幽门螺杆菌vacA基因重组表达的包涵体复性及ELISA方法的建立 被引量：9

1

作者 党双锁 王宏仓 +5 位作者 贾晓黎 袁利超 王宝峰 张欣 张正国 程延安 《世界华人消化杂志》 CAS 北大核心 2005年第20期2500-2503,共4页

目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并... 目的:通过对vacA重组工程菌表达产物包涵体的变性、复性,提高表达产物的生物学活性,建立ELISA方法,讨论VacA抗原规模生产的可行性.方法:利用已经构建的表达VacA抗原的工程菌,用IPTG诱导,表达的包涵体通过系列条件的变性、复性、透析,并经活性鉴定.所制抗原用以包被ELISA板,建立ELISA方法并确定抗原的生物学活性.结果:重组工程菌可表达Mr3300的目的蛋白,表达形式为包涵体,条件优化后的包涵体经SDS-PAGE显示纯度达95%以上,活性经ELISA法测定正常人126例和blot电泳测定结果符合率为97.1%.结论:包涵体变性复性后生物活性大幅度提高,并且具有良好的重复性和稳定性,可作为幽门螺杆菌疫苗制备的候选抗原及临床检测的诸多方法的抗原原料. 展开更多

关键词 幽门螺杆菌 VACA基因 包涵体 变性 复性 ELISA方法 VACA 重复性 基因重组表达 acA抗原

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人生长激素的发展、应用与研究展望 被引量：8

2

作者 卢晨 倪晓燕 +2 位作者 秦建东 王兵 宋礼华 《生物学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2020年第5期103-107,共5页

人生长激素(human growth hormone,hGH)是由脑垂体前叶分泌的一种肽类激素,通过GH-IGF-1轴对人体的生长与代谢起重要的调控作用。1958年Raben最早使用垂体源性生长激素(pit-hGH)治疗垂体功能减退症的患儿并取得良好效果。随着分子生物... 人生长激素(human growth hormone,hGH)是由脑垂体前叶分泌的一种肽类激素,通过GH-IGF-1轴对人体的生长与代谢起重要的调控作用。1958年Raben最早使用垂体源性生长激素(pit-hGH)治疗垂体功能减退症的患儿并取得良好效果。随着分子生物学技术的突破,Goeddel和Seeburg于1979年利用基因重组表达技术成功研制出成本更低安全性更高的重组人生长激素(rhGH)。1985年美国FDA批准了rhGH应用于GHD的患者。如今rhGH的临床应用不仅局限于儿童矮身材的治疗,其在重度烧伤、成人生长激素缺乏症(AGHD)、慢性肾功能不全、辅助生殖、先天性卵巢功能发育不全、呼吸功能衰竭、重症感染以及抗衰老等领域亦有广泛应用。伴随着生长激素生产工艺和制剂剂型的改进以及其作用机制进一步的揭示,该药物有望为人类带来更大福音。 展开更多

关键词 人生长激素 基因重组表达 儿童矮身材 成人生长激素缺乏 重度烧伤

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新城疫病毒F蛋白碱裂解位点修饰及外源基因的插入对新城疫LaSota疫苗株致病力的影响 被引量：6

3

作者 王永 葛金英 +2 位作者 解希帝 丁玉林 步志高 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期362-368,共7页

新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗... 新城疫是危害养禽业发展的重要传染病。新城疫病毒(NDV)具有高度传染性和高致病性,融合蛋白(F)的F1/F2裂解位点存在多个碱性氨基酸并由此形成的泛组织嗜性一直以来被认为是NDV致病的主要决定因素。本研究利用已经构建NDV弱毒LaSota疫苗株反向遗传操作平台,将LaSota病毒F蛋白的碱裂解位点由GGRQGR↓L分别突变为GRRQRR↓F和GRRQRR↓L,在未加入TPCK胰酶的情况下分别成功拯救出突变修饰LaSota疫苗病毒株rL-FmF和rL-FmL,通过测定鸡胚平均致死时间(MDT)、脑内致病指数(ICPI)和静脉内致病指数(IVPI)等指标对其毒力进行评估,结果rL-FmF和rL-FmL的ICPI值由LaSota的0.36分别上升为1.18和1.05,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0,表明碱裂解位点的突变可显著增强致病力。为了检测外源基因插入对病毒致病力的影响,进一步以rL-FmF为载体,分别构建并拯救出表达H5亚型禽流感病毒血凝素HA和增强绿色荧光蛋白EGFP基因的重组病毒rL-FmF-HA和rL-FmF-EGFP,经测定ICPI分别为0.67和1.10,但MDT均大于90小时,IVPI仍然均为0。结果表明,对rLaSota病毒F蛋白裂解位点2个非碱性氨基酸突变为碱性氨基酸,无论F2蛋白氨基端为F或L,均可显著增强其脑内接种致病力,接近中发型毒株标准,但对静脉内接种致病能力均无显著影响,而对鸡胚致死能力均保持rLaSota病毒缓发型特点(MDT≥90);外源基因的重组、表达可不同程度致弱病毒,其致弱程度与外源基因及其表达产物性质有关。结果提示,影响NDV致病力不仅仅局限于F蛋白裂解位点氨基酸序列;通过F裂解位点修饰及HA基因插入可以获得致病力较高但基本接近缓发型标准的重组病毒。 展开更多

关键词 新城疫病毒 裂解位点 突变修饰 基因重组表达 致病力

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拟南芥硫酯酶基因在毕赤酵母中的表达 被引量：6

4

作者 郝昭程 王腾飞 +3 位作者 李忠奎 郝梓凯 戴琨 王瑞明 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第1期115-122,共8页

硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat... 硫酯酶在生物体内能催化水解脂酰酰基载体蛋白和饱和脂肪脂酰链,对中链脂肪酸(Medium chain fatty acids,MCFAs)的积累起着关键作用。为获得具有生产中链脂肪酸能力的工程菌,以拟南芥c DNA为模板,PCR扩增得到其脂酰-ACP硫酯酶基因At Fat A,经Eco RⅠ/XbaⅠ双酶切后连接至同样双酶切的质粒中,获得重组质粒p PICZαA-At Fat。将重组质粒电击转入毕赤酵母GS115中,通过Zeocin抗性筛选,挑选出阳性克隆子并摇瓶发酵诱导,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析获得明显目的蛋白条带,首次成功构建At Fat A的真菌表达系统。气质联用法检测发酵产物胞外游离脂肪酸,发现毕赤酵母At Fat A重组菌株比起始GS115菌株胞外游离MCFAs(主要是辛酸)产量增加51%,MCFAs产量占胞外总脂肪酸产量的28.7%,而野生菌中这一比例仅有18.1%,这为日后生产安全无毒害的MCFAs探索了一条新的途径。 展开更多

关键词 拟南芥 脂酰-ACP硫酯酶 毕赤酵母 基因重组表达 游离中链脂肪酸 胞外

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恶性疟原虫杂合抗原基因的表达及其产物免疫功能的研究 被引量：4

5

作者 王昌才 钟雄林 +4 位作者 陈仕荣 胡亚芳 马维芳 王启松 闵永洁 《上海免疫学杂志》 CSCD 北大核心 1997年第3期139-143,共5页

化学合成的人恶性疟原虫杂合多肽抗原 AB 基因,编码子孢子 CSP重复序列 NANP、CSPTh2R和红内期spf35.1、spf83.1、spf55.1、spf83.18、pf155/RESA-5’端重复区共7个不同免疫功能表位,与大肠杆菌质粒pWR450-1重组,构建成pWR450-1/AB表达... 化学合成的人恶性疟原虫杂合多肽抗原 AB 基因,编码子孢子 CSP重复序列 NANP、CSPTh2R和红内期spf35.1、spf83.1、spf55.1、spf83.18、pf155/RESA-5’端重复区共7个不同免疫功能表位,与大肠杆菌质粒pWR450-1重组,构建成pWR450-1/AB表达载体。在乳糖操纵子调控下以β-半乳糖苷酶-恶性疟原虫杂合多肽抗原融合蛋白形式,在大肠杆菌中高效表达。表达产物经SDS-PAGE电泳分离纯化后,加福氏佐剂免疫家兔,诱导产生较高滴度的抗血清。抗血清对人恶性疟原虫体外生长有明显的抑制作用,24h抑制率为65.92％;72h的抑制率为72.63％。对照血清无抑制作用。分离纯化的表达产物能与鼠抗恶性疟原虫和疟疾患者抗血清起免疫反应。这些结果表明合成基因的表达产物具有较好的免疫原性。 展开更多

关键词 恶性疟原虫 基因重组表达 抗原

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人GDNF在原代培养的大鼠成纤维细胞中的表达 被引量：3

6

作者 段德义 杨慧 +4 位作者 赵春礼 于凤山 李淑婷 鲁强 徐群渊 《解剖学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期101-104,T003,共5页

目的　研究人脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其前体蛋白 c DNA序列 ,并用于真核细胞表达。　方法　提取我国自建的脑胶质瘤 BT32 5细胞总 RNA,用逆转录 PCR法扩增 GDNF全长 c DNA并构建其真核表达... 目的　研究人脑胶质细胞源性神经营养因子 (GDNF)在治疗神经系统疾病中的作用 ,克隆其前体蛋白 c DNA序列 ,并用于真核细胞表达。　方法　提取我国自建的脑胶质瘤 BT32 5细胞总 RNA,用逆转录 PCR法扩增 GDNF全长 c DNA并构建其真核表达载体 p CI- neo- GDNF,然后转染原代培养的成纤维细胞 ,免疫组织化学及原位杂交检测 GDNF在细胞中的表达。　结果　从国人脑胶质瘤细胞中扩增到 5 5 8bp的 GDNF全长 c DNA,并在GDNF转基因原代成纤维细胞中检测到重组 GDNF的转录和表达。　结论　克隆到的 GDNF全长 c DNA片段 ,可用于真核细胞表达 ;其转基因细胞脑内移植后应能治疗包括帕金森病在内的神经系统变性疾病。 展开更多

关键词 胶质细胞源性神经营养因子 GDNF 逆转录-聚合酶链反应 RT-PCR 基因重组表达 大鼠

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水蛭肽研究应用进展 被引量：2

7

作者 李珊 盖鲁粤 《中国介入心脏病学杂志》 2006年第5期313-314,共2页

关键词 水蛭肽 直接凝血酶抑制剂 基因重组表达 唾液腺分泌 水蛭素 中药水蛭 活血化淤 化学合成

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钩端螺旋体外膜蛋白LipL45相关基因的保守性分析及在诊断中的初步应用 被引量：2

8

作者 张湘燕 于洋 +5 位作者 王亚琳 何平 胡宝瑜 聂一新 蒋秀高 郭晓奎 《中华实用诊断与治疗杂志》 2009年第1期6-9,共4页

目的:分析外膜蛋白LipL45在不同致病性钩端螺旋体中的同源性,初步探讨其在钩端螺旋体病诊断中的应用价值。方法:克隆表达外膜蛋白LipL45相关基因,用酶联免疫吸附试验和显微凝集试验分别测定其抗血清效价和抗体活性。以15株不同致病性钩... 目的:分析外膜蛋白LipL45在不同致病性钩端螺旋体中的同源性,初步探讨其在钩端螺旋体病诊断中的应用价值。方法:克隆表达外膜蛋白LipL45相关基因,用酶联免疫吸附试验和显微凝集试验分别测定其抗血清效价和抗体活性。以15株不同致病性钩端螺旋体的基因组DNA为模板PCR扩增此外膜蛋白基因序列,通过测序进行同源性分析。表达产物作为包被抗原与部分钩端螺旋体患者血清反应,评估其作为诊断抗原的可行性。结果:免疫印迹法结果显示,抗血清能识别大多数致病性钩端螺旋体菌体蛋白,显微凝集试验结果也显示此外膜蛋白抗血清与大多数致病性钩端螺旋体凝集反应呈阳性。用重组LipL45蛋白包被96孔板作酶联免疫吸附试验检测显示,此蛋白抗原与22名感染者血清呈现不同水平的免疫阳性反应,而与10份正常人血清呈阴性反应(P<0.01)。核酸序列分析显示,LipL45相关基因在致病性钩端螺旋体L. interrogans中比较保守,在另2种致病性钩端螺旋体L. borgpetersenii和L.weilii中不存在或同源性较低。而在非致病性腐生型钩端螺旋体中未得到相应PCR扩增产物。结论:钩端螺旋体外膜蛋白LipL45相关基因作为问号钩端螺旋体的保守基因可用于钩端螺旋体的基因分型,其重组表达产物在钩端螺旋体诊断及疫苗研究中具有一定的应用前景。 展开更多

关键词 钩端螺旋体外膜蛋白 基因重组表达 保守性分析 基因分型 诊断

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棉铃虫组织蛋白酶B在杆状病毒表达系统中的表达及鉴定 被引量：1

9

作者 邵红莲 赵小凡 +4 位作者 董杜鹃 扈进冬 邵丁丁 杨晓梅 王金星 《山东大学学报（理学版）》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期107-111,116,共6页

以棉铃虫(helicoverpa armigera)组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bad、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4 d的上清液,提取芽生病毒... 以棉铃虫(helicoverpa armigera)组织蛋白酶B作外源基因重组构建克隆载体,自重组菌株HCB-DH10Bad、Histag-HCB-DH10Bac中提取穿梭质粒,脂质体法转染草地贪夜蛾卵巢细胞系Sf21细胞,转染液再感染细胞,收集感染3～4 d的上清液,提取芽生病毒的DNA,PCR法鉴定外源HCB基因,感染上清进行SDS-PAGE、Western-blotting、蛋白酶活性检测.结果:感染上清中的芽生病毒的DNA作模板扩增出预期的1 700bp片段,SDS-PAGE、Western-blotting检测均在28ku处有明显表达产物,且表达产物有蛋白水解活性. 展开更多

关键词 棉铃虫 组织蛋白酶B 杆状病毒-昆虫细胞表达系统 转染 基因重组表达

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基因重组表达戊型肝炎病毒的研究进展

10

作者 王淑颖 阮冰 《肝脏》 2001年第2期132-133,共2页

关键词 戊型肝炎病毒 基因重组表达 昆虫肝状病毒表达系统 原核细胞表达系统 哺乳动物表达系统

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基于重组毕赤酵母的2-癸烯酸生物合成研究 被引量：1

11

作者 张丽华 张子洋 +6 位作者 王子睿 姜彦君 苏静 李丕武 范翰 王瑞明 汪俊卿 《齐鲁工业大学学报》 CAS 2021年第3期1-6,共6页

2-癸烯酸是一种具有2位不饱和键的中链脂肪酸,是合成功能化合物10-羟基-2-癸烯酸的重要前体物质。本研究首先将硫脂酶基因YdiI和脂肪酸CoA脱氢酶基因FadA分别连接至具有pGAP启动子的pGAPZαA载体上,并电转化至毕赤酵母GS115感受态中,经... 2-癸烯酸是一种具有2位不饱和键的中链脂肪酸,是合成功能化合物10-羟基-2-癸烯酸的重要前体物质。本研究首先将硫脂酶基因YdiI和脂肪酸CoA脱氢酶基因FadA分别连接至具有pGAP启动子的pGAPZαA载体上,并电转化至毕赤酵母GS115感受态中,经过Zeocin抗性筛选及基因组PCR鉴定后,成功获得重组载体同源重组至毕赤酵母GS115基因组上的阳性重组子。采用气相色谱-质谱联用方法对发酵产物进行检测,结果发现培养12 h后发酵产物中有2-癸烯酸出现,在发酵24 h产量可达33.7 mg/L,这表明YdiI和FadA基因已成功转入毕赤酵母GS115中。本研究成功构建了能够合成2-癸烯酸的重组毕赤酵母GS115工程菌,为下一步利用毕赤酵母进一步合成10-羟基-2-癸烯酸打下基础。 展开更多

关键词 2-癸烯酸 毕赤酵母GS115 YdiI FadA 基因重组表达

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人补体调节蛋白DAF、MCP在哺乳动物细胞中的共表达及协同作用研究 被引量：3

12

作者 徐莉 赵舟宙 +2 位作者 刘辉 蒋达和 李文鑫 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第2期220-225,共6页

利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异... 利用双启动子构建含人补体调节蛋白DAF和MCP cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-DAFMCP-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP转化细胞。PCR实验结果显示人补体调节蛋白基因DAF和MCP整合在转化的异源细胞的染色体上。RT-PCR和Western blot印迹实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人补体调节蛋白分子DAF和MCP在细胞系中皆获得同步表达。检测连续传代30次的NIH3T3 pcDNA3-DAFMCP-DP结果表明人DAF和MCP基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体依赖的细胞毒反应表明,pcDNA3-DAFMCP-DP转染细胞系由于DAF和MCP的共表达获得较DAF或MCP单一表达时更强的保护能力,能更好地抑制人补体依赖的细胞毒作用的发生,保护宿主细胞免受人补体的攻击。以上结果表明,DAF和MCP双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,为获得表达多种人补体调节蛋白的理想供体提供了有效策略。而且共表达的DAF和MCP具有协同效应,能更有效地阻止补体激活造成的细胞损伤,在克服超急性排斥反应的基因治疗中具有潜在的临床应用价值。 展开更多

关键词 人补体调节蛋白 双基因重组表达载体 共表达 协同作用 超急性排斥反应

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人补体调节蛋白MCP、CD59共表达体系的构建及其功能研究 被引量：1

13

作者 徐莉 赵舟宙 +1 位作者 刘辉 李文鑫 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第9期8-13,共6页

利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞。PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色... 利用双启动子构建含人补体调节蛋白MCP和CD59 cDNA的双顺反子重组表达载体pcDNA3-MCPCD59-DP,以磷酸钙沉淀法转染NIH3T3细胞,用G418筛选获得NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP转化细胞。PCR实验结果显示人MCP和CD59整合在转化的NIH3T3细胞的染色体上,RT-PCR和Western blot实验分别从RNA水平和蛋白质水平证实了人MCP和CD59在转化细胞中的共表达。检测连续传代30次的NIH3T3pcDNA3-MCPCD59-DP结果表明人MCP和CD59基因仍稳定整合在细胞基因组中,并未随着传代而丢失,为稳定的转双基因细胞系。补体溶破实验表明,pcDNA3-MCPCD59-DP转染细胞由于人MCP和CD59的共表达获得了较MCP或CD59单一表达时更好的保护功效,能有效地保护NIH3T3细胞免受人补体的攻击,从而抑制补体依赖的细胞毒反应的发生。以上结果表明所构建的双基因重组表达载体实现了人补体调节蛋白基因高效转移和高水平共表达,在克服超急性排斥反应的基因治疗中有潜在的应用价值。 展开更多

关键词 人补体调节蛋白 双基因重组表达载体 共表达 超急性排斥反应

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青霉纤维素酶基因的表达调控与重组表达研究进展

14

作者 冯家勋 赵帅 《广西科学》 CAS 2015年第1期9-19,26,共12页

青霉属菌株可以分泌完整的纤维素酶系,尤其高产β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL,EC 3.2.1.21),弥补了工业菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)胞外β?葡萄糖苷酶活性低的不足,加上青霉菌株生长速度快等优点,使其产纤维素酶受到越来越多... 青霉属菌株可以分泌完整的纤维素酶系,尤其高产β-葡萄糖苷酶(β-glucosidase,BGL,EC 3.2.1.21),弥补了工业菌株里氏木霉(Trichoderma reesei)胞外β?葡萄糖苷酶活性低的不足,加上青霉菌株生长速度快等优点,使其产纤维素酶受到越来越多的关注。为了解决以木质纤维素为原料工业生产燃料乙醇所需纤维素酶量大、成本高等难题,深入研究青霉属纤维素酶基因的表达调控和重组表达非常重要。本文就青霉属纤维素酶基因资源、纤维素酶合成调控网络以及纤维素酶基因的重组表达等进行综述与展望。 展开更多

关键词 青霉 纤维素酶基因资源 纤维素酶合成调控网络 纤维酶基因重组表达

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人源细胞色素C在大肠杆菌中的重组表达和分离纯化 被引量：2

15

作者 蔡华伟 万琳 +2 位作者 杨浩 陈利弘 卢晓风 《生物医学工程学杂志》 EI CAS CSCD 北大核心 2007年第3期620-625,共6页

细胞色素C在电子传递、缺氧应激和细胞凋亡的过程中起重要作用。通过人源细胞色素C和酵母细胞色素C亚铁血红素裂解酶共表达,从大肠杆菌中获得了可溶性的重组人源细胞色素C蛋白。细菌经过超声破碎后,获得的上清经350g/L硫酸铵沉淀去除杂... 细胞色素C在电子传递、缺氧应激和细胞凋亡的过程中起重要作用。通过人源细胞色素C和酵母细胞色素C亚铁血红素裂解酶共表达,从大肠杆菌中获得了可溶性的重组人源细胞色素C蛋白。细菌经过超声破碎后,获得的上清经350g/L硫酸铵沉淀去除杂蛋白,再经过两次SP-Sepharose Fast Flow阳离子交换层析,获得了纯度大约为80%的人源细胞色素C。每升菌可产出10mg以上重组细胞色素C。人源细胞色素C的重组表达和纯化有助于细胞色素C功能的深入研究和应用。 展开更多

关键词 细胞色素C 大肠杆菌 基因重组和表达 蛋白分离纯化

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粘质沙雷氏菌马来酸顺反异构酶表达纯化及酶学性质 被引量：3

16

作者 王亚 崔文璟 +2 位作者 周丽 刘中美 周哲敏 《食品与生物技术学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第11期1204-1209,共6页

从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)中扩增得到马来酸顺反异构酶基因。将该基因连接到p ET24a载体上,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现了成功表达。酶学性质研究表明,重组酶的比酶活力为48.01 U/mg。其最适温度为37℃,最适p H为... 从粘质沙雷氏菌(Serratia marcescens)中扩增得到马来酸顺反异构酶基因。将该基因连接到p ET24a载体上,并在Escherichia coli BL21(DE3)中实现了成功表达。酶学性质研究表明,重组酶的比酶活力为48.01 U/mg。其最适温度为37℃,最适p H为8.4。在最适反应条件下,Km值为4.20 mmol/L,Vmax为1.27 mmol/(L·min),kcat为4.38 s-1,催化效率kcat/Km为1.04 L/(mmol·s)。研究结果进一步显示,马来酸顺反异构酶具备良好的热稳定性(55℃半衰期为1.5 h)及高达99%以上的转化率,为马来酸顺反异构酶的进一步研究和工业应用制备高纯度的富马酸提供了理论基础和支持。 展开更多

关键词 马来酸顺反异构酶 基因重组与表达 酶学性质 酶热稳定性

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人工会成柞蚕杀菌肽D基因的克隆及在大肠杆菌中的表达 被引量：2

17

作者 张卫民 彭朝晖 +2 位作者 冯建钧 吴小兵 黄自然 《生物技术通讯》 CAS 1994年第3期109-111,共3页

以质粒pWR450为载体,克隆了人工合成的柞蚕杀菌肽D基因(122bp),构建的重组子pWR450-Cec转化大肠杆菌JM103、用限制性内切酶酶切鉴定。产物经SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳,结果显示可表达杀菌肽-β-gal融合蛋白。

关键词 基因重组与表达 杀菌肽 融合蛋白

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鼠源原蛋白转化酶2基因的构建及其表达(英文)

18

作者 吴爽 周东 +1 位作者 张娟辉 唐松山 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第8期19-23,共5页

目的:蛋白转化酶PC2在神经内分泌肽的成熟过程中起到了非常重要的作用,为了研究鼠肿瘤膜型中pc2基因对乳腺癌生长转移的影响,重组并构建了鼠源pc2基因。方法:提取大鼠脑垂体总RNA,通过RT-PCR方法克隆并扩增了鼠源pc2的cDNA。将pc2基因的... 目的:蛋白转化酶PC2在神经内分泌肽的成熟过程中起到了非常重要的作用,为了研究鼠肿瘤膜型中pc2基因对乳腺癌生长转移的影响,重组并构建了鼠源pc2基因。方法:提取大鼠脑垂体总RNA,通过RT-PCR方法克隆并扩增了鼠源pc2的cDNA。将pc2基因的cDNA插入pCDNA3.1/Zeo载体构建成pCDNA3.1-pc2重组载体。通过pCDNA3.1-pc2或和它的分子伴侣基因7b2的共表达,pc2基因成功地在乳腺癌4T1细胞株中表达和活化。结论:通过测序、转染、Western blot分析和活性测定等证实pc2被插入载体并在哺乳动物细胞中成功表达。 展开更多

关键词 原蛋白转化酶基因2 基因重组及表达 基因转染

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丙型肝炎病毒基因不同区单片段检测的临床意义

19

作者 丁喜成 吴玉清 +1 位作者 杜滨 孟庆莲 《青岛医药卫生》 2002年第1期58-58,共1页

丙型肝炎病毒是输血后肝炎的主要原因。因此,控制和预防血源性HCV传播的重要措施是使用灵敏度和特异性高的检测试剂,以缩短病毒窗口期,提高检出率。笔者利用基因重组的方法,对丙型肝炎病毒不同区（HCV-C、NS₃、N... 丙型肝炎病毒是输血后肝炎的主要原因。因此,控制和预防血源性HCV传播的重要措施是使用灵敏度和特异性高的检测试剂,以缩短病毒窗口期,提高检出率。笔者利用基因重组的方法,对丙型肝炎病毒不同区（HCV-C、NS₃、NS₄、NS₅）以间接ELISA法在10例健康无偿献血者和10例临床确诊丙肝患者之间分区进行测定,现将结果报告如下。 展开更多

关键词 丙型肝炎 抗HCV—IgG 片段检测 无偿献血者 病毒基因 肝炎病毒 临床意义 基因重组表达 间接ELISA法 阳性率

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应用GPV VP3基因重组原核表达产物建立检测抗体的ELISA方法研究 被引量：16

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作者 布日额 李宝臣 +2 位作者 马波 王君伟 Ulrich Neumann 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第2期199-203,共5页

利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅Ig... 利用鹅细小病毒（GPV）VP3基因的原核表达蛋白作为包被抗原建立了检测GPV抗体的间接ELISA及Dot-ELISA方法。经确定两种方法的抗原包被浓度为125μg／mL，其中间接-ELISA 100μL／孔、Dot-ELISA 5μL／点。间接-ELISA中HRP标记的兔抗鹅IgG的工作浓度是1：200，检测血清的最适稀释度是1：400，阳性判定标准为OD492≥0．20，且P／N≥2．0。用此方法检测弱毒疫苗免疫血清，其抗体滴度在1：400～1：51200。Dot-ELISA的结果与间接-ELISA的结果一致。 展开更多

关键词 鹅细小病毒 VP3基因重组原核表达产物 间接-ELISA Dot—ELISA

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