基于基质辅助激光解析质谱的高通量酪氨酸酶活性及抑制剂分析

1

作者 石倩 刘冬梅 +1 位作者 方小泥 刘宝红 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2024年第11期108-115,共8页

利用具有高效便捷分离能力和强紫外吸收的磁性石墨烯纳米材料Fe3O4@G,结合基质辅助激光解析质谱用于酪氨酸酶的活性及抑制剂分析.与其它方法相比,该策略在避免繁琐样品前处理的基础上,减少了样品的损失,提高了检测的灵敏度.此外,结合基... 利用具有高效便捷分离能力和强紫外吸收的磁性石墨烯纳米材料Fe3O4@G,结合基质辅助激光解析质谱用于酪氨酸酶的活性及抑制剂分析.与其它方法相比,该策略在避免繁琐样品前处理的基础上,减少了样品的损失,提高了检测的灵敏度.此外,结合基质辅助激光解析质谱实现了高通量的样品分析.本文结果对于深入了解黑色素合成过程、研究相关疾病以及开发有效的药物和美容产品具有重要意义. 展开更多

关键词 基质辅助激光解析质谱 磁性石墨烯 酪氨酸酶 活性测定 抑制剂分析

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基质辅助激光解析质谱成像技术的样品制备及其应用 被引量：2

2

作者 邹贵勉 汤冬娥 +6 位作者 睢维国 陈洁晶 李丽萍 侯玉文 李欢 李海燕 戴勇 《国际病理科学与临床杂志》 CAS 2010年第6期536-542,共7页

基质辅助激光解析质谱成像技术(matrix-assisted laser desorption mass spectrometry imaging,MALDI-MSI)已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品制备方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样... 基质辅助激光解析质谱成像技术(matrix-assisted laser desorption mass spectrometry imaging,MALDI-MSI)已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品制备方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品制备方法与专业的仪器分析方法结合起来,才能实现对多肽和蛋白质等生物大分子的准确鉴定。MALDI-MSI是一项新的并迅速成熟的技术领域,本文针对MALDI-MSI在多肽和蛋白质中的应用,以哺乳动物组织为例,对MALDI-MSI的成像原理、样品制备及该技术的应用进行介绍。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析质谱成像技术 生物标记 组织切片 样品制备 应用

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通过基质辅助激光解析电离飞行时间质谱系统直接快速鉴定阳性血培养 被引量：15

3

作者 马坚 俞万钧 +4 位作者 胡必杰 高晓东 周春妹 黄声雷 周昭彦 《中华医院感染学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2017年第12期2676-2679,共4页

目的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床微生物实验室的应用,为阳性血培养中微生物鉴定提供了革命性的新方法,我们报告一种改良的利用MALDI-TOF质谱直接鉴定阳性血培养的方法。方法 2011年10月-2012年10月共收集312... 目的基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)在临床微生物实验室的应用,为阳性血培养中微生物鉴定提供了革命性的新方法,我们报告一种改良的利用MALDI-TOF质谱直接鉴定阳性血培养的方法。方法 2011年10月-2012年10月共收集312瓶阳性培养物,细菌分别属于12个不同属和32个种,MALDI-TOF质谱鉴定的细菌同时进行了常规生化法鉴定,其中不符合的部分通过序列分型明确。结果 200株革兰阳性菌中,161株(80.5%)准确鉴定到属以上水平,121株(60.5%)准确鉴定到种;112株革兰阴性菌中,101株(90.2%)准确鉴定到属以上水平,81株(72.3%)准确鉴定到种水平;MALDI-TOF质谱鉴定革兰阴性菌,在属以上水平和种水平上,准确率均高于革兰阳性菌。结论通过这种方法能在1h内快速、鉴定阳性血培养中的常见细菌,如果将此项技术常规应用于临床,将显著增加菌血症患者在24h内得到最佳抗菌药物治疗的比例。 展开更多

关键词 血培养 细菌 血流感染 鉴定 基质辅助激光解析电离质谱

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正常与脑缺血大鼠的脑皮质蛋白质差异分析鉴定 被引量：11

4

作者 赵晓峰 温景荣 +1 位作者 王舒 石学敏 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期934-941,共8页

Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,采用改进的线栓法制备模型,在规定的时间点快速断头取脑,分离脑皮质组织,提取蛋白质后双向电泳展示,以ImageMaster2DElitev3.01软件对2_DE图谱进行差异表达分析,目标蛋白点用基质辅助激光解析电离质... Wistar大鼠随机分为正常组和模型组,采用改进的线栓法制备模型,在规定的时间点快速断头取脑,分离脑皮质组织,提取蛋白质后双向电泳展示,以ImageMaster2DElitev3.01软件对2_DE图谱进行差异表达分析,目标蛋白点用基质辅助激光解析电离质谱测定肽质量指纹图进行鉴定。线粒体应激70蛋白前体、血小板活化因子乙酰基水解酶IBβ亚单位、ADP核糖基化因子蛋白3、电压依赖性阴离子选择通道蛋白1、泛素C末端水解酶同工酶L1、突触结合蛋白等11个蛋白在模型6h组表达上调,谷胱甘肽S_转移酶omega1、谷胱甘肽S_转移酶P、Cu_Zn超氧化物歧化酶、ATP合酶D链、G蛋白β亚单位1、微管蛋白β链15、苹果酸脱氢酶等15个蛋白在模型6h组表达上调。胆绿素还原酶B、细胞因子A4前体为模型组新出现点,腺苷酸激酶同工酶1在模型组消失,Thioredoxinperoxidase1在模型组分为2个点。以双向电泳技术得到分辨率较好的电泳图谱,并初步鉴定脑缺血后差异表达蛋白,为深入研究缺血性脑损伤病理机制奠定了基础。 展开更多

关键词 比较蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解析电离质谱 脑缺血

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二甲双胍联合小檗碱对db/db小鼠糖尿病认知功能障碍的改善作用 被引量：12

5

作者 曹月盈 孟祥宝 +4 位作者 孙桂波 孙晓波 孙懿 赵欣 蒲小平 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2021年第8期690-700,共11页

目的:利用db/db转基因小鼠模型探究二甲双胍联合小檗碱对糖尿病认知功能障碍的改善作用。方法:将db/db小鼠随机分为模型组(M)、二甲双胍给药组(Mt)、小檗碱给药组(Bb)和二甲双胍联合小檗碱给药组(MB),将同窝出生的db/m小鼠设为空白对照... 目的:利用db/db转基因小鼠模型探究二甲双胍联合小檗碱对糖尿病认知功能障碍的改善作用。方法:将db/db小鼠随机分为模型组(M)、二甲双胍给药组(Mt)、小檗碱给药组(Bb)和二甲双胍联合小檗碱给药组(MB),将同窝出生的db/m小鼠设为空白对照组(C)。分别灌胃给药二甲双胍(300 mg·kg^(-1))、小檗碱(135 mg·kg^(-1))、二甲双胍联合小檗碱(300 mg·kg^(-1)+135 mg·kg^(-1))10周,测定各组db/db小鼠体重、血糖及其相关指标、行为学、氧化应激和炎症因子相关指标;并用苏木素-伊红染色处理脑组织切片,光镜观察病理学改变;利用基质辅助激光解析电离质谱成像(matrix-assisted laser desorption ionization time-of-flight mass spectrometry imaging,MALDI-TOF-MSI)技术观察小鼠脑组织代谢小分子含量的变化。结果:MB组小鼠空腹血糖值明显低于M组,且低于Mt和Bb组小鼠血糖。水迷宫实验中,和M组小鼠比较,MB组小鼠逃避潜伏期和从对侧象限入水找到平台的时间明显变短;90 s内穿台次数和在目标象限中停留时间明显增多。在外周血清ELISA测定中,MB组小鼠对比M组小鼠HbA1c,8-OHdG,PCO,TNF-α,NLRP3和IL-1β水平均明显降低,IL-6水平明显升高。在HE染色实验中,和M组小鼠比较,MB组小鼠脑海马区中神经细胞排列整齐,形态较完整,核染色清晰,细胞间界限清楚。在质谱成像实验中,和M组小鼠比较,MB组小鼠脑天冬氨酸、N-乙酰-天冬氨酸、谷氨酸水平明显上升且高于Mt和Bb组;牛磺酸、葡萄糖水平明显降低且低于Mt和Bb组。结论:本实验证明了二甲双胍联合小檗碱口服给药对糖尿病认知功能障碍有改善作用,且比单独给药二甲双胍或小檗碱效果更明显,其作用机制或与抗炎、抗氧化应激、改善TCA循环以及提高兴奋性氨基酸水平等相关。 展开更多

关键词 DB/DB小鼠 糖尿病认知功能障碍 二甲双胍 小檗碱 基质辅助激光解析电离质谱成像

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肺癌相关蛋白的筛选与鉴定 被引量：9

6

作者 张慧珍 巴月 +2 位作者 杨继要 范清堂 吴逸明 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第1期6-8,共3页

目的:应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白,为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据.方法:收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织,提取可溶性总蛋白.应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶... 目的:应用蛋白质组学方法筛选肺癌相关蛋白,为阐明肺癌发生的分子机制和预后研究提供理论依据.方法:收集8例手术切除的新鲜肺癌组织及同一患者手术切缘的癌旁组织,提取可溶性总蛋白.应用等电聚焦(IEF)电泳和十二烷基磺酸钠聚丙烯酰凝胶电泳(SDS-PAGE)技术将可溶性总蛋白分离,得到肺癌的蛋白质组分析型双向电泳图谱,经PDQuest凝胶图像分析软件分析后找出差异蛋白点.胶内酶解差异表达的蛋白点,基质辅助电离解析飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)获得肽质量指纹图谱(PMF),搜寻蛋白质数据库,并运用生物信息学鉴定蛋白质,分析蛋白的生物学意义和生物学功能,作为肺癌标志物的候选蛋白.结果:分别将8例肺癌组织及配对的癌旁组织可溶性总蛋白经过重复3次双向电泳,建立了肺癌组织蛋白质表达谱.经PDQuest凝胶图像分析软件进行分析后,12个蛋白质斑点只在肺癌组织有表达;6个蛋白质斑点只在癌旁表达.对高丰度的肺癌特异表达的蛋白点进行鉴定,结果表明这些特异蛋白分别为钙粒蛋白B,Calgizzarin,载脂蛋白A-I,载脂蛋白E,Ras相关蛋白Rab-14,亲环素.结论:建立了人肺癌组织和癌旁组织的双向电泳图谱,为建立相应的蛋白质数据库提供了基础数据;鉴定了钙粒蛋白B等肺癌相关蛋白质,为进一步寻找肺癌蛋白标志物奠定了基础,对阐明肺癌发生的分子机制和预后研究有重要理论意义. 展开更多

关键词 肺肿瘤 相关蛋白 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离质谱

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兔肝金属硫蛋白亚型异构体的高效液相色谱分离与ESI-MS,MALDI-TOF-MS鉴定 被引量：8

7

作者 赵锐 纪建国 +2 位作者 袁洪生 管华诗 茹炳根 《高等学校化学学报》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2002年第6期1086-1090,共5页

由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的... 由于金属硫蛋白 (MT)基因的多态性 ,决定不同亚型的 MT异构体的存在 ,MT亚型异构体的结构是MT功能研究的基础 .通过离子交换柱可将 MT分成 MT-1和 MT-2两个异构体 ,用不同条件的反相高效液相色谱 (RP-HPLC)可将 MT-1和 MT-2分成不同的亚型异构体 ,并利用 MALDI-TOF MS和 LC-ESI-MS对比确定了它们的分子量 .结果表明 ,兔肝 MT在不同的 p H条件下分离得到不同分子量的亚型异构体 .在酸性条件下 ,MT-1可分为 2个主要亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0和 62 44.5 ,而 MT-2主要分为 3个亚型异构体 ,分子量分别为 61 49.0 ,62 44.0和 61 2 7.0 . MT-1和 MT-2有 2个亚型异构体分子量相同的异构体存在 .在酸性条件下 ,MT-1的 2个异构体及 MT-2分子量为 61 2 7的亚型异构体可稳定存在 . 展开更多

关键词 高效液相色谱 分离 鉴定 金属硫蛋白 亚型异构体 电喷雾离子化质谱 基质辅助激光解析飞行时间质谱

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一起肠炎沙门菌引起食源性疾病暴发的溯源性分析 被引量：10

8

作者 戚浩彧 吴玲玲 +3 位作者 炊慧霞 李艳芬 崔莹 廖兴广 《中国卫生检验杂志》 CAS 2021年第9期1037-1039,1043,共4页

目的对一起食源性疾病暴发进行病原菌鉴定和溯源性分析,查明事件暴发原因。方法将采集到的食物样本、厨具涂抹样本和粪便标本进行病原菌分离培养,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)对分离菌株鉴定并进行血清学分型,应用脉冲... 目的对一起食源性疾病暴发进行病原菌鉴定和溯源性分析,查明事件暴发原因。方法将采集到的食物样本、厨具涂抹样本和粪便标本进行病原菌分离培养,用基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOFMS)对分离菌株鉴定并进行血清学分型,应用脉冲场凝胶电泳(PFGE)对其进行分子分型和同源性分析。同时对分离菌株进行抗生素敏感性实验。结果共检出10株肠炎沙门菌,其中5份来自食物样本,3份来自厨具涂抹样本,2份来自于患者粪便。所有菌株经过聚类分析同源性为100%,且耐药谱相同。结论本次食源性疾病暴发事件是由于肠炎沙门菌引起的。与VITEK 2相比,MALDI-TOFMS检测速度更快,而且可以直接鉴定显色培养基上的沙门菌分离株。从溯源结果显示肠炎沙门菌来自同一克隆群。 展开更多

关键词 食源性疾病暴发 肠炎沙门菌 基质辅助激光解析飞行时间质谱 脉冲场凝胶电泳 溯源 抗生素敏感性试验

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正常与重金属铅注射的兔脑蛋白质双向电泳图谱比较与鉴定 被引量：4

9

作者 赵锐 纪建国 +4 位作者 郝守进 陈倩 袁洪生 管华诗 茹炳根 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2001年第6期874-879,共6页

重金属污染对人类健康的威胁日益受到关注 ,为了了解大量重金属摄入对脑蛋白质的影响 ,对比研究了正常兔脑组织蛋白质与重金属铅腹腔注射 2周后的兔脑组织在蛋白质双向电泳图谱中的差异 ,分析重金属注射对脑蛋白质表达的可能影响 .通过... 重金属污染对人类健康的威胁日益受到关注 ,为了了解大量重金属摄入对脑蛋白质的影响 ,对比研究了正常兔脑组织蛋白质与重金属铅腹腔注射 2周后的兔脑组织在蛋白质双向电泳图谱中的差异 ,分析重金属注射对脑蛋白质表达的可能影响 .通过对脑组织蛋白质的提取 ,分离出水溶性的蛋白质组分 ,经双向电泳图谱比较正常与注射重金属铅的兔子在脑蛋白质表达上的差异 ,其中 3个蛋白质斑点经提取 ,反相高效液相色谱 (RP HPLC)分离 ,基质辅助激光解析电离质谱 (MALDI TOFMS)确定了分子质量 ,并利用肽质量指纹图谱检索数据库确定蛋白质的归属 . 展开更多

关键词 蛋白质组学 双向电泳 基质辅助激光解析电离质谱 电喷雾质谱 脑蛋白 图谱比较

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氧化硅介孔材料在基质辅助激光解析飞行时间质谱分析有机小分子中的应用 被引量：7

10

作者 董美花 孙士美 金彪 《分析化学》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2014年第9期1235-1239,共5页

研究了表面修饰的无机有机复合型介孔材料SBA-15-NA(1,8-Naphthalimide)作为基质在MALDITOF-MS分析中的应用。采用1,8-萘酰亚胺修饰SBA-15,1,8-萘二甲酸酐先与3-三甲氧基硅基-1-丙胺反应,得到的产物再修饰到SBA-15,得到SBA-15-NA,应用... 研究了表面修饰的无机有机复合型介孔材料SBA-15-NA(1,8-Naphthalimide)作为基质在MALDITOF-MS分析中的应用。采用1,8-萘酰亚胺修饰SBA-15,1,8-萘二甲酸酐先与3-三甲氧基硅基-1-丙胺反应,得到的产物再修饰到SBA-15,得到SBA-15-NA,应用修饰后的介孔材料SBA-15-NA为基质获得了具有背景离子干扰少、离子化效率高、更高的峰值强度等优点的谱图。甲醇作为溶剂,分析物和基质的浓度比例为1∶10,采用以样品和基质等体积混合均匀点样方法,对低糖类、氨基酸类、植物激素生物代谢物和药物等不同结构的小分子化合物(分子量小于500)进行了MALDI-TOF-MS分析。在此优化的条件下得到了低检出限1×10-9g/L(亮氨酸,信噪比为5)和高重现性(≤30%)。采用衍生化的复合型介孔材料直接测定了实际尿样。 展开更多

关键词 介孔材料 有机小分子 基质辅助激光解析飞行时间质谱

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基于MALDI-TOF MS的弧菌识别能力分析 被引量：7

11

作者 张慧芳 李莉 +2 位作者 麻丽丹 张建中 肖迪 《中国病原生物学杂志》 CSCD 北大核心 2016年第6期522-529,534,共9页

目的确定基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)-Biotyper系统对弧菌属细菌的识别能力。方法采用Bruker Microflex LT系统,通过构建30株弧菌的肽质量参考谱库、完善Biotyper数据库;采用77株弧菌对数据库的识别能力进行评价;采用... 目的确定基质辅助激光解析飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)-Biotyper系统对弧菌属细菌的识别能力。方法采用Bruker Microflex LT系统,通过构建30株弧菌的肽质量参考谱库、完善Biotyper数据库;采用77株弧菌对数据库的识别能力进行评价;采用主谱图预测聚类分析揭示其对弧菌属、种水平的区分能力及肽质量谱与菌株毒力的相关性。结果 107株弧菌通过MALDI-TOF MS-Biotyper原数据库系统鉴定,92.5%(99株)为属水平识别,55.1%(59株)为种水平识别。用于外部验证的77株菌搜索Biotyper原数据库和补充完善后的数据库,种水平识别率从53.2%提高至96.1%,提高42.9%;属水平识别率从92.2%提高至100%,提高7.8%;聚类分析显示弧菌属中麦氏弧菌与溶藻弧菌、弗尼斯弧菌肽质量谱特异性差,是造成识别错误的主要因素;聚类信息显示,肽质量谱与霍乱弧菌的产毒性不相关,与副溶血性弧菌毒力不相关。结论 MALDI-TOF MS-Biotyper系统可用于弧菌属、种水平的快速识别。数据库的完善程度是决定种水平识别能力的关键。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析飞行时间质谱 弧菌 识别能力 特异性

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脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证蛋白质组学比较研究 被引量：6

12

作者 王立 梁清华 +4 位作者 陈晓玲 阳历 唐科 刘建军 贝玉章 《湖南中医药大学学报》 CAS 2012年第7期54-57,共4页

目的建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况。方法双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白... 目的建立脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,初步分析其差异蛋白质表达情况。方法双向凝胶电泳(2-DE)分离脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清标本,考马斯亮兰染色,PD-QUEST图像分析系统分析,从凝胶中选取分离较好的蛋白质点,基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)分析获取肽质量指纹图谱(PMF),Mascot软件搜索SWISS-PROT数据库鉴定蛋白质,对差异蛋白质进行组间对比。结果获得了分辨率较好的脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证双向凝胶电泳图谱,质谱分析了29个差异蛋白质点,获取了87张肽质量指纹图谱,通过查询数据库鉴定了29个蛋白质,其中部分蛋白质与肝阳化风证及阴虚风动证发生发展有关。结论建立了脑梗死肝阳化风证与阴虚风动证血清双向凝胶电泳图谱,并应用质谱技术鉴定了部分差异蛋白质点,为脑梗死肝阳上亢证与阴虚风动证与正常组血清双向凝胶电泳图谱血清蛋白质组数据库的建立提供了有意义的数据,并认为蛋白质组学能在脑梗死不同证型具有代表意义。 展开更多

关键词 脑梗死 肝阳化风证 阴虚风动证 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间质谱

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质谱成像技术在药用植物研究中的应用

13

作者 袁俊鹏 马艳 郭庆梅 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第1期56-62,共7页

药用植物中含有种类繁多、数量庞大、功能各异的次生代谢产物,在疾病治疗中发挥了重要作用。传统分析方法只能对药用植物中次生代谢物进行定性和定量研究,对其空间分布研究缺乏直接手段,质谱成像技术的出现为此提供了可能。本文综述了... 药用植物中含有种类繁多、数量庞大、功能各异的次生代谢产物,在疾病治疗中发挥了重要作用。传统分析方法只能对药用植物中次生代谢物进行定性和定量研究,对其空间分布研究缺乏直接手段,质谱成像技术的出现为此提供了可能。本文综述了目前应用于药用植物研究的主要质谱成像技术及其在药用植物次生代谢物、药用植物胁迫防御研究等方面的研究成果,并对其在药用植物研究中的应用前景进行了展望。 展开更多

关键词 质谱成像技术 药用植物 基质辅助激光解析电离质谱 二次离子质谱 解吸电喷雾电离质谱

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高产精氨酸的钝齿棒杆菌在高低供氧条件下的差异蛋白质组学初步研究 被引量：5

14

作者 陶帅 窦文芳 +3 位作者 张晓梅 许泓瑜 饶志明 许正宏 《化工学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2011年第6期1649-1655,共7页

溶氧水平直接影响钝齿棒杆菌合成精氨酸产量的高低,运用双向电泳结合MALDI-TOF-MS及MS/MS质谱鉴定技术的方法对高低供氧条件下高产精氨酸的钝齿棒杆菌的胞内可溶性蛋白进行分离鉴定。结果表明,钝齿棒杆菌菌体蛋白的等电点主要分布在4-7... 溶氧水平直接影响钝齿棒杆菌合成精氨酸产量的高低,运用双向电泳结合MALDI-TOF-MS及MS/MS质谱鉴定技术的方法对高低供氧条件下高产精氨酸的钝齿棒杆菌的胞内可溶性蛋白进行分离鉴定。结果表明,钝齿棒杆菌菌体蛋白的等电点主要分布在4-7的范围内,采用pH4-7的IPG胶条进行分离,得到了645±12个蛋白点。通过软件比对分析发现,在高低两种供氧条件下存在32个显著差异的蛋白点,成功鉴定出了其中的29个蛋白点,代表了27种差异蛋白。采用数据库检索发现这些蛋白参与不同的代谢途径,包括糖类代谢、氨基酸代谢及能量代谢等。其主要集中在HMP途径、TCA循环和尿素循环。分析结果表明,在高供氧条件下能量代谢水平提高,HMP途径的增强可明显缓解高供氧条件下的氧化压力,同时TCA和尿素循环途径活跃有利于精氨酸的合成。 展开更多

关键词 钝齿棒杆菌 供氧差异 蛋白质组 基质辅助激光解析飞行时间质谱

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人宫颈癌组织及癌旁正常组织蛋白质组的比较研究 被引量：4

15

作者 林英姿 陈仁 +3 位作者 杨文 李翠 罗鸣 卢伟英 《第四军医大学学报》 CAS 北大核心 2007年第17期1593-1596,共4页

目的:构建人宫颈癌组织及癌旁组织双向凝胶电泳图谱,筛选差异表达的蛋白质.方法:人宫颈癌组织及癌旁正常组织标本10例,应用固相pH梯度双向凝胶电泳后,Ima-geScanner扫描图像、ImageMaster2-DEElite4.01软件分析识别差异表达的蛋白质;应... 目的:构建人宫颈癌组织及癌旁组织双向凝胶电泳图谱,筛选差异表达的蛋白质.方法:人宫颈癌组织及癌旁正常组织标本10例,应用固相pH梯度双向凝胶电泳后,Ima-geScanner扫描图像、ImageMaster2-DEElite4.01软件分析识别差异表达的蛋白质;应用质谱仪得到相应的肽质指纹图谱,联网ExPASY网站查询相关数据库鉴定获得的差异蛋白质点.结果:癌组织和癌旁正常组织凝胶的平均蛋白质点数分别为1285±85和1063±76,凝胶上蛋白质点位置上有较好的重复性,不同胶间蛋白质点在等电聚焦方向的偏差是(1.78±0.18)mm,在SDS-PAGE方向上的偏差为(1.89±0.21)mm;比较10例宫颈癌组织及癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,未匹配总点数为156±18,对31个差异蛋白质点进行肽质指纹图分析,初步鉴定了8个与肿瘤基因、细胞周期调控、信号转导等有关的蛋白质.结论:建立了分辨率高且重复性较好的人宫颈癌组织与癌旁正常组织的双向凝胶电泳图谱,并成功鉴定出部分与宫颈癌癌变相关的差异表达的蛋白质,为筛选宫颈癌特异性的诊断分子标志物奠定了的基础. 展开更多

关键词 宫颈癌 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析电离质谱 蛋白质组

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MALDI-TOF-MS鉴定生物脱氮细菌的方法研究 被引量：4

16

作者 徐昕荣 朱斌 +2 位作者 马瑜璐 向弘 陈丽凤 《环境科学与技术》 CAS CSCD 北大核心 2010年第10期148-150,161,共4页

采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对生物脱氮废水处理系统中分离得到的两株细菌进行蛋白质质量指纹图谱分析。对供试细菌,比较样品处理方法和基质选择对细菌蛋白质质量指纹图谱的影响,获得优化的实验条件,并对方法... 采用基质辅助激光解吸电离-飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)对生物脱氮废水处理系统中分离得到的两株细菌进行蛋白质质量指纹图谱分析。对供试细菌,比较样品处理方法和基质选择对细菌蛋白质质量指纹图谱的影响,获得优化的实验条件,并对方法的重现性进行了研究。建立了一种快速的细菌蛋白质质量指纹图谱鉴定方法。结果显示:该方法灵敏度高,且分析过程简单快速,具有广泛的开发和应用意义。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离质谱 蛋白质质量指纹图谱 细菌 鉴定

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基质辅助激光解析电离质谱靶上样品前处理方法研究进展 被引量：3

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作者 卫军营 蔡耘 +1 位作者 钱小红 张养军 《质谱学报》 EI CAS CSCD 2007年第2期122-128,共7页

基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品前处理方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品前处理方法与合适的有机基质结合起来,才能成功实... 基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)技术已成为目前蛋白质组学研究中的经典技术。在该技术的成功应用过程中,合适的样品前处理方法起着首要和关键的作用。只有将合适的样品前处理方法与合适的有机基质结合起来,才能成功实现对多肽和蛋白质等生物大分子的准确鉴定。随着质谱分析向高灵敏度、高准确度、高通量的方向发展,出现了许多新的,可直接在MALDI靶上前处理的方法,极大地简化了对生物样本的处理步骤,同时减少了样品的损失。特别是将一些纳米材料用于MALDI靶上进行样品的前处理,为样品前处理方法的研究开辟了广阔的应用前景。 展开更多

关键词 基质辅助激光解析电离质谱 靶上前处理方法

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耐药性细菌碳青霉烯酶检测方法研究进展 被引量：4

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作者 徐建民 陈水平 陈建魁 《标记免疫分析与临床》 CAS 2017年第3期349-355,共7页

耐碳青霉烯类抗生素细菌严重威胁着患者的身体健康和耐药菌感染的治疗和控制。为了有效地预防和治疗由产碳青霉烯酶菌株造成的感染,采取及时有效的检测方法显得尤为重要。国内外学者报道了多种试验方法用来检测产碳青霉烯酶菌株,主要包... 耐碳青霉烯类抗生素细菌严重威胁着患者的身体健康和耐药菌感染的治疗和控制。为了有效地预防和治疗由产碳青霉烯酶菌株造成的感染,采取及时有效的检测方法显得尤为重要。国内外学者报道了多种试验方法用来检测产碳青霉烯酶菌株,主要包括表型检测方法和生物化学检测方法;近年来研制的MALDI-TOF MS技术应用于临床微生物鉴定逐渐显示出其优越性,用于产碳青霉烯酶菌株耐药的检测也有较好的临床应用前景。随着基因测序成本的不断下降,多重实时PCR、第二代测序等方法也逐渐应用于临床实验室。本文就碳青霉烯酶的检测方法研究进展加以综述,以期为医学微生物检验工作者选择检测方法提供参考。 展开更多

关键词 碳青霉烯酶 耐药菌 基质辅助激光解析时间飞行质谱

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颅内动脉瘤患者血清差异表达蛋白质的研究 被引量：4

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作者 翟宝进 刘欣民 +5 位作者 李双英 崔刚 董俊强 常斌鸽 薛德友 焦德让 《中华神经外科杂志》 CSCD 北大核心 2010年第10期891-895,共5页

目的 采用蛋白质组学方法研究散发性颅内动脉瘤和健康成人外周血清蛋白表达差异.方法 对散发性颅内动脉瘤和健康成人的血清样本进行双向凝胶电泳分离,通过对两种蛋白图谱的比较,确定差异表达的蛋白点 而后对差异点进行基质辅助激光解析... 目的 采用蛋白质组学方法研究散发性颅内动脉瘤和健康成人外周血清蛋白表达差异.方法 对散发性颅内动脉瘤和健康成人的血清样本进行双向凝胶电泳分离,通过对两种蛋白图谱的比较,确定差异表达的蛋白点 而后对差异点进行基质辅助激光解析电离飞行时间质谱分析和蛋白数据库信息检索 随机选取2种蛋白进行Western blot法验证蛋白质组学实验结果.结果 在颅内动脉瘤和健康成人中鉴定出14种差异表达蛋白,得到了11个肽质量指纹图谱（peptide mass fingerprinting,PMF）,最终7种蛋白质得到确认.结合珠蛋白、C反应蛋白、B因子、淀粉样血清蛋白A和载脂蛋白E前体在动脉瘤组表达上调 载脂蛋白A-Ⅳ前体和间α胰蛋白酶抑制物H4重链前体表达下调.蛋白印迹实验结果与双向电泳结果一致.结论 成功鉴定出7个与颅内动脉瘤相关的蛋白,为进一步阐明颅内动脉瘤形成的病理生理学机制提供了新的思路. 展开更多

关键词 颅内动脉瘤 蛋白质组学 双向凝胶电泳 基质辅助激光解析飞行时间质谱

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微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的测定方法比较研究 被引量：2

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作者 姜芹 孙冰清 +4 位作者 张妤 吴雨珊 顾欣 张文刚 黄士新 《饲料研究》 CAS 北大核心 2023年第13期122-125,共4页

试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;... 试验旨在建立快速准确测定微生物饲料添加剂中丁酸梭菌的方法,分别对不同计数培养基和菌株鉴定方法进行比较,并开展实际样品测定。结果显示,丁酸梭菌在亚硫酸铁琼脂、TSC琼脂和TSN琼脂中均可生长,但亚硫酸铁琼脂培养基的计数结果最高;微量生化鉴定管、16S rRNA扩增测序、荧光定量PCR及基质辅助激光解析电离质谱(MALDI-TOF MS)均能鉴定丁酸梭菌,但荧光定量PCR方法最快速、准确、适用范围广;2批次市售样品分别含丁酸梭菌9.1×10^(8)、1.2×10^(9)CFU/g,典型菌落荧光定量PCR鉴定结果阳性。研究表明,亚硫酸铁琼脂培养基平板计数法结合荧光定量PCR可对微生物饲料添加剂中的丁酸梭菌进行快速有效的测定。 展开更多

关键词 丁酸梭菌 活菌计数 生化鉴定 荧光定量PCR 基质辅助激光解析电离质谱

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