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小麦Ven型胞质雄性不育植株与可育植株花药蛋白质组差异研究 被引量:4
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作者 汪月 张艳霞 +5 位作者 蔺艳丽 吴盼盼 张卫东 高庆荣 张凯 赵睿 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第6期1135-1145,共11页
普通小麦具有偏凸山羊草(Ae.ventricosa)细胞质的不育系为Ven型胞质雄性不育系(Ven-cytoplasmic male sterility,Ven-CMS),是粘类小麦CMS的一种类型。该研究对小麦Ven型雄性不育系冀5418A及其同型保持系冀5419B的单核期和二核期的... 普通小麦具有偏凸山羊草(Ae.ventricosa)细胞质的不育系为Ven型胞质雄性不育系(Ven-cytoplasmic male sterility,Ven-CMS),是粘类小麦CMS的一种类型。该研究对小麦Ven型雄性不育系冀5418A及其同型保持系冀5419B的单核期和二核期的花药进行差异蛋白质组学分析,探讨小麦质核互作雄性不育的分子机制。通过双向电泳分离花药蛋白,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)对差异表达蛋白进行质谱鉴定,利用生物信息学进行差异表达蛋白鉴定和功能注释分析。结果表明,在分子量19.0~100.0kD、等电点4~7线性范围内,共检测到约2 000个蛋白点。2个时期共检测到差异蛋白98个,其中两个时期差异表达变化一致的蛋白点56个;数据库搜索获得鉴定的蛋白点41个,其中18个蛋白的表达量在冀5418A中显著下调,23个在冀5418B中明显下调。在不育系和可育系中均有参与能量代谢、活性氧代谢、核糖体合成、花粉物质合成的差异蛋白。GO分析预测差异蛋白生物学过程多涉及电子传递和能量代谢、核糖体代谢、活性氧代谢等,细胞组成主要是在膜区域和线粒体,分子功能主要是DNA和RNA结合功能和水解酶等。KEGG分析表明,较多蛋白分布于碳水化合物代谢、活性氧代谢和蛋白组装和折叠途径。推测不育系冀5418A的雄性不育性除了涉及能量代谢、活性氧清除过程,核糖体蛋白、伴侣蛋白等也有重要作用,雄性不育性可能还与蛋白质加工、物质合成过程的紊乱有关。 展开更多
关键词 小麦 质核互作雄性不育 差异蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱
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注射用胸腺法新杂质结构鉴定及含量测定 被引量:2
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作者 张颖 尹红锐 +3 位作者 徐蓓菁 郑璐侠 邵泓 陈钢 《中国药师》 CAS 2020年第7期1417-1422,共6页
目的:对注射用胸腺法新中与胸腺法新主峰较难分离的杂质结构进行鉴定并测定7家企业样品中杂质的含量。方法:结合使用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)和二维-超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(2D-UPLC-Q-TOF)测定... 目的:对注射用胸腺法新中与胸腺法新主峰较难分离的杂质结构进行鉴定并测定7家企业样品中杂质的含量。方法:结合使用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)和二维-超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱(2D-UPLC-Q-TOF)测定杂质分子量并对结构进行鉴定,同时采用与合成的杂质对照品通过保留时间比对进行结构确认,并且通过HPLC方法对杂质含量进行测定。结果:测得胸腺法新主峰前后5个杂质分别为3个异构体杂质([D-Ser1]-胸腺法新、[D-Asp15]-胸腺法新、[D-Asn28]-胸腺法新)、1个缺失肽杂质([Des-Ala3]-胸腺法新)和1个水解杂质([Asp28]-胸腺法新),杂质含量为0.1%~1.0%。结论:使用两种质谱技术对杂质结构进行鉴定,结果可靠,本研究为完善质量标准以及制定合理的杂质限度提供了依据。 展开更多
关键词 注射用胸腺法新 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱 二维-超高效液相色谱-四级杆飞行时间质谱 杂质 结构鉴定 含量测定
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宫颈上皮内瘤变与正常宫颈组织差异表达蛋白分析 被引量:2
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作者 何玥 吴玉梅 +4 位作者 赵群 王晓丽 陈硕 钱小红 张玉祥 《首都医科大学学报》 CAS 2012年第1期36-44,共9页
目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京... 目的探讨蛋白质组学方法筛查正常宫颈与宫颈上皮内瘤变(cervical intraepithelial neoplasia,CIN)组织中的差异表达蛋白质标志物,为研究CIN发生的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集2008年8月至2009年9月间首都医科大学附属北京妇产医院妇瘤科收治的正常子宫颈组织因子宫肌瘤手术行全子宫切除术患者9例为对照组、CIN组织23例(其中CINⅠ7例、CINⅡ8例、CINⅢ8例)。应用二维荧光差异凝胶电泳(two-dimensional fluorescence difference in gel electrophoresis,2-DDIGE)及DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF MS)分析差异蛋白质点,数据库搜索鉴定差异表达最明显的S100蛋白家族A9(S100 calcium-binding protein A9,S100A9),真核延长因子1α1(eukaryoticelongation factor 1-alpha-1,eEF1A1)及丙酮酸激酶M2(pyruvate kinase M2,PKM2)3种蛋白质;应用免疫组织化学法(immunohistochemistry,IHC)(其中正常宫颈组织10例、CINⅠ10例、CINⅡ10例、CINⅢ10例)及蛋白印记法(Western blotting)(其中正常宫颈组织12例,CINⅠ~Ⅱ12例,CINⅢ12例)进一步验证上述3种蛋白在CIN组织和正常宫颈组织的表达差异。结果获得CIN组织与正常宫颈组织2-D DIGE图,成功鉴定25个蛋白;免疫组化及蛋白印迹验证结果提示:S100A9蛋白表达于细胞质中,在CIN中表达水平高于正常组,差异有统计学意义(P=0.010);eEF1A1蛋白表达于细胞质中、PKM2蛋白表达于细胞核中,2者在CIN中表达水平均低于正常组,差异有统计学意义(P分别为0.352,0.000)。结论在正常宫颈组织与CIN组织之间存在差异蛋白质表达,S100A9蛋白可能成为辅助诊断CIN的相关标志物,PKM2蛋白可能成为抑制CIN发生的蛋白质,并可根据2种差异蛋白表达预测CIN的发生发展。 展开更多
关键词 蛋白质组学 宫颈上皮内瘤变 二维荧光差异凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱
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番茄幼苗盐胁迫响应蛋白质组分析 被引量:2
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作者 王强 王娟 +7 位作者 张慧君 李宁 唐亚萍 王柏柯 杨生保 杨涛 帕提古丽 余庆辉 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第11期2226-2232,共7页
采用营养液栽培,以盐敏感型番茄品种M82为试材,利用双向电泳(2-DE)研究盐胁迫处理下幼苗叶片蛋白质的表达谱,并采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术进行差异蛋白质的分离及质谱鉴定。结果表明:(1)盐胁迫处理下... 采用营养液栽培,以盐敏感型番茄品种M82为试材,利用双向电泳(2-DE)研究盐胁迫处理下幼苗叶片蛋白质的表达谱,并采用基质辅助激光解析飞行时间串联质谱(MALDI-TOF/TOF-MS)技术进行差异蛋白质的分离及质谱鉴定。结果表明:(1)盐胁迫处理下,利用2-DE获得差异显著蛋白点20个,其中17个蛋白质点丰度上调表达,3个蛋白质点丰度下调表达。(2)通过质谱分析和蛋白质NCBInr数据库检索,共鉴定出19个差异蛋白,分别为果糖-二磷酸醛缩酶、S-腺苷甲硫氨酸合成酶、甘油醛-3-磷酸脱氢酶等及3个功能未知蛋白;这些鉴定出的差异蛋白质与能量代谢、光合作用、蛋白合成、氧化还原平衡等过程相关,暗示所分离鉴定的蛋白可能参与了番茄的盐胁迫响应,为进一步研究番茄抗逆机制奠定基础。 展开更多
关键词 番茄 盐胁迫 蛋白质组 基质辅助激光解析飞行时间串联质谱
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澄清剂对黄酒混浊蛋白去除效果的研究 被引量:5
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作者 樊世英 孙军勇 +1 位作者 谢广发 陆健 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2015年第8期167-170,177,共5页
研究了单宁、硅胶和Polyclar R Brewbrite等澄清剂对黄酒混浊蛋白特异性去除的效果,并通过采用N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱,研究了黄酒混浊蛋白及不同澄清剂吸附蛋白... 研究了单宁、硅胶和Polyclar R Brewbrite等澄清剂对黄酒混浊蛋白特异性去除的效果,并通过采用N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基磺酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳、基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱,研究了黄酒混浊蛋白及不同澄清剂吸附蛋白的分子量、蛋白质种类及来源,并比较了澄清剂处理前后酒样隆丁区分和非生物稳定性的变化。结果表明:黄酒混浊蛋白的主要成分为类燕麦蛋白和二聚α-淀粉酶抑制剂,主要来源于小麦,几种澄清剂对二聚α-淀粉酶抑制剂都有一定的吸附作用,且处理后的酒样稳定性得到提高,其中以单宁效果最为明显。 展开更多
关键词 黄酒 澄清剂 混浊蛋白 基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱 蛋白稳定性
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利用基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱分析胆囊结石中非黏性蛋白的组成 被引量:4
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作者 殷和平 曾骥孟 +3 位作者 胡鹏 李志明 潘耀振 孙诚谊 《中国现代医学杂志》 CAS 北大核心 2015年第23期46-51,共6页
目的探讨胆固醇结石和胆色素结石中是否存在非黏性蛋白并鉴定蛋白质的组成。方法选取30例行保胆取石术患者的胆囊结石,男性11例,女性19例。采用肉眼观察并结合三酰甘油检测试剂盒(GPO-PAP)测定胆固醇含量的方法对胆结石进行分类,分为20... 目的探讨胆固醇结石和胆色素结石中是否存在非黏性蛋白并鉴定蛋白质的组成。方法选取30例行保胆取石术患者的胆囊结石,男性11例,女性19例。采用肉眼观察并结合三酰甘油检测试剂盒(GPO-PAP)测定胆固醇含量的方法对胆结石进行分类,分为20例胆固醇型和10例胆色素型。应用组织裂解法(RIPA)提取胆囊结石蛋白,并用十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)与基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱(MALDI-TOF-TOF)分析相结合的方法对该蛋白进行鉴定分析。通过DAVID工具对上述基因进行基因本体(GO)功能富集分析本图及京都基因、基因组百科全书(KEGG)信号转导通路富集分析。结果胆固醇结石和胆色素结石中出现特异性蛋白,经质谱鉴定为转铁蛋白前体蛋白(TRFE)、白蛋白(ALB)、抗胰蛋白酶1(SERPINA1)、免疫球蛋白γ-1(IGHG1)、α血红蛋白(HBA1)、β血红蛋白(HBB),其中IGHG1不存在于胆色素结石中。结论 TRFE、ALB、SERPINA1、HBA1、HBB等蛋白共同存在于胆固醇和胆色素结石中,而IGHG1只存在于胆固醇结石中,可见IGHG1蛋白或其对应基因是参与不同胆结石类型成因的重要元素及生物标志物。KEGG分析结果表明,SERPINA1参与补体和凝血级联反应。鉴定和分析胆囊结石中非黏性蛋白的成分及利用资料库的模拟对阐明胆囊结石的发病机制有重要的意义。 展开更多
关键词 胆囊结石 非黏性蛋白 基质辅助激光解析电离飞行时间串联质谱
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联合应用二维液相色谱及串联质谱技术筛选牙龈卟啉单胞菌外膜蛋白抗原的初步研究 被引量:1
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作者 李昂司薇杭王嗣岑石建峰饶国洲苟建重 司薇杭 +3 位作者 王嗣岑 石建峰 饶国洲 苟建重 《中华口腔医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第12期749-753,共5页
目的 联合应用二维液相色谱(two-dimensional liquid phase fractionation,PF2D)及基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight/time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF... 目的 联合应用二维液相色谱(two-dimensional liquid phase fractionation,PF2D)及基质辅助激光解吸电离飞行时间串联质谱(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight/time-of-flight mass spectrometry,MALDI-TOF/TOF-MS)技术,筛选多种牙龈卟啉单胞菌(Porphyromonas gingivalis,Pg)共同外膜蛋白(outer membrane protein,OMP),为针对多种Pg设计具有交叉保护作用的疫苗提供候选靶抗原.方法 超高速离心法提取Pg301、PgATCC33277和PgW83菌株OMP,应用PF2D目标蛋白快速分离系统分离OMP,对比分析得到共同OMP,用MALDI-TOF/TOF-MS串联质谱结合数据库搜索,确定蛋白质一级结构.结果 第一维色谱聚焦分离,3株Pg共获得99个蛋白质样本;选定OMP组分B7,进行第二维反相色谱分离,3株Pg共确定了8个共同的蛋白色谱峰,运用MALDI-TOF/TOF-MS对蛋白样品进行鉴定,结果 确定了其中一个为已知的蛋白精氨酸-牙龈素A.结论 PF2D分离系统分辨率高、重现性好,结合MALDI-TOF/TOF-MS串联质谱技术,可用于鉴定Pg的共同OMP. 展开更多
关键词 紫单胞菌 细菌外膜蛋白质类 色谱法 液相 基质辅助激光解析/电离飞行时间串联质谱
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黄酒混浊蛋白组成成分及来源分析 被引量:1
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作者 谢广发 樊世英 +8 位作者 傅建伟 胡志明 陆健 谭新勇 孙军勇 傅祖康 王兰 毛青钟 李国龙 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2020年第8期215-219,共5页
采用双向电泳对混浊蛋白进行分离,并结合基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱法鉴定混浊蛋白的主要种类及来源。结果表明,黄酒混浊蛋白质来源于小麦的有类燕麦蛋白A、类燕麦蛋白B、类燕麦蛋白前体、二聚α-淀粉酶抑制剂和胰蛋白酶前... 采用双向电泳对混浊蛋白进行分离,并结合基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱法鉴定混浊蛋白的主要种类及来源。结果表明,黄酒混浊蛋白质来源于小麦的有类燕麦蛋白A、类燕麦蛋白B、类燕麦蛋白前体、二聚α-淀粉酶抑制剂和胰蛋白酶前体等,来源于水稻的有假定蛋白OSJ_04535、假定蛋白OSI_17439和蛋白H0313F03.18。通过N-三(羟甲基)甘氨酸-十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳,对黄酒酿造原料及黄酒发酵过程中蛋白质的主要组成进行分析,结果表明黄酒混浊蛋白主要来源于大米和麦曲,并且在发酵过程中难以被微生物降解,存在于发酵的整个过程中。 展开更多
关键词 黄酒 混浊蛋白 基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱 蛋白来源 发酵过程
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正常宫颈宫颈上皮内瘤变与宫颈鳞癌组织的差异表达蛋白分析 被引量:1
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作者 赵群 吴玉梅 +4 位作者 何玥 王晓丽 陈硕 钱小红 张玉祥 《中华肿瘤杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期914-920,共7页
目的探讨采用比较蛋白质组学方法筛查正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈鳞癌(SCC)组织中的差异表达蛋白,为研究CIN发展为SCC的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集正常宫颈组织(因子宫肌瘤行全子宫切除术)9例、CIN组织2... 目的探讨采用比较蛋白质组学方法筛查正常宫颈、宫颈上皮内瘤变(CIN)和宫颈鳞癌(SCC)组织中的差异表达蛋白,为研究CIN发展为SCC的分子机制及临床诊治工作提供依据。方法收集正常宫颈组织(因子宫肌瘤行全子宫切除术)9例、CIN组织23例(其中CINI级7例、CINII级8例、CINIII级8例)和SCC组织7例。应用二维荧光差异凝胶电泳和DeCyder软件寻找差异表达蛋白质点,基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱仪鉴定差异蛋白质点,数据库搜索差异表达蛋白。收集正常宫颈组织20例、CIN组织60例和SCC组织20例,应用免疫组化法和Westernblot法验证差异最显著的S100蛋白A9(S100A9)、真核翻译延长因子1α1(eEF1A1)和丙酮酸激酶M2(PKM2)在不同宫颈组织中的表达差异。结果建立了分辨率高、重复性好的正常宫颈、CIN与SCC的双向凝胶电泳图谱。选取显著表达差异蛋白质点46个(其中上调27个,下调19个)进行鉴定,成功鉴定出26个蛋白质。免疫组化法检测结果显示,S100A9蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为20.0%、70.0%和100.0%,差异有统计学意义(P=0.006)。eEF1A1蛋白主要表达于细胞质,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为70.0%、73.3%和60.0%,差异无统计学意义(P=0.758)。PKM2蛋白主要表达于细胞核,其在正常宫颈组织、CIN组织和SCC组织中的阳性表达率分别为100.0%、93.3%和75.0%,差异接近有统计学意义(P=0.059)。Westernblot法检测的结果与免疫组化法检测的结果基本一致。结论正常宫颈、CIN和SCC组织间存在蛋白质表达的差异。S100A9、eEF1A1和PKM2可能成为宫颈癌早期诊断的标志物和治疗的新靶点,并为研究CIN发展为宫颈癌的发病机制提供基础。 展开更多
关键词 蛋白质组学 宫颈肿瘤 宫颈上皮内瘤变 二维荧光差异凝胶电泳 基质辅助激光解析电离-飞行时间串联质谱
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