大肠杆菌多基因共表达策略 被引量：15

1

作者 马蓉 徐昊 +2 位作者 丁锐 敖永华 张立军 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第4期117-122,共6页

利用基因工程手段实现多个基因在同一宿主菌中共表达是大肠杆菌细胞发育调节研究和代谢途径改造的有效手段。介绍了单一转录单元的多基因共表达载体、多重转录单元的多基因共表达和单基因载体的构建原理、特点、优势及转化策略,并着重... 利用基因工程手段实现多个基因在同一宿主菌中共表达是大肠杆菌细胞发育调节研究和代谢途径改造的有效手段。介绍了单一转录单元的多基因共表达载体、多重转录单元的多基因共表达和单基因载体的构建原理、特点、优势及转化策略,并着重介绍了利用LIC衔接子实现基因在多基因载体上定位连接的原理和方法。 展开更多

关键词 基因 共表达 多基因载体 单基因载体

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基于2A肽策略构建多基因表达载体的研究进展 被引量：12

2

作者 张欢 黄思超 蔡绍晖 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第1期104-108,共5页

多基因表达载体的构建在生物技术领域尤其是基因治疗方面显得日趋重要。目前常用的多基因表达载体多存在载体容量小、上下游基因表达失衡、蛋白活性低或蛋白空间位置不理想等缺陷。2A肽是近年使用较多的一种构建多基因载体的工具,与其... 多基因表达载体的构建在生物技术领域尤其是基因治疗方面显得日趋重要。目前常用的多基因表达载体多存在载体容量小、上下游基因表达失衡、蛋白活性低或蛋白空间位置不理想等缺陷。2A肽是近年使用较多的一种构建多基因载体的工具,与其它多基因构建策略相比,2A肽策略具有更明显优势。就(类)2A肽的来源、剪切机制、生物学特征、与蛋白定位的关系以及应用方面做一综述。 展开更多

关键词 多基因载体 2A肽 共表达

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转多基因欧美杨Bt基因表达特征 被引量：4

3

作者 张超 王进茂 +3 位作者 赵洁 庞丁玮 张德健 杨敏生 《林业科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2019年第9期61-70,共10页

【目的】探究转多基因欧美杨107杨中外源Bt基因是否稳定存在及表达,探索转基因107杨不同时间、不同部位Bt毒蛋白表达规律,研究多基因转化的载体结构及基因互作对外源基因表达稳定性和高效性的影响。【方法】选取1年生转Cry1Ac-Cry3A-NT... 【目的】探究转多基因欧美杨107杨中外源Bt基因是否稳定存在及表达,探索转基因107杨不同时间、不同部位Bt毒蛋白表达规律,研究多基因转化的载体结构及基因互作对外源基因表达稳定性和高效性的影响。【方法】选取1年生转Cry1Ac-Cry3A-NTHK1基因107杨3个株系(A1、A2、A3)和转Cry1Ac-Cry3A-BADH基因107杨3个株系(B1、B2、B3),通过PCR技术对转基因107杨中外源基因进行检测和验证,通过实时荧光定量PCR对Bt基因的转录丰度进行检测,利用ELISA技术对转基因107杨不同时间、不同部位毒蛋白含量进行检测。【结果】PCR检测结果显示,转基因107杨均能扩增出与阳性对照大小一致的特异性条带,阴性对照未扩增出特异性条带,证明外源基因在转基因107杨中稳定存在;实时荧光定量PCR检测结果表明,2种Bt基因在转基因107杨中均能稳定表达,Cry1Ac基因的转录丰度在2.1×10^4~5.1×10^4之间,Cry3A基因的转录丰度在2.8×10^6~5.6×10^7之间,Cry1Ac基因和Cry3A基因转录丰度无相关性;ELISA技术检测结果显示,转基因107杨中均检测到Cry1Ac和Cry3A毒蛋白存在。2种Bt基因转录丰度和毒蛋白含量无相关性,但2种Bt毒蛋白含量之间呈现出正相关关系。转2种不同载体的107杨6、7月份2种Bt毒蛋白的含量较低,8月份急剧上升,Cry1Ac毒蛋白的含量均在9月份达到峰值,Cry3A毒蛋白含量均在8月份达到峰值,10月急剧下降。8月份不同部位(上、中、下)的叶片Bt毒蛋白含量未表现出一致性规律,不同部位(上、中、下)木质部的Bt毒蛋白含量也未呈现出一致性规律。【结论】转Cry1Ac-Cry3A-NTHK1基因107杨和转Cry1Ac-Cry3A-BADH基因107杨不同株系间2种Bt基因的转录丰度存在显著差异,Cry3A基因的转录丰度显著高于Cry1Ac基因;2种Bt毒蛋白在各株系间存在显著差异,Cry1Ac毒蛋白含量极低,Cry3A毒蛋白含量极显著高于Cry1Ac,与转录水平检测结果一致。2种不同载体� 展开更多

关键词 转基因杨树 多基因载体 基因互作 外源基因表达 BT毒蛋白

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基于Cre/loxP重组系统的多基因载体构建及烟草转化研究 被引量：6

4

作者 贾香楠 李伟 +2 位作者 沈俊岭 欧阳昆唏 陈晓阳 《北京林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第5期121-125,共5页

利用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体系统将苏云杆菌毒蛋白基因(BtCryIAc)、甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)、GA20氧化酶基因(pttGA20ox)和rolB基因构建于植物表达载体pYL1305上,命名为pYL1305BBGR。采用农杆菌介导的叶盘法转... 利用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体系统将苏云杆菌毒蛋白基因(BtCryIAc)、甜菜碱醛脱氢酶基因(BADH)、GA20氧化酶基因(pttGA20ox)和rolB基因构建于植物表达载体pYL1305上,命名为pYL1305BBGR。采用农杆菌介导的叶盘法转化烟草,经PCR和Southern blot检测发现,多基因已成功转入烟草基因组中;经半定量RT-PCR检测证实,4个基因均能正常表达。 展开更多

关键词 CRE/LOXP重组系统 多基因表达载体 BtCrylAc基因 BADH基因 pttGA200x基因 ROLB基因

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盐角草甜菜碱合成相关基因的共表达提高转基因烟草的耐盐性 被引量：5

5

作者 胡艳梅 苏乔 +1 位作者 祖勇 刘纪文 《中国农学通报》 CSCD 北大核心 2010年第9期55-59,共5页

植物在逆境下能合成甜菜碱,其中磷酸乙醇胺N-甲基转移酶(PEAMT)和胆碱单加氧酶(CMO)是甜菜碱合成过程中的关键酶。将盐角草SePEAMT基因、SeCMO基因以及烟草的核基质结合区序列(Mar)利用Cre/loxP重组系统构建到同一表达载体上,得到植物... 植物在逆境下能合成甜菜碱,其中磷酸乙醇胺N-甲基转移酶(PEAMT)和胆碱单加氧酶(CMO)是甜菜碱合成过程中的关键酶。将盐角草SePEAMT基因、SeCMO基因以及烟草的核基质结合区序列(Mar)利用Cre/loxP重组系统构建到同一表达载体上,得到植物表达载体pYLTAC747N-Mar-SePEAMT-SeCMO-Mar。该载体用电击转化法转入农杆菌EHA105中,通过农杆菌介导法转化烟草,经PCR检测确定转基因植株。在含250mM NaCl的MS培养基上培养35天后,转基因植株生根而野生型植株不能生根;转基因烟草植株甜菜碱积累量显著高于野生型植株,约是野生型植株的5.6～7.7倍;转基因植株与野生型相比,相对电导率显著降低,叶绿素含量明显升高。以上结果表明共表达SePEAMT和SeCMO能有效提高烟草甜菜碱表达量从而提高烟草的耐盐性。 展开更多

关键词 甜菜碱 耐盐 SePEAMT SeCMO 多基因表达载体

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利用Cre/loxP重组系统构建甜菜碱合成酶多基因表达载体 被引量：4

6

作者 王亮 苏乔 安利佳 《高技术通讯》 CAS CSCD 北大核心 2007年第7期749-754,共6页

通过使用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体构建系统,将辽宁碱蓬（Suaeda liaotungesis kitag）的胆碱单加氧酶（CMO）基因、甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因以及烟草的核基质结合区（MAR）序列构建到同一表达载体上,得到可直... 通过使用一套基于Cre/loxP重组系统的植物多基因表达载体构建系统,将辽宁碱蓬（Suaeda liaotungesis kitag）的胆碱单加氧酶（CMO）基因、甜菜碱醛脱氢酶（BADH）基因以及烟草的核基质结合区（MAR）序列构建到同一表达载体上,得到可直接用于农杆菌转化的植物表达载体pYLTAC747H-MAR-BADH-CMO-MAR.该甜菜碱合成酶多基因表达载体的成功构建为进一步进行植物的遗传转化,以有效提高转基因植株的耐盐性提供了实验基础.实验中,用热激法替代了电击法进行质粒的大肠杆菌转化,并去掉了透析等步骤,简化了构建过程. 展开更多

关键词 CRE/LOXP重组系统 甘氨酸甜菜碱 CMO BADH MAR 多基因表达载体

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用于植物多基因表达载体构建的质粒系统 被引量：3

7

作者 陈任 张虹 +4 位作者 张芮 虎娟 周涛 安韶雅 林哲 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2018年第4期1138-1146,共9页

为克服目前常用于植物基因表达载体构建的质粒由于酶切位点有限,目的基因片段难于插入,缺少植物基因表达所必须的启动子、终止子和筛选标记等功能元件,无法构建多个基因表达载体等缺点,本研究通过对大肠杆菌(Escherichia coli)质粒p UC1... 为克服目前常用于植物基因表达载体构建的质粒由于酶切位点有限,目的基因片段难于插入,缺少植物基因表达所必须的启动子、终止子和筛选标记等功能元件,无法构建多个基因表达载体等缺点,本研究通过对大肠杆菌(Escherichia coli)质粒p UC18和双核农杆菌(Agrobacterium tumefaciens)Ti(tumer inducing)质粒p BI121进行改造,建立了一套适用于植物基因表达载体构建的质粒系统,即重组质粒p KAFCR80和p KAFCR100。p KAFCR80具有植物基因表达最常用的CAMV 35S启动子(cauliflower mosaic virus 35S promoter)和NOS终止子(Nopaline synthase terminator),并在其上游、中间和下游引入了多个克隆酶切位点,利用PCR等方法克隆得到的目的基因片段可以多种方式连接到35S启动子与NOS终止子之间;p KAFCR100具有卡那霉素NPTⅡ(neomycin phosphotransferaseⅡ)耐性基因和s GFP(synthetic green-fluorescent protein with S65T mutation)绿色荧光蛋白报告基因,以及其中间的多克隆酶切位点。p KAFCR80与p KAFCR100两个质粒的配合使用,可以方便地构建植物单个或多个基因表达载体。本研究以PCR扩增的甜叶菊葡萄糖基转移酶三个基因为材料,利用该质粒系统以单独和组合形式成功地构建了植物表达载体,验证了该系统的实用性。 展开更多

关键词 载体构建 质粒系统 多基因表达载体 新方法 甜叶菊葡萄糖基转移酶基因

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脂肪酸合成酶系多基因表达载体的构建 被引量：3

8

作者 汪坤福 朱贵明 +4 位作者 张莉 张涛 荆鑫鑫 江旭东 王明富 《中国老年学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第17期4178-4180,共3页

目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达... 目的利用独立表达盒法构建脂肪酸去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体进一步研究多基因表达载体中各个基因表达的相互影响。方法利用基因工程的方法扩增2个脂肪酸去饱和酶基因和2个延长酶基因,然后连接到pcDNA3.1(-)哺乳动物表达载体上,之后转化、筛选、酶切鉴定。最后脂质体法瞬时转染HK293T细胞,提取RNA检测这四个基因的表达情况。结果成功构建了含脂肪去饱和酶基因和延长酶基因的四基因表达载体pcDNA3.1-EF,并在HK293T细胞中成功表达。结论四基因表达载体pcDNA3.1-EF在HK293T细胞中成功表达,单个基因在表达载体中的次序对基因的表达没有明显影响。 展开更多

关键词 多不饱和脂肪酸 多基因表达载体 脂肪酸去饱和酶 脂肪酸延长酶

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四个脂肪酸合成酶基因在哺乳动物细胞中的超表达提高长链多不饱和脂肪酸生物合成效率 被引量：2

9

作者 朱贵明 Abdulmomen Ali Mohammed Saleh +5 位作者 Said Ahmed Bahwal 汪坤福 王明富 王迪迪 葛堂栋 孙洁 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1464-1472,共9页

DHA(22:6n-3)、EPA(20:5n-3)和ARA(20:4n-6)三种长链多不饱和脂肪酸在生物体内活性最强,它们在促进大脑发育和功能维持以及在预防和治疗心血管疾病、炎症、癌症等多种疾病方面有着重要作用。然而,尽管哺乳动物体内有完整的长链多不饱和... DHA(22:6n-3)、EPA(20:5n-3)和ARA(20:4n-6)三种长链多不饱和脂肪酸在生物体内活性最强,它们在促进大脑发育和功能维持以及在预防和治疗心血管疾病、炎症、癌症等多种疾病方面有着重要作用。然而,尽管哺乳动物体内有完整的长链多不饱和脂肪酸合成酶系,但哺乳动物合成这些长链多不饱和脂肪酸的效率很低而主要依赖于食物获取。本研究应用转基因方法,将哺乳动物来源的Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶这4种酶的编码基因构建成为一个多基因表达载体,然后转染哺乳动物细胞HEK293T,实现了4个目的基因的超表达,再通过气质联用(GC-MS)分析证实了DHA、EPA和ARA等长链多不饱和脂肪酸的合成效率及水平显著增加,DHA的水平更是提高了2.5倍。由此可见,哺乳动物具有某种抑制长链多不饱和脂肪酸高水平合成的机制,但通过Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶的超表达,能够打破哺乳动物这种抑制机制,从而显著提高DHA、EPA、ARA等的合成水平。同时,本研究的思路也为在转基因动物中生产长链多不饱和脂肪酸提供了重要的启示。 展开更多

关键词 多不饱和脂肪酸 脂肪酸去饱和酶 脂肪酸延长酶 多基因表达载体

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文昌鱼中一个2A肽介导的多基因表达载体构建 被引量：2

10

作者 华俊豪 李光 王义权 《厦门大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期44-49,共6页

2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因... 2A肽(P2A)介导的多基因表达载体具有高裂解活性且上、下游基因等摩尔表达等优点,已广泛应用于动物转基因研究.文昌鱼(amphioxus)作为一种新兴的模式动物,尚无应用这种表达载体的报道,为此在pXT7转录系统基础上构建一个P2A介导的多基因表达载体.将体外转录的P2A介导的mRNA注入文昌鱼卵细胞并受精后,经激光共聚焦显微镜和蛋白质免疫印迹(Western blot)检测表明,该mRNA在文昌鱼胚胎中能够高效地翻译和剪切,并且在信号肽的作用下eGFP蛋白定位于细胞核中,而mCherry蛋白定位于细胞膜上,上、下游蛋白间的剪切效率达到91%;进而构建了由文昌鱼热激蛋白基因启动子(BbHsp70)启动,并由P2A介导的多基因表达载体,实验证明其在热诱导和上、下游蛋白剪切方面均达到了预期效果. 展开更多

关键词 多基因表达载体 2A肽 热激启动子 共表达 文昌鱼

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豆科共生关键基因表达载体的构建及其功能互补分析 被引量：2

11

作者 李豪 梅江鹏 张忠明 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2016年第24期2806-2810,共5页

利用生物工程技术扩大根瘤菌宿主范围、提高固氮效率,实现非豆科植物共生固氮一直是生物固氮研究的热点。将豆科植物百脉根与根瘤菌共生信号通路的9个关键基因分别置于不同根组织强表达启动子下,构建了5个用于转化水稻的多基因表达载体... 利用生物工程技术扩大根瘤菌宿主范围、提高固氮效率,实现非豆科植物共生固氮一直是生物固氮研究的热点。将豆科植物百脉根与根瘤菌共生信号通路的9个关键基因分别置于不同根组织强表达启动子下,构建了5个用于转化水稻的多基因表达载体。通过毛根转化互补豆科植物突变体,结果表明,这些基因大多数都能互补百脉根或苜蓿相应基因突变体,即多基因表达载体可用于水稻稳定转化,在水稻中搭建1条与根瘤菌共生的基因线路,为探索构建水稻共生固氮体系提供理论和技术支撑。 展开更多

关键词 微生物学 生物固氮 共生基因 多基因表达载体 百脉根 水稻

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哺乳动物细胞多不饱和脂肪酸合成酶系的重建将亚油酸代谢转变为二十二碳六烯酸 被引量：1

12

作者 朱贵明 Abdulmomen Ali Mohammed Saleh +6 位作者 Said Ahmed Bahwal 邱立红 孙洁 商宇 江旭东 葛堂栋 张涛 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第2期281-290,共10页

二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)是一种长度为22个碳原子且含有6个双键的ω-3系多不饱和脂肪酸,在人体中具有重要生物学功能。人体及其他哺乳动物体内只能合成少量的DHA,更多的需求必须从食物中获取。然而,DHA的天然资源(主要是深海鱼类等... 二十二碳六烯酸(DHA,22:6n-3)是一种长度为22个碳原子且含有6个双键的ω-3系多不饱和脂肪酸,在人体中具有重要生物学功能。人体及其他哺乳动物体内只能合成少量的DHA,更多的需求必须从食物中获取。然而,DHA的天然资源(主要是深海鱼类等海洋产品)日趋枯竭,开发新型资源以满足不断扩大的市场需求势在必行。本研究利用转基因技术,在哺乳动物细胞中使Δ6和Δ5脂肪酸去饱和酶以及Δ6和Δ5脂肪酸延长酶超表达,同时表达来源于秀丽隐杆线虫Caenorhabditis elegans的Δ15去饱和酶和小眼虫Euglena gracilis的Δ4去饱和酶,结果表明,这6种酶的表达或超表达能将ω-6系的亚油酸(LA,18:2n-6)有效地转化为DHA(22:6n-3),后者的含量从对照组的16.74%提高到实验组的25.3%。本研究的策略及技术路线为将来利用遗传改造的哺乳动物生产珍稀的DHA(22:6n-3)等长链多不饱和脂肪酸产品提供了重要的启示。 展开更多

关键词 多不饱和脂肪酸 脂肪酸去饱和酶 脂肪酸延长酶 多基因表达载体 转基因

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利用TAC系统构建多个光合同化物运输蛋白基因转化载体和水稻的遗传转化

13

作者 苏军 林美坤 +2 位作者 杜琳 洪海强 王锋 《福建农业学报》 CAS 2010年第1期1-7,共7页

采用人工染色体(TAC)多基因组装载体系统,将一组与水稻光合同化物运输转化有关基因构建在同一载体上,这些基因分别是蔗糖转运蛋白基因(OsSUT5),单糖转运蛋白(OsMST4)、细胞壁转化酶(OsCIN3)和ATP/ADP转运蛋白(OAAT),获得了包含这4个基... 采用人工染色体(TAC)多基因组装载体系统,将一组与水稻光合同化物运输转化有关基因构建在同一载体上,这些基因分别是蔗糖转运蛋白基因(OsSUT5),单糖转运蛋白(OsMST4)、细胞壁转化酶(OsCIN3)和ATP/ADP转运蛋白(OAAT),获得了包含这4个基因的植物表达载体pTAC747H-OAAT-SUT5-CIN3-MST4,质粒大小近30 kb。通过农杆菌转化法,将基因导入水稻,以探讨这些基因对水稻光合同化物运输和转化的调控作用。 展开更多

关键词 水稻 多基因表达载体 遗传转化

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多基因共表达载体的构建策略 被引量：32

14

作者 曹慧青 丁金凤 《国外医学（分子生物学分册）》 CSCD 2002年第1期1-4,共4页

于同一载体上同时表达多个外源基因在生物学领域中有广泛的应用价值 ,尤其在针对疾病发生发展的各个环节设计的联合基因治疗方案中 ,构建合适的载体获得多个外源基因的高效转移与表达具有重要意义。目前可提供的载体难以满足这一要求。... 于同一载体上同时表达多个外源基因在生物学领域中有广泛的应用价值 ,尤其在针对疾病发生发展的各个环节设计的联合基因治疗方案中 ,构建合适的载体获得多个外源基因的高效转移与表达具有重要意义。目前可提供的载体难以满足这一要求。近年来在多顺反子表达载体的构建策略方面有许多新的进展 。 展开更多

关键词 基因表达 调控 遗传载体 构建 多基因共表达载体

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乳腺特异性共表达4种脂肪酸合成酶载体及其稳转山羊成纤维细胞系的构建 被引量：1

15

作者 潘开源 陈建文 +5 位作者 陈真 张明翔 石恒波 孙秀柱 章孝荣 张运海 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第3期417-423,共7页

为改善山羊乳品质,创制乳汁中富含n-3不饱和脂肪酸的奶山羊育种新材料,首先构建了一种山羊乳腺特异性表达载体,以实现n-3不饱和脂肪酸合通路中4种脂肪酸合成酶基因(fat-1,fads2,elovl5和scd-1)的共表达。为初步验证该载体的有效性,通过... 为改善山羊乳品质,创制乳汁中富含n-3不饱和脂肪酸的奶山羊育种新材料,首先构建了一种山羊乳腺特异性表达载体,以实现n-3不饱和脂肪酸合通路中4种脂肪酸合成酶基因(fat-1,fads2,elovl5和scd-1)的共表达。为初步验证该载体的有效性,通过脂质体法转染小鼠乳腺上皮细胞系C127,经G418筛选收集阳性C127转基因细胞,并对其进行反转录PCR(RT-PCR)检测。结果表明,4种基因均可在C127细胞转基因中表达。将该多基因共表达载体转染奶山羊成纤维细胞,通过G418筛选获得了稳定转染的细胞系。PCR结果显示,4个目的基因均成功整合到奶山羊成纤维细胞基因组中。总之,本研究成功构建了乳腺特异性共表达4种脂肪酸合成酶转基因载体及其山羊转基因细胞系,为创制乳腺特异性表达多不饱和脂肪酸的转基因奶山羊奠定了基础。 展开更多

关键词 山羊 乳品质 N-3多不饱和脂肪酸 多基因共表达载体

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应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体 被引量：1

16

作者 何彰华 师明磊 +10 位作者 王洋 叶丙雨 黄芬 张彦 范秋声 王东 肖丽霞 张乐之 李德彬 闫兴 赵志虎 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期754-757,799,共5页

目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudar... 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。 展开更多

关键词 四环素抗药性 多基因串联表达载体 RED重组 质粒 红霉素

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大豆多基因编辑表达载体的构建及应用

17

作者 陈向前 姜奇彦 +4 位作者 孙现军 牛风娟 张慧媛 胡正 张辉 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第11期2706-2714,共9页

大豆基因家族往往存在多个功能相似的基因,开发多基因编辑载体对多基因或基因家族进行编辑,对遗传转化效率低的大豆的基因编辑及基因功能研究具有重要的应用价值。本研究利用大豆特有的不同U6启动子驱动表达sgRNA,利用载体上同尾酶将不... 大豆基因家族往往存在多个功能相似的基因,开发多基因编辑载体对多基因或基因家族进行编辑,对遗传转化效率低的大豆的基因编辑及基因功能研究具有重要的应用价值。本研究利用大豆特有的不同U6启动子驱动表达sgRNA,利用载体上同尾酶将不同大豆U6启动子表达的sgRNA进行串联,成功构建了可以同时对大豆多个基因进行编辑的CRISPR/Cas9多基因编辑表达载体pCambia3301-Cas9-GmU6n-gDNAn。并利用该载体,在大豆发状根中成功实现了大豆GRF(Growth-Regulating Factor)基因家族不同成员同时被编辑的目的。该载体的创建有效提高了大豆基因编辑效率,为大豆基因编辑及基因功能研究提供重要的工具。 展开更多

关键词 大豆 U6启动子 CRISPR/Cas9多基因编辑载体 发状根

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