明,在以质粒为模板的特异性试验中,Probe1+引物对2、Probe1+引物对3、Pro... 为了建立一种快速、灵敏、便捷的针对霍乱弧菌的检测方法,利用多酶恒温核酸快速扩增技术,对不同引物组在胶体金试纸条检测中的特异性和灵敏度进行研究。研究结果表明,在以质粒为模板的特异性试验中,Probe1+引物对2、Probe1+引物对3、Probe2+引物对5这3组引物组均显示出较高的特异性。但在灵敏度试验中,仅有Probe2+引物对5能够检出浓度为0.1 fg/μL的质粒模板。在后续以核酸为模板的特异性和灵敏度试验中,Probe2+引物对5的引物组合同样显示出较强的特异性,并对核酸模板的检出限可达到10 fg/μL,均显示出优于另外2种组合的特异性和灵敏度。本研究所建立的基于MIRA技术的霍乱弧菌检测方法具有较高的特异性和灵敏度,对于推进霍乱弧菌及其他致病菌的现场快速检测具有重要意义。 展开更多
关键词 霍乱弧菌 多酶恒温核酸快速扩增技术 胶体金试纸
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DNA条码联合MIRA技术在动物源性种属鉴定中的优势
4
作者 王奕琳 佟画 韩瑞 《中文科技期刊数据库（全文版）医药卫生》 2023年第4期1-3,共3页
近年来,由于动物制品造假现象频发,严重扰乱市场经济行为,侵犯消费者权益。基于此,有关动物源性成分的种属鉴定技术广泛应用于食品、药品等领域,为保障人民群众饮食安全、消费权益做出了巨大贡献。本文综述基于现有的动物源性成分检测... 近年来,由于动物制品造假现象频发,严重扰乱市场经济行为,侵犯消费者权益。基于此,有关动物源性成分的种属鉴定技术广泛应用于食品、药品等领域,为保障人民群众饮食安全、消费权益做出了巨大贡献。本文综述基于现有的动物源性成分检测技术如聚合酶链式反应技术(PCR),高光谱成像技术(HSI),环介导等温扩增技术( LAMP)存在着不同程度的局限性,而我们将DNA条码技术与MIRA-FLD技术创新性结合,根据遗传序列设计通用引物,使用MIRA技术扩增引物,开创出一种新型的动物种属检测技术,具有检测时间短,人工耗材成本低,易于市场常规检查等优点。 展开更多
关键词 动物源性种属 聚合酶链式反应技术 高光谱成像技术 多酶恒温核酸快速扩增技术
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多酶恒温核酸快速扩增技术在霍乱弧菌检测中的应用
5
作者 李盛杰 江海涛 《南京晓庄学院学报》 2021年第6期49-52,共4页
霍乱弧菌(Vibriocholera)是水产养殖中常见的致病菌,建立起快速、灵敏、便捷的检测方法对加强水产养殖病害监测和防控工作有重要意义.本研究利用多酶恒温核酸快速扩增技术,根据霍乱弧菌外膜蛋白基因ompW的保守序列,设计6对引物组,对引... 霍乱弧菌(Vibriocholera)是水产养殖中常见的致病菌,建立起快速、灵敏、便捷的检测方法对加强水产养殖病害监测和防控工作有重要意义.本研究利用多酶恒温核酸快速扩增技术,根据霍乱弧菌外膜蛋白基因ompW的保守序列,设计6对引物组,对引物特异性进行验证;并设计不同的模板浓度梯度,以验证该方法的灵敏度.结果表明,本研究确定的引物对霍乱弧菌检测的特异性强,灵敏度高(可低至10 fg/μL),无需特殊设备,适合实验室或者现场的快速检测要求. 展开更多
关键词 霍乱弧菌 多酶恒温核酸快速扩增技术 外膜蛋白基因
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