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人视网膜色素上皮细胞的冻存和复苏培养 被引量：38
1
作者 王琳 惠延年 +2 位作者 王雨生 惠宏襄 汤朝武 《中华眼底病杂志》 CAS CSCD 北大核心 1997年第3期157-159,共3页
目的：建立人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的冻存和复苏方法。方法：根据慢冻速融的细胞冻存原则，将原代或传代１～２次培养的人ＲＰＥ细胞，加入１０％二甲基亚砜作为保护剂，液... 目的：建立人视网膜色素上皮（ｒｅｔｉｎａｌｐｉｇｍｅｎｔｅｐｉｔｈｅｌｉｕｍ，ＲＰＥ）细胞的冻存和复苏方法。方法：根据慢冻速融的细胞冻存原则，将原代或传代１～２次培养的人ＲＰＥ细胞，加入１０％二甲基亚砜作为保护剂，液氮中冻存。复苏时将冻存细胞在６０℃、２分钟内融化，用台盼蓝染色测定细胞存活率，用抗人角蛋白抗体免疫细胞化学染色作细胞鉴定，每日计算细胞数以确定细胞生长曲线。结果：经冻存复苏后的ＲＰＥ细胞的存活率达９０％，生长状态与对照组无差异，抗人角蛋白染色阳性，细胞对数生长期在１～４天，群体细胞倍增期约为１．５５天。结论：人ＲＰＥ细胞液氮冻存可保持生物活性，复苏后生长良好，保持了细胞特征。这可提供细胞系，方便了体外实验，并可能作为ＲＰＥ细胞移植治疗一些眼底病的细胞库。 展开更多
关键词 色素上皮 组织保存 低温保存 复苏培养 视网膜
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食用菌菌株的长期保藏方法 被引量：7
2
作者 吕和平 吴红宇 +1 位作者 刑仁昌 郑应华 《中国食用菌》 2007年第2期29-30,共2页
食用菌保藏的方法有矿油保藏、液氮超低温保藏等,适合食用菌长期保藏的方法是液氮超低温保藏,将几年来采用冷冻真空干燥保藏、液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏的食用菌菌种进行了复苏实验,液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏两种保藏... 食用菌保藏的方法有矿油保藏、液氮超低温保藏等,适合食用菌长期保藏的方法是液氮超低温保藏,将几年来采用冷冻真空干燥保藏、液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏的食用菌菌种进行了复苏实验,液氮超低温保藏和低温冰箱冷冻保藏两种保藏方法的存活率均为100%,低温冰箱冷冻保藏可以节省资金,实用于食用菌研究和小型食用菌栽培的菌种保藏。 展开更多
关键词 食用菌 长期保藏 复苏培养
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长期冻存对毛冠鹿(Elaphodus cephalophus)肺细胞株的细胞遗传学效应 被引量：2
3
作者 孔亚慧 张锡然 +1 位作者 曹祥荣 薛建丽 《南京师大学报（自然科学版）》 CAS CSCD 2001年第1期92-94,共3页
对液氮冻存 19年的雄性毛冠鹿的胚肺细胞株进行复苏培养并对其核型进行观察 ,结果发现F2 1代时细胞株的核型已发生了变化 ,出现了一对大的末端着丝粒染色体 .C带显示这一对染色体异染色质丰富 ,与已存在的相关染色体同源 .这一核型不同... 对液氮冻存 19年的雄性毛冠鹿的胚肺细胞株进行复苏培养并对其核型进行观察 ,结果发现F2 1代时细胞株的核型已发生了变化 ,出现了一对大的末端着丝粒染色体 .C带显示这一对染色体异染色质丰富 ,与已存在的相关染色体同源 .这一核型不同于已报道的核型 ,是一种新的核型 . 展开更多
关键词 冻存 毛冠鹿 肺细胞株 细胞遗传学效应 染色体多态 复苏培养 核型
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副猪嗜血杆菌辽宁株tbpA基因鉴定与分析 被引量：1
4
作者 陈欣 刘维哲 +5 位作者 王超 黄晨 李睿 尹荣兰 陈媛媛 尹荣焕 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期293-301,共9页
副猪嗜血杆菌(HPS)是感染猪产生浆膜炎、关节炎、脑膜炎的病原菌,为明确辽宁省副猪嗜血杆菌tbp A基因的保守性、遗传变异情况以及功能,以复苏培养后的菌株为研究对象,利用细菌学常规技术和PCR方法对HPS及其血清型进行验证,将目的基因连... 副猪嗜血杆菌(HPS)是感染猪产生浆膜炎、关节炎、脑膜炎的病原菌,为明确辽宁省副猪嗜血杆菌tbp A基因的保守性、遗传变异情况以及功能,以复苏培养后的菌株为研究对象,利用细菌学常规技术和PCR方法对HPS及其血清型进行验证,将目的基因连接于T5载体上,并转化到大肠杆菌感受态细胞中,获得克隆质粒,对不同血清型该基因序列进行PCR鉴定。通过NCBI网站中BLAST进行序列比对,并且运用DNA star软件进行核苷酸同源性分析和遗传变异规律分析。通过在线软件对tbp A编码蛋白的氨基酸组成、分子量、等电点、亲疏水性以及二级结构等进行分析。结果表明:从保存菌的HPS中成功复苏了4型、5型、9型和14型菌株;经PCR扩增这4种血清型HPS的tbp A基因长度均为2700bp;tbp A基因与参考菌株核苷酸同源性范围为86.5%~97.9%,4型和5型tbp A基因与84^(-1)5995、84^(-1)7975、H425亲缘性较近,9型tbp A基因与SW124和174亲缘性较近;14型tbp A基因与NO.4亲缘性较近;4种血清型tbp A基因与瑞典菌株D74在两个不同分支上,具有较远的亲缘关系。4种血清型tbp A基因编码蛋白分别有874,871,918,915个氨基酸组成;等电点分别为9.51,9.30,8.65,8.76;该蛋白属于亲水性蛋白;该蛋白的二级结构主要由α螺旋、无规则卷曲和伸展链构成。tbp A基因与美国株84^(-1)5995(KT588784.1)、德国株H425(KT588778.1)、日本株NO.4(KT588774.1)同源性相对较高,亲缘关系较近,但是也存在一定的差异性,该结果可为建立HPS最新基因突变跟踪提供参考依据;同时,通过对tbp A蛋白进行生物学信息分析,为进一步研究tbp A基因的功能奠定了分子基础。 展开更多
关键词 副猪嗜血杆菌 复苏培养 毒力基因 序列分析 生物信息学分析
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酿酒葡萄“蛇龙珠”茎尖复苏及生茎培养基的筛选
5
作者 陈春伶 徐美隆 +3 位作者 杨智 乔改霞 郭晓婧 袁婷 《江苏农业科学》 北大核心 2015年第8期174-176,共3页
以B5改良的培养基作为基本培养基,比较了添加不同浓度6-BA与IBA组合的培养基对酿酒葡萄“蛇龙珠”茎尖复苏及生茎的影响,筛选出适合蛇龙珠试管苗茎尖复苏的培养基为B5（改良）＋1.5 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA＋30 g/L蔗糖＋7 g/L琼脂,p ... 以B5改良的培养基作为基本培养基,比较了添加不同浓度6-BA与IBA组合的培养基对酿酒葡萄“蛇龙珠”茎尖复苏及生茎的影响,筛选出适合蛇龙珠试管苗茎尖复苏的培养基为B5（改良）＋1.5 mg/L 6-BA＋0.05 mg/L IBA＋30 g/L蔗糖＋7 g/L琼脂,p H值5.8-6.0;筛选出适合蛇龙珠试管苗生茎的培养基为B5（改良）＋1.5 mg/L 6-BA＋0.1 mg/L IBA＋30 g/L蔗糖＋7 g/L琼脂,p H值=5.8-6.0。 展开更多
关键词 酿酒葡萄“蛇龙珠” 茎尖复苏培养基 生茎培养基
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Lipocalin2在IL-1β诱导肾小管上皮细胞转分化中的动态表达与意义
6
作者 陈明 陈莹 +2 位作者 樊力 金立新 刘琳丰 《中国实用内科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第S2期14-14,共1页
目的探讨Lipocalin2在IL-1β诱导的肾小管上皮细胞转分化发生发展过程中可能起到的作用。方法体外复苏培养正常人近端肾小管上皮细胞(HK-2),待生长状况良好的HK-2细胞60%～80%融合后。
关键词 近端肾小管上皮细胞 转分化 复苏培养 无血清培养基 生长状况 成纤维细胞 诱导 发展过程 动态表达 正常人
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慢速冷冻卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局分析 被引量：3
7
作者 莫美兰 孙青 +6 位作者 李观贵 万才云 陈培林 黄菊 黄丽施 曾勇 熊风 《生殖医学杂志》 CAS 2018年第2期145-149,共5页
目的分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局。方法选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期。根据移植胚胎策略... 目的分析早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏后培养至囊胚移植的临床结局。方法选取2013年1月至2016年12月深圳中山泌尿外科医院生殖中心D3卵裂期胚胎慢速冷冻复苏周期为研究对象,同一患者复苏的胚胎来自于同一取卵周期。根据移植胚胎策略不同分为:(1)卵裂期移植组,即慢速冷冻复苏后直接行卵裂期胚胎移植,共55个复苏周期。(2)囊胚移植组,即复苏后继续培养至囊胚移植,共57个复苏周期。分析囊胚移植组胚胎复苏后继续培养的囊胚形成率,两组患者移植后的种植率、临床妊娠率、异位妊娠率、多胎妊娠率、早期流产率及抱婴率等临床结局。结果早期慢速冷冻的D3卵裂期胚胎复苏存活率为72.57%,继续培养后的囊胚形成率为29.50%。移植时卵裂期移植组平均移植胚胎数显著高于囊胚移植组[(2.64±0.53)vs.(1.39±0.54)枚,P<0.05],移植胚胎中优质胚胎占比无显著性差异(58.82%vs.47.37%,P>0.05)。移植后的临床结局显示,两组临床妊娠率(44.44%vs.39.02%)、异位妊娠率(5.00%vs.0%)、多胎妊娠率(20.00%vs.25.00%)、早期流产率(20.00%vs.18.75%)、抱婴率(26.19%vs.28.21%)比较均无显著性差异(P>0.05)。卵裂期移植组的种植率略低于囊胚移植组(22.69%vs.33.33%),但无显著性差异(P>0.05)。结论两组临床结局差异不大,培养至囊胚移植显著减少平均移植胚胎数,但是增加无可移植胚胎的风险,各中心需要综合考虑患者意愿及具体情况,选择合适的慢速冷冻胚胎复苏后移植策略。 展开更多
关键词 慢速冷冻 卵裂期胚胎 囊胚 复苏后继续培养 临床结局
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