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变性高效液相色谱检测乳制品和化妆品中绿脓杆菌的研究 被引量:4
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作者 曹际娟 郑秋月 +3 位作者 孙哲平 王秋艳 裴轶君 赵昕 《食品科学》 CAS CSCD 北大核心 2009年第6期139-142,共4页
目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法:利用所报道的绿脓杆菌外毒素A(ETA)基因设计引物和探针,并对该方法进行特异性、灵敏度、精密度等方面的考察。结果:用该方法未检测到绿脓杆菌的近源种及其他细菌的... 目的:应用PCR结合变性高效液相色谱技术实现绿脓杆菌的快速鉴定。方法:利用所报道的绿脓杆菌外毒素A(ETA)基因设计引物和探针,并对该方法进行特异性、灵敏度、精密度等方面的考察。结果:用该方法未检测到绿脓杆菌的近源种及其他细菌的阳性吸收峰,检测灵敏度可达到100CFU/ml。结论:用PCR结合变性高效液相色谱检测绿脓杆菌不仅特异性好、灵敏度高,且快速简便。 展开更多
关键词 DHPLC 绿脓杆菌 外毒素A基因 检测
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检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌的比色LAMP法的建立与应用 被引量:4
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作者 韩明明 刘旭平 +3 位作者 母连志 赵静 刘慧 刘晓飞 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第4期583-587,共5页
为了快速有效检测水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌,本研究结合金属指示剂HNB特性建立了快速检测绿脓杆菌比色LAMP法。根据绿脓杆菌外毒素A基因设计引物,建立了检测LAMP法;并且对该方法进行了特异性、灵敏性分析;同时进行了初步应用。结果显... 为了快速有效检测水貂出血性肺炎病原绿脓杆菌,本研究结合金属指示剂HNB特性建立了快速检测绿脓杆菌比色LAMP法。根据绿脓杆菌外毒素A基因设计引物,建立了检测LAMP法;并且对该方法进行了特异性、灵敏性分析;同时进行了初步应用。结果显示,该方法特异性强,灵敏性好,可检测167CFU/mL的菌体,对病貂肺脏检出率高。结果表明,该比色LAMP法可以有效地检测水貂出血性肺炎绿脓杆菌。 展开更多
关键词 水貂出血性肺炎 绿脓杆菌 外毒素A基因 比色LAMP法
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铜绿假单胞菌外毒素A全长基因的扩增与克隆 被引量:8
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作者 胡晓梅 胡福泉 +2 位作者 饶贤才 黄建军 金晓琳 《中国人兽共患病杂志》 CSCD 北大核心 2003年第4期93-95,共3页
目的 从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法 从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切... 目的 从绿脓杆菌中提取染色体DNA ,PCR扩增及克隆外毒素A全长基因 ,为实现外毒素A的高效表达奠定基础。方法 从绿脓杆菌培养物中提取染色体DNA ,PCR扩增外毒素A全长基因 ,A -T克隆入本室自行构建的pSK -T载体中 ,对重组质粒进行酶切与测序鉴定。结果与结论 成功地从高GC含量的绿脓杆菌染色体DNA中扩增到长片段的外毒素A全基因并进行了克隆与鉴定。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 外毒素A全长基因 扩增 克隆
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猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌双重及多重PCR检测方法的建立 被引量:7
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作者 朱新贵 田亚平 +6 位作者 王亚珊 吴艳芳 刘勇军 姚强 姜艳彬 张锐利 侯东军 《黑龙江畜牧兽医》 CAS 北大核心 2018年第8期75-78,共4页
为了准确检测临床上猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)的感染,根据Gen Bank中副猪嗜血杆菌16S rRNA、PILA、LIPO基因保守序列和猪多杀性巴氏杆菌的16S rRNA、KMT1基因保守序列建立双重... 为了准确检测临床上猪多杀性巴氏杆菌(Pasteurella multocida)和副猪嗜血杆菌(Haemophilus parasuis)的感染,根据Gen Bank中副猪嗜血杆菌16S rRNA、PILA、LIPO基因保守序列和猪多杀性巴氏杆菌的16S rRNA、KMT1基因保守序列建立双重及多重PCR检测方法,通过对其退火温度的筛查,确定最优退火温度,然后进行方法的验证。结果表明:与传统方法相比,所建立的双重及多重PCR检测方法具有快速、准确度高、特异性强的特点。说明本方法可以用于猪多杀性巴氏杆菌和副猪嗜血杆菌在临床上的快速检测。 展开更多
关键词 猪多杀性巴氏杆菌 副猪嗜血杆菌 多重PCR 16S RRNA基因 外毒素基因
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铜绿假单胞菌重要外毒素基因多重PCR检测方法的建立 被引量:5
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作者 石慧 程国灵 +1 位作者 许文涛 罗云波 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2015年第11期160-164,共5页
铜绿假单胞菌是一种重要的机会致病菌,Ⅲ型分泌系统、绿脓菌素、弹性蛋白酶和外毒素A是其重要的致病因子。不同铜绿假单胞菌株呈现出高度的基因多样化,导致一些菌株缺乏部分毒素基因。为判断铜绿假单胞菌株毒性,建立了一种多重PCR的检... 铜绿假单胞菌是一种重要的机会致病菌,Ⅲ型分泌系统、绿脓菌素、弹性蛋白酶和外毒素A是其重要的致病因子。不同铜绿假单胞菌株呈现出高度的基因多样化,导致一些菌株缺乏部分毒素基因。为判断铜绿假单胞菌株毒性,建立了一种多重PCR的检测方法,检测其内标基因ecf X和5种重要的外毒素基因(tox A,phz M,las B,exo U和exo S)。结果引物特异性良好,通过引物浓度优化,多重PCR反应中最低检出限达5 pg。通过此方法成功筛查到不同铜绿假单胞菌株中毒素基因缺失情况。其中,菌株PAO1、PAK、PKE 117和ACCC 10647缺失exo U,菌株PA103和PA14缺失exo S,菌株PAK缺失las B。这种快速、简便的多重PCR方法可在今后常规监察或疾病暴发时检测铜绿假单胞菌株毒素基因,以此判断其毒力和致病性。 展开更多
关键词 铜绿假单胞菌 多重PCR 外毒素基因
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复合PCR进行胸膜肺炎放线杆菌血清型快速分型 被引量:2
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作者 夏炉明 史一博 +5 位作者 李树清 胡永强 陈志飞 易建平 李健 严亚贤 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第4期497-502,共6页
根据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)各血清型之间外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ A基因差异,设计6对引物,对16株标准菌株进行1次5对引物的多重PCR和1次根据apxⅣ A基因设计1对引物PCR的扩增,得到各血清型特... 根据胸膜肺炎放线杆菌(Actinobacillus pleuropneumoniae,APP)各血清型之间外毒素apxⅠ、apxⅡ、apxⅢ、apxⅣ A基因差异,设计6对引物,对16株标准菌株进行1次5对引物的多重PCR和1次根据apxⅣ A基因设计1对引物PCR的扩增,得到各血清型特异性片段,并将片段特征相同的血清型归为同一组。通过这2步PCR分组情况的不同能将16株标准菌株中的大多数血清型区别开,但是仍然不能将血清2型和8型、血清9型和11型、血清5型中的2个亚型以及血清12型和13型区分开。又根据血清2型荚膜多糖(CP)基因差异设计1对引物将血清2型和8型区分开。将此分型系统应用于23株未知病原菌检测,检测到胸膜肺炎放线杆菌9株,并全部能够将其分型。本试验PCR分型体系可以作为胸膜肺炎放线杆菌血清型分型的一种快速而有效的鉴定方法。 展开更多
关键词 胸膜肺炎放线杆菌 外毒素基因 荚膜多糖基因 PCR 分型
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一起幼儿园猩红热疫情的实验室检测分析 被引量:2
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作者 徐云龙 孙亚萍 +2 位作者 孟祥杰 赵俊 罗芸 《中国卫生检验杂志》 北大核心 2014年第17期2502-2504,共3页
目的对一起幼儿园猩红热疫情进行病原菌分离和实验室分析。方法按照国家行业标准WS 282-2008进行病原菌分离和鉴定,应用PCR法扩增致热外毒素基因,药敏试验采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片扩散法,脉冲场凝胶电泳分析参照... 目的对一起幼儿园猩红热疫情进行病原菌分离和实验室分析。方法按照国家行业标准WS 282-2008进行病原菌分离和鉴定,应用PCR法扩增致热外毒素基因,药敏试验采用美国临床实验室标准化委员会(CLSI)推荐的纸片扩散法,脉冲场凝胶电泳分析参照PulseNet发布的单核细胞增生李斯特菌的PFGE操作程序。结果 21份咽拭子中检出5株A群链球菌。分离株均扩增出致热外毒素基因speA、speB和speC。菌株对青霉素、头孢拉定、氨苄西林、左氧氟沙星、氯霉素和万古霉素均敏感,对红霉素、克拉霉素、阿奇霉素和四环素均耐药。PFGE分析显示其来源相同。结论加强重点人群和重点场所的管理是预防猩红热的主要措施,及时判定疫情、确定传染源是控制猩红热疫情的必要手段,实验室检测特别是病原菌同源性分析将为疫情的控制提供可靠的保证。 展开更多
关键词 化脓性链球菌 猩红热疫情 致热外毒素基因 药敏试验 脉冲场凝胶电泳 结果分析
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绿脓杆菌ATCC27853外毒素PE40基因的扩增与测序 被引量:1
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作者 顾小龙 秦建华 +1 位作者 张宁 郭莉 《中国农学通报》 CSCD 2006年第8期30-32,共3页
目的扩增绿脓杆菌ATCC27853外毒素基因PE40,并对PCR产物进行测序鉴定,为获得用于构建分子导向药物的毒素弹头基因PE40奠定基础。方法采用PCR技术,以绿脓杆菌ATCC27853基因组DNA为模板,扩增PE40基因并测序。用DNASTAR软件将测得的序列与G... 目的扩增绿脓杆菌ATCC27853外毒素基因PE40,并对PCR产物进行测序鉴定,为获得用于构建分子导向药物的毒素弹头基因PE40奠定基础。方法采用PCR技术,以绿脓杆菌ATCC27853基因组DNA为模板,扩增PE40基因并测序。用DNASTAR软件将测得的序列与GenBank中的国际标准产毒株PA103的PE40基因序列进行比较。结果扩增出目的基因片断,长度为1231bp。测序表明,ATCC27853与PA103核苷酸同源性为98%,产生了7个碱基的突变,突变碱基导致第364位的天冬酰胺变成丝氨酸,第506位的丝氨酸变成色氨酸,第515位的丝氨酸变成甘氨酸。但产生变化的3个氨基酸均不是文献报道中的重要活性位点。结论产生变化的3个氨基酸不会对PEA的酶活性及细胞毒性产生很大影响,绿脓杆菌ATCC27853的PE40基因可用作分子导向药物的弹头。 展开更多
关键词 PEA(绿脓杆菌外毒素A) PE40(去掉细胞结合区Ia的外毒素基因) PCR(聚合酶链式反应)
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聚合酶链反应检测白喉杆菌的实验研究 被引量:1
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作者 王晓春 熊鸿燕 +2 位作者 张建中 何利华 尹焱 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期128-130,共3页
目的 建立检测白喉杆菌的聚合酶链反应 (PCR)方法。方法 用PCR扩增白喉杆菌特异的白喉外毒素B基因 (toxB)片段 ,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果 白喉杆菌参考菌株 (有毒株 )均扩增出 318bp的特异性片段 ,而其他需鉴别诊断的常见... 目的 建立检测白喉杆菌的聚合酶链反应 (PCR)方法。方法 用PCR扩增白喉杆菌特异的白喉外毒素B基因 (toxB)片段 ,琼脂糖凝胶电泳检测扩增产物。结果 白喉杆菌参考菌株 (有毒株 )均扩增出 318bp的特异性片段 ,而其他需鉴别诊断的常见病原菌均未扩增出此特异条带。检测灵敏度为 85 0fg/ μl基因组DNA。 结论 依据toxB基因建立的白喉杆菌PCR检测方法具有高度的敏感性和特异性 。 展开更多
关键词 聚合酶链反应 检测 白喉杆菌 实验研究 白喉外毒素B片段基因
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