美罗培南耐药铜绿假单胞菌多药外排泵研究 被引量：10

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作者 沈继录 吴卫红 朱德妹 《中国感染与化疗杂志》 CAS 2011年第6期446-451,共6页

目的研究美罗培南耐药铜绿假单胞菌的多药外排泵机制。方法采用琼脂稀释法测定美罗培南对141株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),同时观察加入泵抑制剂MC207110后的美罗培南对141株铜绿假单胞菌MIC变化,检测多药外排泵机制。实时定量PC... 目的研究美罗培南耐药铜绿假单胞菌的多药外排泵机制。方法采用琼脂稀释法测定美罗培南对141株铜绿假单胞菌的最低抑菌浓度(MIC),同时观察加入泵抑制剂MC207110后的美罗培南对141株铜绿假单胞菌MIC变化,检测多药外排泵机制。实时定量PCR检测外排泵mRNA水平的表达。PCR扩增外排泵编码基因及调控基因并测序分析。结果外排泵表型试验显示美罗培南对69.1%(65/94)菌株的MIC降低至原来的1/4～1/512。20株美罗培南耐药铜绿假单胞菌中有4种外排泵基因mRNA表达水平有增高。其中以MexEF-OprN为最多,共有10株。其次为MexCD-oprJ,有5株。MexAB-OprM有4株,MexXY-OprM有3株。其中有2株细菌的MexA和MexC基因mRNA表达水平同时增高。20株美罗培南耐药铜绿假单胞菌的4种外排泵调控基因测序结果显示MexAB-OprM过度表达的菌株中有3株系mexR突变,1株系nalC突变所致,未发现nalD突变。5株MexCD-OprJ过度表达的菌株均发生了nfxB突变,10株MexEF-OprN高表达株均有mexT突变,3株MexXY-OprM高表达株均有mexZ基因突变。20株菌株外排泵编码基因(MexB、MexD、MexF、MexY)均未发生突变。结论外排泵机制可能是造成铜绿假单胞菌对美罗培南耐药的主要原因之一。外排泵系统的过度表达主要是由于其相应的调节基因突变所致。 展开更多

关键词 铜绿假单胞菌 耐药性 美罗培南 多药外排泵

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降压药左旋氨氯地平胁迫下肺炎克雷伯菌产生多种抗生素耐药性的机制研究

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作者 刘鑫鑫 房辉 +2 位作者 夏大胜 罗义 毛大庆 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第3期97-108,共12页

左旋氨氯地平(S-amlodipine,S-AM)是一种降压药,在高血压患者中被广泛使用,部分患者更是长期使用。然而,作为一种非抗生素药物,在其长期胁迫下,细菌是否会进化出抗生素抗性,我们对此一无所知。为了探讨S-AM暴露对细菌抗生素耐药性的影响... 左旋氨氯地平(S-amlodipine,S-AM)是一种降压药,在高血压患者中被广泛使用,部分患者更是长期使用。然而,作为一种非抗生素药物,在其长期胁迫下,细菌是否会进化出抗生素抗性,我们对此一无所知。为了探讨S-AM暴露对细菌抗生素耐药性的影响,本研究针对肠道固有的条件致病菌肺炎克雷伯菌进行了为期60 d的2 mg·L^(-1)S-AM胁迫下体外进化实验。通过抗生素敏感性测试确定了进化菌株对6种抗生素的耐药性;运用基因组测序技术、荧光定量PCR分析及生物信息学分析,深入探究了S-AM诱导细菌抗生素耐药性的机制。结果显示,在S-AM暴露下肺炎克雷伯菌的突变频率从10^(-7)增加到1.5×10^(-1);进化菌株的胞内活性氧(reactive oxygen species,ROS)水平显著提高;同时对多黏菌素、卡那霉素、氯霉素、红霉素和莫西沙星表现出更高的耐药性。基因组学分析结果显示,在进化菌株中发现了3个非同义单核苷酸多态性(single nucleotide polymorphism,SNP)突变位点、1个同义SNP突变位点、2个基因间的SNP和1个基因间的插入位点。其中,突变的crrB基因协同crrA基因提高了进化菌株细胞膜脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)脂质A组分的修饰,增加了细菌细胞膜表面的正电荷并阻止多黏菌素与细胞相互作用,从而提高了肺炎克雷伯菌对多黏菌素的耐药性。荧光定量PCR的结果显示,S-AM暴露下双组分调节系统基因(如crrAB、phoPQ、pmrAB和pmrDFIK)、多药外排泵基因(如emrD和oqxAB)以及固有耐药基因(如aadA 2)的表达水平升高,这可能是导致细菌多种抗生素耐药性增加的原因。总之,我们的研究首次发现S-AM胁迫下肺炎克雷伯菌对多种抗生素产生耐药性,并阐明了潜在的分子机制,为长期用药患者的健康风险提出预警,并为进一步研究S-AM长期胁迫下的广泛肠道细菌耐药性奠定基础。 展开更多

关键词 左旋氨氯地平 肺炎克雷伯菌 抗生素耐药性 双组分调节系统 多药外排泵

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猪源沙门氏菌多药外排泵oqx AB和氟苯尼考耐药基因floR的检测分析 被引量：5

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作者 李帆 罗行炜 +5 位作者 刘建华 梁军 贺丹丹 潘玉善 苑丽 胡功政 《江西农业学报》 CAS 2018年第11期82-85,共4页

用微量肉汤稀释法测定了215株猪源沙门氏菌对4种抗菌药物的敏感性,用PCR方法测定了多药外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐药基因floR,并用ERIC-PCR方法分析了猪源沙门氏菌菌株之间的相关性和遗传关系。结果显示:分离菌株对喹乙醇、痢菌... 用微量肉汤稀释法测定了215株猪源沙门氏菌对4种抗菌药物的敏感性,用PCR方法测定了多药外排泵基因oqxA、oqxB和氟苯尼考耐药基因floR,并用ERIC-PCR方法分析了猪源沙门氏菌菌株之间的相关性和遗传关系。结果显示:分离菌株对喹乙醇、痢菌净、氟苯尼考和恩诺沙星的耐药率分别为32.56%、20.93%、92.56%、16.74%;有152株菌同时携带oqxA和oqxB,另有7株菌单独携带oqxB;有156株菌携带floR基因; oqxA或oqxB阳性菌株可分为A～Q 17个ERIC型,oqxA和oqxB基因分布于不同的ERIC型菌株中。 展开更多

关键词 沙门氏菌 多药外排泵 耐药表型 耐药基因 ERIC-PCR

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肺炎克雷伯菌药物外排泵mdtl的克隆及分析 被引量：1

4

作者 张芳 苏显中 王河清 《安徽农业科学》 CAS 北大核心 2011年第25期15380-15381,共2页

[目的]探讨肺炎克雷伯菌ATCC 49790(KP)耐药的分子机制。[方法]以KP基因组DNA为模板来扩增mdtl基因,将mdtl基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析;将扩增产物与载体连接后转化到大肠埃希菌KAM32感受态细胞中,对转化子进行药敏分析。[结果... [目的]探讨肺炎克雷伯菌ATCC 49790(KP)耐药的分子机制。[方法]以KP基因组DNA为模板来扩增mdtl基因,将mdtl基因扩增产物进行DNA测序及同源性分析;将扩增产物与载体连接后转化到大肠埃希菌KAM32感受态细胞中,对转化子进行药敏分析。[结果]KP的mdtl基因扩增产物与已报道的mdtl基因核苷酸序列同源性达到99%,这个转化子对红霉素、氯霉素和卡那霉素具有很高的耐药性,这种高耐药性能被外排泵抑制剂羰基氰氯苯腙和维拉帕米逆转。[结论]克隆到了KP一多药外排基因。 展开更多

关键词 多药外排泵 抗药性 肺炎克雷伯菌

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肠杆菌科AcrAB多药外排泵分子演化分析 被引量：1

5

作者 侯进慧 陈宏伟 +1 位作者 高兆建 蔡侃 《生物技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第4期18-21,共4页

目的:分析肠杆菌科AcrAB多药外排泵的分子演化规律,为多药耐药性病原菌的防治提供基础数据。方法:从NCBI获得肠杆菌科物种AcrAB多药外排泵相关蛋白和核酸序列,采用分析软件,分析肠杆菌科物种AcrAB多药外排泵相关序列。结果:在肠杆菌科... 目的:分析肠杆菌科AcrAB多药外排泵的分子演化规律,为多药耐药性病原菌的防治提供基础数据。方法:从NCBI获得肠杆菌科物种AcrAB多药外排泵相关蛋白和核酸序列,采用分析软件,分析肠杆菌科物种AcrAB多药外排泵相关序列。结果:在肠杆菌科各物种AcrA、AcrB和AcrR与大肠埃希氏菌同源性在55%、75%和43%以上。AcrA保守位点分散,在N端和C端较少,在分子一级结构中段较多。AcrB跨膜序列保守性较高,与质子转移相关的三个位点D407、D408和K940以及稳定这三者结构的T978在肠杆菌科完全保守,其一级结构上相邻位点也保守。AcrR序列整体保守性较低,但HTH区域保守性高。与AcrR结合的回文结构及周围序列保守性高,在"茎"结构中仅存在一个氨基酸的差异。结论:AcrAB多药外排泵在肠杆菌科中广泛存在,有一定的保守性。分析肠杆菌科AcrAB多药外排泵有助于病原菌多药耐药性的防治。 展开更多

关键词 肠杆菌科 AcrAB 多药外排泵 分子演化

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细菌多药外排泵的调节及与细菌毒力的关系 被引量：1

6

作者 周孝荣 胡佳学 +1 位作者 刘德福 冯振月 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第7期53-57,共5页

引起抗生素抗性的因素包括靶位点改变、药物失活、细胞膜通透性改变及多药外排泵的外排作用。对药物外排泵外排机理、调节网络及外排泵生理学功能的了解可以加深对抗生素抗性的了解。许多细菌基因组已经完成测序,能够推测基因组中存在... 引起抗生素抗性的因素包括靶位点改变、药物失活、细胞膜通透性改变及多药外排泵的外排作用。对药物外排泵外排机理、调节网络及外排泵生理学功能的了解可以加深对抗生素抗性的了解。许多细菌基因组已经完成测序,能够推测基因组中存在的外排泵基因。文章主要介绍大肠杆菌和沙门氏菌中的药物外排泵和它们的调节网络以及多药外排泵与细菌毒力的关系。 展开更多

关键词 多药外排泵 细菌基因组 调节网络 大肠杆菌 沙门氏菌 细菌毒力

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外排泵抑制剂对汉赛巴尔通体多重耐药性的影响

7

作者 宋秀平 刘起勇 +5 位作者 刘云彦 王君 焦铭 倪文丽 姜亚运 栗冬梅 《中国抗生素杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期770-775,共6页

目的体外诱导使汉赛巴尔通体对红霉素、环丙沙星和多西环素产生多耐药,检测外排泵抑制剂在巴尔通体多重耐药机制中的作用。方法选取7株敏感菌株,顺序逐级倍增红霉素、环丙沙星和多西环素诱导浓度,诱导成为耐药菌株。检测多耐药菌株加入... 目的体外诱导使汉赛巴尔通体对红霉素、环丙沙星和多西环素产生多耐药,检测外排泵抑制剂在巴尔通体多重耐药机制中的作用。方法选取7株敏感菌株,顺序逐级倍增红霉素、环丙沙星和多西环素诱导浓度,诱导成为耐药菌株。检测多耐药菌株加入羰酰氰间氯苯腙(carbonyl cyanide-3-chlorophenylhyrazone,CCCP)前后的MICs值的变化。结果 6株获得对红霉素、阿奇霉素、克林霉素(MICs>256mg/L)和环丙沙星(MICs>32mg/L)的联合耐药;4株菌获得对上述抗生素(MICs>256mg/L)和多西环素(MICs为4mg/L)的联合耐药。加入5mg/L CCCP后,红霉素、环丙沙星、多西环素对敏感菌与耐药菌的MICs值没有明显变化。结论获得汉赛巴尔通体对红霉素、阿奇霉素、克林霉素、环丙沙星和多西环素联合耐药菌株,外排泵抑制试验提示外排作用不是这些抗生素的主要机制。 展开更多

关键词 汉赛巴尔通体 多药外排泵 耐药 最小抑菌浓度

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细菌耐多药外排泵的研究进展 被引量：10

8

作者 陈小燕 潘珏 《微生物与感染》 2016年第3期183-187,共5页

近年来,由于抗生素的不合理及广泛使用,全球多重耐药菌和广泛耐药菌不断出现。关于细菌耐药机制中外排泵及生物膜形成的研究越来越受关注。研究发现,外排泵与生物膜形成有密切联系,不同细菌的不同外排泵对生物膜形成的影响各异,而生物... 近年来,由于抗生素的不合理及广泛使用,全球多重耐药菌和广泛耐药菌不断出现。关于细菌耐药机制中外排泵及生物膜形成的研究越来越受关注。研究发现,外排泵与生物膜形成有密切联系,不同细菌的不同外排泵对生物膜形成的影响各异,而生物膜形成又影响外排泵基因表达。本文就细菌耐多药外排泵的研究进展进行综述。 展开更多

关键词 耐多药外排泵 生物膜形成 外膜因子

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肺炎克雷伯菌的多药外排泵KetM的解析 被引量：2

9

作者 高桂凤 李英民 +1 位作者 孙佳岩 张晓燕 《中国兽药杂志》 2012年第7期7-11,共5页

采用克隆技术从肺炎克雷伯菌分离菌株MGH78578的染色体中把耐药基因ketM克隆到载体pBluescript Ⅱ上,从而获得了重组质粒pDSH8。利用遗传学和生物化学方法对基因ketM进行解,发现ketM是一个属于MATE型多药外排泵的基因,可为生物制药的研... 采用克隆技术从肺炎克雷伯菌分离菌株MGH78578的染色体中把耐药基因ketM克隆到载体pBluescript Ⅱ上,从而获得了重组质粒pDSH8。利用遗传学和生物化学方法对基因ketM进行解,发现ketM是一个属于MATE型多药外排泵的基因,可为生物制药的研究提供理论依据和数据基础。 展开更多

关键词 肺炎克雷伯菌 多药外排泵KetM 耐药性基因

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临床分离金黄色葡萄球菌对大环内酯类抗生素耐药性及耐药基因的分析 被引量：8

10

作者 姚健 邵雷 +2 位作者 刘鹏宇 陈代杰 张玉彬 《药物生物技术》 CAS 2016年第4期291-295,共5页

文章研究了上海华山医院临床分离的金黄色葡萄球菌菌株对大环内酯类抗生素的耐药性及耐药基因的分布情况。通过MIC法对临床标本分离的27株金黄色葡萄球菌对大环内酯类抗生素药敏性进行检测,并通过PCR扩增分析其中14株菌携带的大环内酯... 文章研究了上海华山医院临床分离的金黄色葡萄球菌菌株对大环内酯类抗生素的耐药性及耐药基因的分布情况。通过MIC法对临床标本分离的27株金黄色葡萄球菌对大环内酯类抗生素药敏性进行检测,并通过PCR扩增分析其中14株菌携带的大环内酯类抗生素耐药基因。结果表明27株金黄色葡萄球菌对4种大环内酯类抗生素:红霉素、螺旋霉素I、阿奇霉素和克拉霉素的耐药率分别为74.1%,48.1%,74.1%和74.1%;对林可酰胺类抗生素林可霉素的耐药率为77.8%;对酮内酯类抗生素泰立霉素的耐药率为77.8%。分析了其中14株临床菌的23rRNA序列保守碱基位点的突变和所携带的大环内酯类抗生素耐药基因情况。结果表明这14株临床菌的23rRNA序列保守碱基位点均没有发生突变。根据耐药基因PCR检测结果,发现这14种临床菌株中,有6株ermA阳性菌和和3株ermC阳性菌,但是并没有发现ermB的阳性菌株;ermA和ermC的检出率分别是42.86%和21.43%;耐药基因ermA存在于MRSA菌株中,其阳性率85.71%;而耐药基因ermC则出现在MSSA菌株中,其阳性率42.86%。另外,耐药基因msr A在14株临床分离菌株的检出率是92.86%,但没有发现它和大环内酯抗生素的药物敏感性存在相关性。27株临床分离菌株对除螺旋霉素I外的其它5种大环内酯-林可酰胺类抗生素耐药率均大于70%。耐药基因ermA和ermC是金黄色葡萄球耐药的主要原因。 展开更多

关键词 金黄色葡萄球菌 大环内酯类抗生素 耐药性 甲基化酶 23rRNA序列保守碱基位点 多药耐药外排泵

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细菌的多药耐药外排泵 被引量：2

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作者 刘茜醇 王丹 +2 位作者 何亚峰 陈未中 陈浩 《药物生物技术》 CAS 2013年第2期175-178,共4页

由于抗生素药物的不合理使用等原因,病原微生物耐药性问题日益突出,严重影响了细菌性感染疾病的治疗效果,也逐渐成为目前人类着重关注的健康问题。微生物可通过多种方式来抵御抗生素引起的毒性,其中利用耐药泵将药物直接外排的方式是细... 由于抗生素药物的不合理使用等原因,病原微生物耐药性问题日益突出,严重影响了细菌性感染疾病的治疗效果,也逐渐成为目前人类着重关注的健康问题。微生物可通过多种方式来抵御抗生素引起的毒性,其中利用耐药泵将药物直接外排的方式是细菌主要的耐药性机制之一。通过对耐药泵结构和机制的研究,有利于开发以多药耐药泵为作用靶点的细菌敏感型药物,对于降低细菌耐药性和进行临床治疗有重要指导意义。文章概述了当前细菌的多药耐药外排泵的主要分类和分布、结构特征、作用机制及表达调控等方面,阐明了多药耐药外排泵抑制剂的研究意义和价值,并对其研究前景进行展望。 展开更多

关键词 细菌 多药耐药外排泵 抗生素 多药耐药外排泵抑制剂

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结核分枝杆菌毒力基因片段Rv0450c分子克隆及原核表达

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作者 吴俐健 李嵚 +4 位作者 孙美秋 邹傅 贾本智 苍保宏 王笑歌 《中国公共卫生》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期415-417,共3页

目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分... 目的通过分子克隆的方法对结核分枝杆菌H37Rv中编码MMPL4蛋白的Rv0450c基因以及编码该蛋白一个161氨基酸的膜内区域(I161)和一个371氨基酸的膜外区域(O371)的基因片段在大肠杆菌中的表达和纯化方法进行研究,为进一步探讨MMPL4与结核分枝杆菌耐药相关功能性研究以及抗体制备提供依据。方法以结核分枝杆菌H37Rv基因组DNA为模板,采用PCR方法扩增Rv0450c基因片段,并克隆到原核表达载体pET28b质粒中,获得的重组质粒转化原核表达宿主大肠杆菌BL2 1(DE3)pLysS中,经IPTG诱导后SDS-PAGE电泳方法检测重组蛋白的表达,并进行纯化。结果从结核分枝杆菌基因组H37RvDNA中成功扩增出Rv0450c基因及编码I161/O371的DNA片段,并构建原核表达质粒pET28b-Rv0450c,pET28b-I161和pET28b-O371重组MMPL4蛋白和I161在大肠杆菌中表达不明显,而膜外区域O371以包涵体形式高表达。结论 Rv0450c基因原核表达质粒可以成功构建并在大肠杆菌内较好表达,为进一步MMPL4功能研究和抗体制备打下良好基础。 展开更多

关键词 结核分枝杆菌 多药耐药外排泵系统 Rv0450c 表达

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