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应用Red重组技术构建四环素抗性多基因串联表达载体 被引量：1
1
作者 何彰华 师明磊 +10 位作者 王洋 叶丙雨 黄芬 张彦 范秋声 王东 肖丽霞 张乐之 李德彬 闫兴 赵志虎 《军事医学》 CAS CSCD 北大核心 2011年第10期754-757,799,共5页
目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudar... 目的构建一种四环素抗性的多基因串联表达载体。方法设计同源臂引物,通过重叠延伸PCR获取含四环素抗性基因的打靶序列,应用pKD46介导的Red重组系统,在DH5α内替换多基因串联表达载体pET-m28a(+)中的抗性基因序列;再利用同尾酶(isocaudarner)策略,将sfp和accA1两基因串联组合于pET-mt28a(+)中,并进行共表达鉴定。结果获得了含四环素抗性的重组质粒pET-mt28a(+);构建了两基因串联重组质粒pET/sfp/accA1-mt28a(+),且两基因能够在同一载体上协同表达。结论成功构建了一种四环素抗性表达载体pET-mt28a(+),并可介导多基因的协同表达,为红霉素合成通路在大肠杆菌中的重建奠定了基础。 展开更多
关键词 四环素抗药性 多基因串联表达载体 RED重组 质粒 红霉素
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