目的利用双向凝胶电泳/基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(two-dimensional electrophoresis matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,2DE/MALDI-TOF-MS)技术,筛选、鉴定腐蹄病奶牛血浆差异表...目的利用双向凝胶电泳/基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(two-dimensional electrophoresis matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,2DE/MALDI-TOF-MS)技术,筛选、鉴定腐蹄病奶牛血浆差异表达蛋白,并进行血浆蛋白质组学轮廓分析。方法选取20头腐蹄病奶牛为实验组,20头健康奶牛为对照组,采血,分离血浆,2DE筛选差异表达蛋白点,MALDI-TOF-MS鉴定差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析(GO分析和KEGG pathway数据库)。根据2DE及MALDI-TOF-MS的实验结果,选取纤维蛋白原进行Western blot验证试验。结果患腐蹄病奶牛血浆中共筛选出63个差异蛋白点,其中表达上调蛋白点14个,表达下调蛋白点49个,选取33个点进行质谱分析,得到26个阳性结果,鉴定为11种蛋白,差异表达蛋白多与炎症反应过程相关。Western blot对差异表达蛋白的验证结果与2DE结果一致。结论奶牛腐蹄病使血浆蛋白的表达发生了变化,机体蛋白质组参与炎症反应、补体通路、凝血过程等多个机体生理和病理过程,为进一步探索奶牛腐蹄病发病机制提供理论依据。展开更多
目的运用蛋白质组学技术筛选能量负平衡卵巢静止奶牛的生物标记物,建立早期诊断标准,并探讨其发病机制。方法应用荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解析离...目的运用蛋白质组学技术筛选能量负平衡卵巢静止奶牛的生物标记物,建立早期诊断标准,并探讨其发病机制。方法应用荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/lonization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS),鉴定能量正平衡发情奶牛和能量负平衡卵巢静止奶牛的差异蛋白质。采用生物信息学、蛋白印迹和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析差异蛋白质,并确定用于早期诊断卵巢静止的生物标志物。结果两组奶牛筛选出12种差异表达蛋白,这些差异蛋白主要参与脂类代谢、维生素代谢、补体凝血级联及过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor-α,PPAR)信号通路,其中α-1-微球蛋白/bikunin前体(alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP)可作为卵巢静止早期诊断的标志物,预警值为4 346.75 ng/L。结论应用蛋白组学筛选出能量负平衡导致奶牛卵巢静止的12种差异表达蛋白,确定了用于早期诊断卵巢静止的生物标志物,为卵巢静止的临床诊断和发病机制奠定了基础。展开更多
文摘目的利用双向凝胶电泳/基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(two-dimensional electrophoresis matrixassisted laser desorption/ionization time of flight mass spectrometry,2DE/MALDI-TOF-MS)技术,筛选、鉴定腐蹄病奶牛血浆差异表达蛋白,并进行血浆蛋白质组学轮廓分析。方法选取20头腐蹄病奶牛为实验组,20头健康奶牛为对照组,采血,分离血浆,2DE筛选差异表达蛋白点,MALDI-TOF-MS鉴定差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析(GO分析和KEGG pathway数据库)。根据2DE及MALDI-TOF-MS的实验结果,选取纤维蛋白原进行Western blot验证试验。结果患腐蹄病奶牛血浆中共筛选出63个差异蛋白点,其中表达上调蛋白点14个,表达下调蛋白点49个,选取33个点进行质谱分析,得到26个阳性结果,鉴定为11种蛋白,差异表达蛋白多与炎症反应过程相关。Western blot对差异表达蛋白的验证结果与2DE结果一致。结论奶牛腐蹄病使血浆蛋白的表达发生了变化,机体蛋白质组参与炎症反应、补体通路、凝血过程等多个机体生理和病理过程,为进一步探索奶牛腐蹄病发病机制提供理论依据。
文摘目的运用蛋白质组学技术筛选能量负平衡卵巢静止奶牛的生物标记物,建立早期诊断标准,并探讨其发病机制。方法应用荧光差异双向凝胶电泳(fluorescence two-dimensional differential gel electrophoresis,2D-DIGE)和基质辅助激光解析离子化飞行时间质谱(matrix-assisted laser desorption/lonization time of flight mass spectrometry,MALDI-TOF-MS),鉴定能量正平衡发情奶牛和能量负平衡卵巢静止奶牛的差异蛋白质。采用生物信息学、蛋白印迹和受试者工作特征(receiver operating characteristic,ROC)曲线分析差异蛋白质,并确定用于早期诊断卵巢静止的生物标志物。结果两组奶牛筛选出12种差异表达蛋白,这些差异蛋白主要参与脂类代谢、维生素代谢、补体凝血级联及过氧化物酶增殖物激活受体(peroxisome proliferator activated receptor-α,PPAR)信号通路,其中α-1-微球蛋白/bikunin前体(alpha-1-microglobulin/bikunin precursor,AMBP)可作为卵巢静止早期诊断的标志物,预警值为4 346.75 ng/L。结论应用蛋白组学筛选出能量负平衡导致奶牛卵巢静止的12种差异表达蛋白,确定了用于早期诊断卵巢静止的生物标志物,为卵巢静止的临床诊断和发病机制奠定了基础。
