基因枪介导法向小麦导入黄花叶病毒复制酶基因的研究 被引量：52

1

作者 徐惠君 庞俊兰 +8 位作者 叶兴国 杜丽璞 李连城 辛志勇 马有志 陈剑平 陈炯 程顺和 吴宏亚 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第6期688-693,共6页

筛选出适宜小麦转化的优良基因型扬麦 15 8和扬麦 10号。以扬麦 15 8幼胚愈伤组织为受体 ,利用基因枪介导法将含有小麦黄花叶病毒复制酶基因 (WYMV- N ib8)的 pubi Nib8质粒转入了小麦。T0 代经 PCR扩增分析 ,获得了 14株含 WYMV- N ib... 筛选出适宜小麦转化的优良基因型扬麦 15 8和扬麦 10号。以扬麦 15 8幼胚愈伤组织为受体 ,利用基因枪介导法将含有小麦黄花叶病毒复制酶基因 (WYMV- N ib8)的 pubi Nib8质粒转入了小麦。T0 代经 PCR扩增分析 ,获得了 14株含 WYMV- N ib8基因的转化植株 ,转化率为 0 .4 3%。T1、T2 代跟踪分子检测和 T2 代田间病毒抗性鉴定结果表明 ,获得了 4个抗 展开更多

关键词 小麦 黄花叶病毒 复制酶基因 基因枪 转化

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改造的马铃薯Y病毒复制酶基因介导高度抗病性 被引量：18

2

作者 项瑜 杨兰英 +1 位作者 彭学贤 莽克强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第3期258-265,共8页

提取马铃薯Y病毒中国分离株(PVY-C)的mRNA作为模板,随机六聚脱氧核苷酸和寡聚dT为引物合成了单链cDNA。通过聚合酶链式反应(PCR)获得了PVY-C的核内含体b(NIb)全长cDNA克隆。在对其进行全序列分析的基础上,构建了PVY-C NIb基因全长,5＇... 提取马铃薯Y病毒中国分离株(PVY-C)的mRNA作为模板,随机六聚脱氧核苷酸和寡聚dT为引物合成了单链cDNA。通过聚合酶链式反应(PCR)获得了PVY-C的核内含体b(NIb)全长cDNA克隆。在对其进行全序列分析的基础上,构建了PVY-C NIb基因全长,5＇端缺失381个碱基和NIb反义RNA三种不同形式高等植物表达载体。在土壤农杆菌LBA4404的介导下,转化烟草生产品种NC89,获得了所有三种表达载体的转基因植株。通过分子生物学检测和抗性分析发现不同形式的NIb基因序列的转基因植株对马铃薯Y病毒表现不同程度的抗性。其中,以5＇端缺失的NIb的基因转化植株表现最好,从总共20个这类转化株系中筛选到4个株系至少在100μg/ml PVY-C接种浓度下,表现完全的抗病效果。从总共39个全长NIb基因转化株系中,仅有一个株系,在100μg/ml PVY-C的攻毒接种下具有完全的抗病性。所有33个NIb基因反义RNA的转化植株中,无一株系表现完全的抗病效果,但是有部分株系能不同程度地延缓或减轻发病程度,并有部分植株在发病后50d左右有恢复健康的趋势。虽然能够在上述3种形式的NIb基因序列的转基因植物中检测到相应的RNA的转录产物,但是均未能检测到其相应的蛋白表达产物。 展开更多

关键词 烟草 马铃薯Y病毒 复制酶基因 转基因植物

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马铃薯Y病毒NIb复制酶基因在转录水平介导的相对广谱抗病性 被引量：9

3

作者 鲁瑞芳 吕鹏飞 彭学贤 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第2期162-166,共5页

在大肠杆菌中表达了马铃薯Y病毒中国分离物 (PVY -C)复制酶NIb基因 ,并制备了其抗血清。利用PCR定点突变方法使 NIb 基因移码 - 1位 ,构建了移码 - 1位 NIb 基因 (UN)的植物表达载体。通过土壤农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA44 0 4... 在大肠杆菌中表达了马铃薯Y病毒中国分离物 (PVY -C)复制酶NIb基因 ,并制备了其抗血清。利用PCR定点突变方法使 NIb 基因移码 - 1位 ,构建了移码 - 1位 NIb 基因 (UN)的植物表达载体。通过土壤农杆菌(AgrobacteriumtumefaciensLBA44 0 4)介导转化烟草NC89,获得 5 1株再生植株。对再生植株的分子检测结果表明 ,转基因烟草中检测到UN基因相应的RNA转录产物 ,推测该基因已经整合到烟草染色体中。攻毒试验发现转UN 基因烟草 (T0 代 )对两个PVY株系和烟草蚀纹病毒的抗病性与转全长、缺失 5′端 381bpNIb 基因烟草 (T2 代 )的相同。Western印迹试验结果表明 ,在本试验检测水平上 ,在转基因T2 代烟草中未检测到NIb基因的表达产物。实验结果支持PVY -C复制酶NIb基因在转录水平上介导相对广谱抗病性的假说。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 转录 抗病性 作用机制

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病毒复制酶基因Nib8和ERF转录因子W17基因枪法共转化小麦 被引量：12

4

作者 刘永伟 徐兆师 +4 位作者 杜丽璞 徐惠君 李连城 马有志 陈明 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期1548-1552,共5页

将对小麦黄花叶病毒表现高抗的复制酶基因Nib8和具有广谱抗病性的ERF基因W17分别构建到单子叶高效组成型表达载体上,采用基因枪共转化法转化到小麦品种扬麦12和扬麦16中,PCR检测共获得Nib8基因的阳性转基因植株42株,W17基因的阳性转基... 将对小麦黄花叶病毒表现高抗的复制酶基因Nib8和具有广谱抗病性的ERF基因W17分别构建到单子叶高效组成型表达载体上,采用基因枪共转化法转化到小麦品种扬麦12和扬麦16中,PCR检测共获得Nib8基因的阳性转基因植株42株,W17基因的阳性转基因植株48株,及两个功能基因均为阳性的转基因植株6株。以扬麦12为受体的转化率分别为1.53%(Nib8)、4.87%(W17)和0.42%(Nib8+W17);以扬麦16为受体的转化率分别为2.05%(Nib8)、0.86%(W17)和0.20%(Nib8+W17)。对2个功能基因都呈阳性的6个植株进行Southern blotting分析,进一步证实功能基因已经整合到小麦基因组中。本研究为获得具有综合抗病性的小麦新材料奠定了基础。 展开更多

关键词 小麦 基因枪 ERF转录因子 复制酶基因

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马铃薯Y病毒复制酶基因植物表达载体构建及转基因烟草的培育 被引量：8

5

作者 王振东 刘玉乐 +2 位作者 房德纯 吴元华 田波 《沈阳农业大学学报》 CAS CSCD 1995年第3期249-253,共5页

用ＢａｍＨＩ／ＫｐｎＩ从重组克隆ｐＺＤ－１中切下马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系复制酶基因，将其插入质粒ｐＲＯＫ２相应切点中构成植物表达载体．用重组ｐＲＯＫ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢ... 用ＢａｍＨＩ／ＫｐｎＩ从重组克隆ｐＺＤ－１中切下马铃薯Ｙ病毒脉坏死株系复制酶基因，将其插入质粒ｐＲＯＫ２相应切点中构成植物表达载体．用重组ｐＲＯＫ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍ　ｔｕｍｅｆａｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株，通过重组农杆菌侵染叶盘将复制酶基因转入烟草品种ＮＣ８９中获得转基因植株．分子生物学检测结果表明，复制酶基因在转基因烟草中获得表达，并转基因烟草表现一定程度的延迟发病作用． 展开更多

关键词 马铃薯 病毒 复制酶基因 转基因 烟草

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西瓜转基因抗病毒病新材料BH-1 被引量：10

6

作者 黄学森 牛胜鸟 +13 位作者 王锡民 于嘉林 赵福兴 王生有 翟光明 师范生 蔡晓雨 刘彦军 曹永刚 李凯莉 许艳 郑芳 王小红 王桂莲 《中国西瓜甜瓜》 2004年第1期5-7,共3页

西瓜新材料BH-1,是导入了西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)复制酶基因、黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因的转基因新材料。经温室及大田抗病毒病鉴定表明其抗性达中抗以上水平,是我国第1个通过转基因获得的抗病... 西瓜新材料BH-1,是导入了西瓜花叶病毒(WMV)外壳蛋白基因、小西葫芦黄化花叶病毒(ZYMV)复制酶基因、黄瓜花叶病毒(CMV)复制酶基因的转基因新材料。经温室及大田抗病毒病鉴定表明其抗性达中抗以上水平,是我国第1个通过转基因获得的抗病毒病西瓜新材料。 展开更多

关键词 西瓜 转基因 抗病毒病 西瓜花叶病毒 外壳蛋白基因 小西葫芦黄化花叶病毒 复制酶基因 黄瓜花叶病毒 抗性 BH—l

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转复制酶基因抗病毒烟草的研究 被引量：9

7

作者 朱小平 陈曦 +4 位作者 周翼衡 鲍时来 鲁润龙 王丽莉 尹路明 《中国烟草学报》 EI CAS CSCD 1998年第1期20-23,共4页

将携带烟草花叶病毒（TMV）54KD蛋白基因和黄瓜花叶病毒（CMV）3’端缺失0．9kb的复制酶基因片段的植物表达载体pBICT，通过很痛农杆菌311SE系，利用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择培养基上诱导生芽、生根，得再生植株53株。... 将携带烟草花叶病毒（TMV）54KD蛋白基因和黄瓜花叶病毒（CMV）3’端缺失0．9kb的复制酶基因片段的植物表达载体pBICT，通过很痛农杆菌311SE系，利用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择培养基上诱导生芽、生根，得再生植株53株。移入大田后，选取5株，提取植物总DNA，Southern杂交检测，结果5株中均有复制酶基因的整合，且转基因植株在大田中表现了良好的抗TMV和CMV能力。 展开更多

关键词 烟草花叶病 黄瓜花叶病 根癌农杆菌 复制酶基因 转基因植株

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马铃薯Y病毒复制酶基因的克隆和序列分析 被引量：8

8

作者 彭学贤 项瑜 +1 位作者 刘俊君 莽克强 《生物多样性》 CAS CSCD 1994年第1期35-37,共3页

马铃薯Ｙ病毒复制酶基因的克隆和序列分析彭学贤，项瑜，刘俊君，莽克强（中国科学院微生物研究所，北京１００００８０）ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰＶＹＮＩｂｇｅｎｅ￥ＰｅｎＸ... 马铃薯Ｙ病毒复制酶基因的克隆和序列分析彭学贤，项瑜，刘俊君，莽克强（中国科学院微生物研究所，北京１００００８０）ＭｏｌｅｃｕｌａｒｃｌｏｎｉｎｇａｎｄｓｅｑｕｅｎｃｅａｎａｌｙｓｉｓｏｆＰＶＹＮＩｂｇｅｎｅ￥ＰｅｎＸｕｅｘｉａｎ；ＸｉａｎｇＹｕ；Ｌｉ... 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 基因序列

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TuMV-Nib反义基因对大白菜的遗传转化研究 被引量：7

9

作者 于占东 赵双宜 +4 位作者 何启伟 王翠花 牟晋华 刘春香 康静 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第5期1093-1095,共3页

以‘福山包头’大白菜子叶为试材,以Anti-TuMV-Nib为目的基因,利用根癌农杆菌介导法,建立了大白菜再生转化体系,获得转化植株。经PCR-Southern杂交、RT-PCR及ELISA检测,证明外源TuMV-Nib基因已整合到大白菜核基因组中并获得了表达。

关键词 大白菜 芜菁花叶病毒 复制酶基因 遗传转化

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黄瓜花叶病毒2a基因上的两个氨基酸共同决定其在豆科植物上引发的过敏反应 被引量：6

10

作者 陶小荣 周雪平 +1 位作者 李桂新 于嘉林 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2002年第4期313-320,共8页

过敏反应（hypersensitive response,HR）是植物对病原物侵染的一种抗性反应.对黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）在豆科植物上引发HR反应的相关因子进行了研究,证明CMV 2a基因中的243个碱基决定了过敏反应.进一步对该区域进... 过敏反应（hypersensitive response,HR）是植物对病原物侵染的一种抗性反应.对黄瓜花叶病毒（Cucumber mosaic virus,CMV）在豆科植物上引发HR反应的相关因子进行了研究,证明CMV 2a基因中的243个碱基决定了过敏反应.进一步对该区域进行了分析和点突变研究,用豆科系统侵染株系CMV-P1的631位氨基酸酪氨酸（Tyr）替换豆科局部坏死株系CMV-Fny的相应位点氨基酸苯丙氨酸（Phe）后得到的突变体（Fny-F/Y）在豆科植物上引发HR反应,但过敏枯斑能够向外扩展;用CMV-P1的641位氨基酸丝氨酸（Ser）替换CMV-Fny的相应位点氨基酸丙氨酸（Ala）得到的突变体（Fny-A/S）在豆科植物上引发的HR反应与CMV-Fny引发的症状没有差异;当这两个位点同时被置换后得到的突变体（Fny-FA/YS）在豆科植物接种叶上就不再引发HR反应,而是产生系统侵染,说明CMV在豆科植物上引发的过敏反应是由CMV 2α基因上的631和641位氨基酸共同决定的. 展开更多

关键词 2α基因 氨基酸 过敏反应 黄瓜花叶病毒 复制酶基因 豆科植物 植物抗性反应 点突变体

原文传递

番木瓜环斑病毒复制酶(亚基)基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量：8

11

作者 刘俊君 彭学贤 莽克强 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 1994年第3期283-287,共5页

近二年报道,在TMV、PVX、PEBV和CMV等病毒中,利用病毒编码的复制酶(亚基)基因或相关cDNA片段转化烟草,工程植株获得绝对或极高的病毒抗性。大量研究认为:马铃薯Y病毒组的核内含体大分子量蛋白(NIb)是依赖于RNA的RNA复制酶(或核心亚基),... 近二年报道,在TMV、PVX、PEBV和CMV等病毒中,利用病毒编码的复制酶(亚基)基因或相关cDNA片段转化烟草,工程植株获得绝对或极高的病毒抗性。大量研究认为:马铃薯Y病毒组的核内含体大分子量蛋白(NIb)是依赖于RNA的RNA复制酶(或核心亚基),NIb与上述病毒的复制酶有广泛的同源保守区。 展开更多

关键词 番木瓜 环斑病毒 复制酶基因

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转病毒移动蛋白及复制酶基因烟草的协生和重组风险分析 被引量：4

12

作者 牛颜冰 李桂新 +1 位作者 温瑞 周雪平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期393-397,共5页

对转化番茄花叶病毒 (ToMV)、烟草花叶病毒 (TMV)移动蛋白 (MP)基因和黄瓜花叶病毒P1株系(CMV P1)部分复制酶基因的 3种转基因烟草 ,分别接种马铃薯X病毒 (PVX)、马铃薯Y病毒 (PVY)、CMVRB株系 (CMV RB)和TMV。症状观察和ELISA测定发现 ... 对转化番茄花叶病毒 (ToMV)、烟草花叶病毒 (TMV)移动蛋白 (MP)基因和黄瓜花叶病毒P1株系(CMV P1)部分复制酶基因的 3种转基因烟草 ,分别接种马铃薯X病毒 (PVX)、马铃薯Y病毒 (PVY)、CMVRB株系 (CMV RB)和TMV。症状观察和ELISA测定发现 ,各病毒在转基因烟草和非转基因烟草上的症状及病毒浓度没有显著差异 ,表明这些病毒在转基因烟草上没有协生作用发生。对转化ToMVMP基因和转化CMV P1部分复制酶基因的转基因烟草 ,分别接种TMV和CMV RB ,定期进行生物学、ELISA和免疫捕获反转录PCR(IC RT PCR)检测 ,在 16个月的连续测定中未发现病毒重组现象。 展开更多

关键词 转基因烟草 病毒移动蛋白 复制酶基因 协生作用 基因重组 风险分析

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花粉管通道法介导的抗大麦黄矮病毒转基因小麦研究 被引量：2

13

作者 刘太国 吴茂森 +2 位作者 张文蔚 李世访 成卓敏 《植物保护》 CAS CSCD 北大核心 2005年第4期32-35,共4页

构建了大麦黄矮病毒GPV株系串联结构复制酶基因植物表达载体pPPI29,通过花粉管通道法转化了CA8686小麦,对T0代种子进行了分子检测,获得6株转基因小麦,转化率达到0.45%;对获得的T0代转基因小麦进行了田间抗病性鉴定,结果表明4株转基因小... 构建了大麦黄矮病毒GPV株系串联结构复制酶基因植物表达载体pPPI29,通过花粉管通道法转化了CA8686小麦,对T0代种子进行了分子检测,获得6株转基因小麦,转化率达到0.45%;对获得的T0代转基因小麦进行了田间抗病性鉴定,结果表明4株转基因小麦对GPV株系表现为高抗,可以推迟发病23 d。 展开更多

关键词 基因工程 大麦黄矮病毒 花粉管通道法 复制酶基因

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转马铃薯Y病毒复制酶基因烟草的获得及抗病性分析 被引量：6

14

作者 吴元华 郑云泽 +3 位作者 贝纳新 孙淑英 李浩戈 王振东 《中国烟草科学》 CSCD 1997年第3期23-26,共4页

重组克隆ＤＮＡ用ＫｐｎＩ／ＢａｍＨＩ双酶切得到马铃薯Ｙ病毒ＮＩｂ基因，将其插入质粒ｐＲＯＫ２相应切点中构成植物表达载体。用重组质粒ｐＲＯＫ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａ－ｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０... 重组克隆ＤＮＡ用ＫｐｎＩ／ＢａｍＨＩ双酶切得到马铃薯Ｙ病毒ＮＩｂ基因，将其插入质粒ｐＲＯＫ２相应切点中构成植物表达载体。用重组质粒ｐＲＯＫ２转化农杆菌（Ａｇｒｏｂａｃｔｅｒｉｕｍｔｕｍｅｆａ－ｃｉｅｎｓ）ＬＢＡ４４０４菌株，叶盘法将ＮＩｂ基因转入烤烟品种ＮＣ８９的染色体，获得抗卡那霉素的转化再生植株。经抗性筛选、ＰＣＲ检测、无性扩繁和大量重复抗病鉴定，结果表明，转化烟草植株ＤＮＡ中整合了外源目的基因，且表现抵抗２０μｇ／ｍｌＰＶＹＮ的侵染，ＥＬＩＳＡ分析认为抗性植株无病毒累积，初步筛选出对ＰＶＹＮ侵染具有较高抗性的转基因烟草植株。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 转基因烟草 抗病性

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转PRSV复制酶基因番木瓜食品安全性的初步评价 被引量：7

15

作者 阮小蕾 侯燕 李华平 《华中农业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期381-386,共6页

应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白... 应用生物信息学的方法对转基因番木瓜进行实质等同性分析。将复制酶基因与多个数据库中的花生、大豆、坚果、牛奶、鸡蛋、鱼类、贝类和小麦等8类过敏源序列进行比对分析,结果未发现连续8个相同的氨基酸,据此可初步认为转入的复制酶蛋白不是已知的致敏源。将复制酶基因进行原核表达,并纯化复性表达蛋白,再通过模拟胃肠液消化试验,结果发现纯化的变性蛋白与复性蛋白均能在15 s内降解,表明复制酶蛋白能在人的消化系统内降解,使人体发生过敏的可能性不大。通过液相萃取法,提取转基因与非转基因番木瓜中的一种内源毒物苄基异硫氰酯(benzyl isothiocyanate,BITC),将浓缩后的样品进行气相色谱分析,结果表明BITC的含量在转基因与非转基因番木瓜中差异不显著。 展开更多

关键词 番木瓜 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 食品安全

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马铃薯Y病毒复制酶基因不同位置cDNA区段介导对PVY的不同抗性 被引量：7

16

作者 徐丽 宋云枝 +2 位作者 王文俊 朱常香 温孚江 《植物保护学报》 CAS CSCD 北大核心 2010年第3期227-233,共7页

为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）复制酶基因（nuclear inclusion b，NIb）不同位置的cDNA区段，反向插入双元载体pR... 为探究靶序列位置对RNA介导的病毒抗性产生的影响，利用聚合酶链式反应（polymerase chain reaction，PCR）技术扩增马铃薯Y病毒（Potato virus Y, PVY）复制酶基因（nuclear inclusion b，NIb）不同位置的cDNA区段，反向插入双元载体pROKII中，构建了发夹RNA（hairpin RNA，hpR—NA）结构的植物表达载体。将构建的植物表达载体采用冻融法转入农杆菌LBA4404，叶盘法转化烟草NC89，获得转基因植株。攻毒试验表明：PVYNIb基因不同位置cDNA区段介导的对PVY的抗性存在显著差异；3’端1／2处和中间位置的序列可介导高水平的病毒抗性，抗性植株的比例在50％以上，而5‘端、5’端1／2处和3’端的序列介导的抗性效率较低，抗性植株的比例仅为10％～30％。Northern杂交显示：抗病植株中RNA的积累量明显低于同类型的感病植株，抗性与RNA积累量呈负相关；抗病转基因植株中有siRNA存在，表明病毒抗性是由RNA介导的。 展开更多

关键词 马铃薯Y病毒 复制酶基因 RNA介导的病毒抗性

原文传递

香蕉束顶病毒复制酶基因克隆及转基因表达 被引量：4

17

作者 林德球 屈良鹄 张宏达 《热带亚热带植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2004年第2期142-146,共5页

以广州市郊获得的香蕉束顶病毒(BBTV)的DNA为模板,进行PCR扩增得到香蕉束顶病毒复制酶基因的1.1kbDNA。所获得的DNA序列与澳大利亚的BBTV序列的同源性达90%,这部分序列编码香蕉束顶病毒复制酶基因的羧基端。将改造的BBTV复制酶基因克隆... 以广州市郊获得的香蕉束顶病毒(BBTV)的DNA为模板,进行PCR扩增得到香蕉束顶病毒复制酶基因的1.1kbDNA。所获得的DNA序列与澳大利亚的BBTV序列的同源性达90%,这部分序列编码香蕉束顶病毒复制酶基因的羧基端。将改造的BBTV复制酶基因克隆到pBI121的CaMV35S和NOS终止序列之间,构建表达载体,并采用基因枪轰击香蕉试管苗生长点组织的方法,经PCR检测和Westernblot分析,获得4株具有BBTV复制酶基因整合表达的T0代转基因香蕉。转基因植株的抗病性正在检测之中。 展开更多

关键词 香蕉束项病毒 复制酶基因 转基因香蕉 抗病性

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苜蓿花叶病毒复制酶基因的克隆、序列分析及其植物表达载体的构建 被引量：5

18

作者 张竞秋 哈斯阿古拉 +1 位作者 张丽 张鹤龄 《内蒙古大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2003年第5期536-541,共6页

以侵染苜蓿的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlfalfamosaicvirusChineseisolate,A1MV-Ch)RNA2为模板,利用人工合成的特异性引物,进行反转录及PCR扩增,分两段分别扩增了复制酶基因的5′端1.32kb和3′端及其非编码区的1.23kbcDNA序列.用限制性... 以侵染苜蓿的苜蓿花叶病毒中国分离株(AlfalfamosaicvirusChineseisolate,A1MV-Ch)RNA2为模板,利用人工合成的特异性引物,进行反转录及PCR扩增,分两段分别扩增了复制酶基因的5′端1.32kb和3′端及其非编码区的1.23kbcDNA序列.用限制性内切酶切割PCR产物后,与pUC19重组,转化大肠杆菌DH5α,筛选重组质粒,用限制性内切酶分析及PCR鉴定,得到分别含有5′端序列和3′端序列的重组质粒,已由上述两种重组质粒构建了含有完整复制酶基因的重组质粒.进行了全序列测定,并与国外报道的A1MV-425株系的相应序列相比较,其复制酶基因编码区核苷酸序列同源性达97.8%,推测的氨基酸序列的同源性达97.6%,3′端非编码区核苷酸序列同源性为98.2%.并将全长复制酶基因与植物表达载体pROK 重组,得植物转化载体pAlMV-FL. 展开更多

关键词 苜蓿花叶病毒 复制酶基因 核苷酸序列 分子克隆

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番木瓜环斑病毒复制酶基因转化番木瓜的研究 被引量：6

19

作者 陈谷 叶长明 +1 位作者 黄俊潮 李宝健 《遗传》 CAS CSCD 北大核心 1998年第S1期11-13,共3页

构建了含番木瓜环斑病毒复制酶（ＰＲＶＲＰ）基因的植物表达载体ｐＲＰＴＷ，导入农杆菌ＬＢＡ４４０４，转化番木瓜，转基因植株经点杂交和ＰＣＲＳｏｕｔｈｅｒｎ检测，证明ＰＲＶＲＰ基因已整合进番木瓜基因组。

关键词 番木瓜环斑病毒 复制酶基因 农杆菌 转化

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复制酶基因介导的抗病毒烟草植株的研究 被引量：3

20

作者 鲁润龙 董伟 +10 位作者 王丽莉 鲍时来 顾月华 尹路明 林国平 殷凤生 孙学永 郭永江 冯开萍 罗永宏 刘勇 《中国科学技术大学学报》 CAS CSCD 北大核心 1996年第2期191-194,共4页

将构建的携带烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因及黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）３’端缺失０．９Ｋｂ的１．６Ｋｂ片断复制酶基因植物表达载体ｐＢＩＣＴ，导入根癌农杆菌３１１ＳＥ系，用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择性培... 将构建的携带烟草花叶病毒（ＴＭＶ）５４ＫＤ蛋白基因及黄瓜花叶病毒（ＣＭＶ）３’端缺失０．９Ｋｂ的１．６Ｋｂ片断复制酶基因植物表达载体ｐＢＩＣＴ，导入根癌农杆菌３１１ＳＥ系，用叶圆盘法转化烟草，在含有卡那霉素的选择性培养基上诱导生芽、生根，得到２８株成活苗．移入大田后，随机挑选４．株植物，提取植物总ＤＮＡ，经ＰＣＲ扩增、Ｓｏｒｔｈｅｒｎ杂交检测，结果４株植物中都有复制酶基因的整合，而未经转化的对照组植物则没有．转基因植株在大田试验中表现了良好的抗烟草花叶病毒及黄瓜花叶病毒能力． 展开更多

关键词 烟草 复制酶基因 转基因植株 抗病毒植株

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