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牛型布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆与原核表达 被引量：3
1
作者 左玉柱 范京惠 +1 位作者 刘媛 秦建华 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期842-845,共4页
采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到布鲁氏菌外膜蛋白(OMP31)基因,将其连接入pMD18-T克隆质粒并进行序列测定;测序正确后,将该基因插入pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rossetta(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋... 采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到布鲁氏菌外膜蛋白(OMP31)基因,将其连接入pMD18-T克隆质粒并进行序列测定;测序正确后,将该基因插入pET-28a(+)载体中构建原核表达载体,转化大肠杆菌Rossetta(DE3)感受态细胞,诱导表达融合蛋白,并用Western-blot分析表达蛋白的免疫反应特性。结果显示,扩增了OMP31的全基因,基因全长723bp,共编码241个氨基酸。成功构建了布鲁氏菌OMP31基因的原核表达载体pET-OMP31,并且在大肠杆菌中表达了OMP31蛋白,经Western-blot鉴定,该蛋白可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应。证实布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因已成功表达,为布鲁氏菌病血清学诊断方法的建立及亚单位疫苗的研究提供了基础资料。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白omp31 克隆 原核表达
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布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因的克隆、表达和免疫学特性的初步研究 被引量：2
2
作者 陈瑶 骆利敏 李明 《热带医学杂志》 CAS 2006年第2期120-123,共4页
目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的克隆、测序和表达,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP31基因连接入PMD-18T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP31,在大肠杆菌中将该蛋白... 目的研究布鲁氏菌外膜蛋白OMP31的克隆、测序和表达,并对其进行初步的血清学鉴定。方法从布鲁氏菌基因组中获得OMP31基因连接入PMD-18T克隆质粒并测序,克隆入融合表达载体PGEX-4T-1,构建重组质粒PGEX-4T-1/OMP31,在大肠杆菌中将该蛋白表达。用Western-blot分析重组表达的GST-OMP31的免疫学特性。结果成功构建了PGEX-4T-1/OMP31原核表达载体并在大肠杆菌中表达了OMP31基因,布鲁氏菌免疫动物血清能特异性识别所表达的蛋白。结论成功表达了布鲁氏菌外膜蛋白OMP31基因,它可以与布鲁氏菌免疫血清产生特异性结合反应,为之后的抗原性以及免疫原性研究打下良好的基础。 展开更多
关键词 布鲁氏菌 外膜蛋白omp31 免疫 诊断
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应用荧光显微镜技术筛选高表达布鲁杆菌Omp31蛋白单克隆抗体的研究
3
作者 薄惠 张强 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2015年第6期180-183,共4页
为了制备布鲁杆菌外膜蛋白Omp31的单克隆抗体,试验采用荧光显微镜和ELISA相结合的方法筛选单克隆抗体。结果表明:试验成功筛选出3株外膜蛋白Omp31单克隆抗体,经Westernblot分析这3株单克隆抗体均可与Omp31蛋白发生免疫反应。说明应用荧... 为了制备布鲁杆菌外膜蛋白Omp31的单克隆抗体,试验采用荧光显微镜和ELISA相结合的方法筛选单克隆抗体。结果表明:试验成功筛选出3株外膜蛋白Omp31单克隆抗体,经Westernblot分析这3株单克隆抗体均可与Omp31蛋白发生免疫反应。说明应用荧光显微镜技术可以筛选出效价较高的单克隆抗体。 展开更多
关键词 布鲁杆菌 布鲁菌病 外膜蛋白omp31 荧光显微镜 ELISA Western-blot分析
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利用重组外膜蛋白OMP31检测牛布氏杆菌血清抗体OMP31-ELISA方法的建立 被引量：1
4
作者 张月 吉星煜 +5 位作者 张晶 马天宜 左玉柱 冯雪领 赵月兰 秦建华 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2014年第8期32-35,39,共5页
为了研究牛布氏杆菌血清抗体快速诊断方法,试验采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31基因,将该基因插入原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌DE3进行诱导表达,再将表达产物重组外膜蛋白OMP31纯化后作为... 为了研究牛布氏杆菌血清抗体快速诊断方法,试验采用PCR技术从河北省某牛场流产污物中扩增得到牛布氏杆菌外膜蛋白OMP31基因,将该基因插入原核表达载体pET-28a(+),转化大肠杆菌DE3进行诱导表达,再将表达产物重组外膜蛋白OMP31纯化后作为抗原,建立检测牛布氏杆菌血清抗体的OMP31-ELISA,并对最适反应条件进行确定,然后对从河北省部分牛场采集的150份腹泻奶牛血样进行血清抗体检测。结果表明:牛布氏杆菌OMP31蛋白成功表达,表达产物能与牛布氏杆菌免疫兔血清反应;建立的OMP31-ELISA最佳工作条件为外膜蛋白OMP31抗原的最适包被浓度2.0μg/mL,酶标抗体的工作浓度1∶400,血清稀释度1∶160,以3%明胶-PBS封闭30 min。检测的150份临床血清样本中,特异性、敏感性和符合率分别为90.91%(50/55)、95.79%(91/95)、94.00%(141/150)。说明本方法特异性强、敏感性高,快速,使用方便。 展开更多
关键词 牛布氏杆菌 重组外膜蛋白omp31 抗体 间接ELISA 血清学诊断
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羊布鲁氏杆菌OMP31的真核表达及其应用分析
5
作者 罗佩芳 何作萍 +4 位作者 胡飞环 黄建锋 翁云层 王文敬 黎诚耀 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2016年第6期7-11,282,共6页
为了获得可在细胞内表达布鲁氏杆菌外膜蛋白31(OMP31)基因的表达载体和慢病毒,试验从羊布鲁氏杆菌M5-90疫苗株PCR获得OMP31基因,连接至p Zero Back/blunt载体,经双酶切鉴定、测序鉴定正确的基因亚克隆到p HAGE-CMV-MCS-IZs Green表达载... 为了获得可在细胞内表达布鲁氏杆菌外膜蛋白31(OMP31)基因的表达载体和慢病毒,试验从羊布鲁氏杆菌M5-90疫苗株PCR获得OMP31基因,连接至p Zero Back/blunt载体,经双酶切鉴定、测序鉴定正确的基因亚克隆到p HAGE-CMV-MCS-IZs Green表达载体上,双酶切鉴定,构建含正确OMP31基因的表达载体p HAGE-OMP31,与包装质粒ps PAX2和包膜质粒p MD2.G共转染293FT细胞进行慢病毒Lentivirus-OMP31包装;获得的Lentivirus-OMP31感染293FT细胞,利用蛋白质印迹(Western-blot)和免疫荧光(IFS)鉴定OMP31蛋白的表达及其免疫原性;LentivirusOMP31体外感染布鲁氏杆菌的宿主细胞模型单核细胞THP-1和人绒毛膜滋养层细胞JEG-3,Western-blot和IFS鉴定OMP31基因的表达,并利用流式细胞(FCM)检测细胞凋亡情况。结果表明:构建了能够在细胞内表达OMP31基因的真核表达载体p HAGE-OMP31和慢病毒LentivirusOMP31,二者感染细胞后表达的OMP31蛋白可与特异性抗体反应,具有良好的抗原性。经初步鉴定,OMP31蛋白在JEG-3细胞内表达能引起细胞凋亡。说明载体p HAGE-OMP31和慢病毒Lentivirus-OMP31可作为用于研究OMP31与布鲁氏杆菌感染相关性的试验材料。 展开更多
关键词 布鲁氏杆菌 外膜蛋白31(omp31) 慢病毒系统 真核表达 细胞凋亡
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