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根癌农杆菌介导的水稻高效转化系统的建立 被引量:179
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作者 刘巧泉 张景六 +2 位作者 王宗阳 洪孟民 顾铭洪 《植物生理学报(0257-4829)》 CSCD 1998年第3期259-271,共13页
比较了影响根癌农杆菌转化水稻的各种因素后,建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。按该体系,水稻品种中花11号预培养4d的幼胚经农杆菌EHA105/pCAMBIA1301感染后,具有GUS基因瞬间表达的幼胚比例在50%以上,最高可达90%;按... 比较了影响根癌农杆菌转化水稻的各种因素后,建立了农杆菌介导的水稻高效转基因实验体系。按该体系,水稻品种中花11号预培养4d的幼胚经农杆菌EHA105/pCAMBIA1301感染后,具有GUS基因瞬间表达的幼胚比例在50%以上,最高可达90%;按产生潮霉素抗性愈伤和转基因植株的比例计算,转化率分别达到87.6%和64.6%。转基因植株总DNA的Southern杂交分析表明T-DNA上的外源基因已整合进了水稻基因组,且在大多数转基因植株中表现为单拷贝插入;遗传分析证明T1代的表型分离符合孟德尔法则。此转化系统的建立为高效地将有用的外源DNA导入水稻植株奠定了基础。 展开更多
关键词 水稻 根癌农杆菌 基因转化 基因植株 幼胚
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农杆菌介导的植物基因转化研究进展 被引量:64
2
作者 王景雪 孙毅 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第1期7-13,共7页
农杆菌介导的植物基因转化是当今植物基因转化的主要方法之一,因而深受关注。本文从农杆菌介导的基因转化机理,植物对农杆菌侵染的反应,转基因植物的遗传表达,以及农杆菌对单子叶植物的转化等方面论述了该领域的最新研究进展。
关键词 土壤农杆菌 基因转化 遗传表达 植物
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影响农杆菌介导植物基因转化的因素问题 被引量:50
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作者 李洪清 李美茹 《植物生理学通讯》 CSCD 1999年第2期145-151,共7页
简要综述了农杆菌介导的植物基因转化的机理及其特点,着重分析了影响农杆菌介导植物基因转化的各种因素。
关键词 农杆菌 植物基因 基因转化
全文增补中
Transgenic Maize Plants Obtained by Pollen-mediated Transformation 被引量:63
4
作者 王景雪 孙毅 +1 位作者 崔贵梅 胡晶晶 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2001年第3期275-279,共5页
The genetic transformation was achieved by pollen_mediated approach on maize ( Zea mays L.) inbred lines Tai 9101 and Zong 31. Plasmid DNA of pGLⅡ_RC_1 was mixed with fresh pollen of maize inbreds in sucrose ... The genetic transformation was achieved by pollen_mediated approach on maize ( Zea mays L.) inbred lines Tai 9101 and Zong 31. Plasmid DNA of pGLⅡ_RC_1 was mixed with fresh pollen of maize inbreds in sucrose solution. The pollens were treated by ultrasonication and collected, pollinated on silks of maize ears. Transformants were confirmed by dot blot hybridization, PCR amplification and PCR_Southern blot hybridization. The pollen_mediated transformation approach could circumvent the tedious tissue culture procedures like in particle bombardment and Agrobacterium infection, etc. This approach is simple, easy to operate, and could be widely used in practice. 展开更多
关键词 MAIZE pollen mediated genetic transformation
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苜蓿高含硫氨基酸蛋白转基因植株再生 被引量:41
5
作者 吕德扬 范云六 +3 位作者 俞梅敏 唐顺学 侯宁 汪清 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 2000年第4期331-337,共7页
通过农杆菌介导法将高含硫氨基酸蛋白基因转入苜蓿,成功地诱导转基因植株再生。转化植株生长和发育良好。苜蓿子叶外植体是较理想的转化受体。冷凉湿润的环境条件是苜蓿移栽成活率高所必需的。
关键词 苜蓿 HNP 基因转化 植株再生 子叶外植体
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植物组织培养技术的应用以及在培养过程中存在的问题 被引量:65
6
作者 胡彦 赵艳 《陕西师范大学学报(自然科学版)》 CAS CSCD 北大核心 2004年第S1期130-134,共5页
介绍了植物组织培养技术的应用以及在培养过程中遇到的问题并提出解决的方法.植物组织培养技术的应用范围很广,目前主要用在离体无性系快速繁殖与无毒化、植物育种、遗传物质的保存、植物次生代谢物的生产和植物基因转化等方面.
关键词 植物组织培养 次生代谢物 基因转化 褐化
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农杆菌介导单子叶植物基因转化研究进展 被引量:18
7
作者 贺晨霞 夏光敏 《植物学通报》 CSCD 1999年第5期567-573,共7页
农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段, 其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。... 农杆菌介导基因转化系统是双子叶植物基因转化的普通而有效的手段, 其优点倍受重视,近年来又广泛用于曾被认为不在农杆菌宿主范围之内的单子叶植物的基因转化研究,并在很多重要粮食作物上获得成功,例如水稻、玉米、大麦、小麦等。本文就农杆菌转化的优点。 展开更多
关键词 农杆菌 单子叶植物 基因转化 基因植物
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农杆菌介导的木本植物遗传转化 被引量:33
8
作者 王瑶 林木兰 +1 位作者 沈锡辉 柳晟 《生物技术通报》 CAS CSCD 1999年第6期23-27,共5页
 木本植物由于本身的特殊性使其遗传转化较为困难,但根据植物类型及其生长特点,选取不同的受体系统,采用农杆菌介导进行转化,已在多种木本植物上获得成功。本文综述了农杆菌介导的木本植物在转化方法、受体系统和转化机理方面的研...  木本植物由于本身的特殊性使其遗传转化较为困难,但根据植物类型及其生长特点,选取不同的受体系统,采用农杆菌介导进行转化,已在多种木本植物上获得成功。本文综述了农杆菌介导的木本植物在转化方法、受体系统和转化机理方面的研究,对Vir 基因活化、外植体预培养、共培养方法等影响转化的一些因素及存在的问题进行了探讨。 展开更多
关键词 农杆菌 木本植物 基因转化
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甘蓝下胚轴的高效再生和农杆菌介导B.t.基因转化甘蓝 被引量:44
9
作者 卫志明 黄健秋 +5 位作者 徐淑平 薛红卫 钟仲贤 顾桢祥 徐悌惟 李贤 《上海农业学报》 CSCD 1998年第2期11-18,共8页
分别对取材时间和培养基组成进行研究,建立了甘蓝下胚轴外植体的高效再生系统,当选取6~7d苗龄的下胚轴,将其置于MSB+BA2.5mg/L+ZT1mg/L+IBA0.1mg/L的芽分化培养基中,并于培养基中附加AgNO37.5mg/L时,最高的芽分化频率... 分别对取材时间和培养基组成进行研究,建立了甘蓝下胚轴外植体的高效再生系统,当选取6~7d苗龄的下胚轴,将其置于MSB+BA2.5mg/L+ZT1mg/L+IBA0.1mg/L的芽分化培养基中,并于培养基中附加AgNO37.5mg/L时,最高的芽分化频率,“夏光甘蓝”母本“103”可达81.67%,父本“60天早椰菜”可达78.56%。在此基础上,我们对影响转化频率的不同因素,即:抑制农杆菌生长的抗生素种类及其浓度、预培养的有无及感染时的浓度、下胚轴外植体与农杆菌的感染时间和共培养时间、筛选时抗生素的加入时间进行了探讨。共获得100余株卡那霉素抗性植株,全部移栽成活,生长良好。对转基因植株总DNA进行Southernblotting分析,证明nptⅡ基因已整合到甘蓝植株细胞基因组中。 展开更多
关键词 甘蓝 下胚轴 再生 农杆菌介导 基因转化 基因
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雪花莲外源凝集素基因转化番茄 被引量:43
10
作者 吴昌银 叶志彪 +1 位作者 李汉霞 唐克轩 《Acta Botanica Sinica》 CSCD 2000年第7期719-723,共5页
将含有雪花莲外源凝集素基因 (GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)菌株LBA44 0 4中。采用叶盘法转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)栽培品种“C8”、“A3 9”和“A... 将含有雪花莲外源凝集素基因 (GNA)的质粒pRSSGNA1通过冻融法转化到根癌土壤杆菌 (Agrobacteriumtumefaciens (SmithetTownsend)Conn)菌株LBA44 0 4中。采用叶盘法转化番茄 (LycopersiconesculentumMill.)栽培品种“C8”、“A3 9”和“A53 ” ,获得了含GNA基因的 43株转化植株。通过卡那霉素抗性鉴定、NPTⅡ基因PCR和GNA基因Southernblot分析表明 ,GNA基因已整合到番茄的基因组中。初步抗蚜虫 (MyzuspersicaeSulzer)试验证明 ,转基因番茄有一定的抗蚜虫效果。 3株转基因植株的NPTⅡ基因在自交子代中的分离比例符合 3∶1孟德尔遗传规律。 展开更多
关键词 番茄 蚜虫 GAN 抗虫育种 基因转化
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利用转基因技术进行植物遗传改良 被引量:44
11
作者 侯文胜 郭三堆 路明 《生物技术通报》 CAS CSCD 2002年第1期10-15,共6页
生物技术的发展为植物遗传改良开辟了一条新途径 ,论述了转基因技术在植物遗传改良中的应用及其与传统育种方法的关系。
关键词 基因转化 基因植物 植物育种 基因表达 遗传改良
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根癌农杆菌介导半夏凝集素基因pBIXPTA对百合的转化 被引量:43
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作者 唐东芹 钱虹妹 +1 位作者 唐克轩 黄丹枫 《上海交通大学学报(农业科学版)》 2004年第2期135-137,167,共4页
以百合花丝诱导的胚性愈伤组织为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌介导法将pBIXPTA基因导入百合。组织化学法检测转化后共培养3d的组织块,GUS瞬时表达率可达60%,选择培养20d的组织中约有1%检测到GUS基因的稳定表达。菌液浓度OD600值为... 以百合花丝诱导的胚性愈伤组织为基因转化的受体材料,利用根癌农杆菌介导法将pBIXPTA基因导入百合。组织化学法检测转化后共培养3d的组织块,GUS瞬时表达率可达60%,选择培养20d的组织中约有1%检测到GUS基因的稳定表达。菌液浓度OD600值为0.8左右时侵染效果较好,同时于附加100μmol/L的AS可提高转化效率。PCR分子检测转基因植株部分呈现阳性,初步证明外源基因已整合到百合基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导 半夏凝集素基因 pBIXPTA 百合 基因转化 抗虫性
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抗芜菁花叶病毒转基因大白菜的培育 被引量:38
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作者 朱常香 宋云枝 +2 位作者 张松 郭兴启 温孚江 《植物病理学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第3期257-264,共8页
以大白菜栽培品种“福山大包头”的子叶柄为供试材料 ,对影响大白菜植株再生和基因转化频率的因素进行了研究。在此基础上 ,建立了大白菜高效再生体系和有效的基因转化体系 ,并将芜菁花叶病毒的 CP基因 (Tu MV- CP)导入大白菜中 ,获得... 以大白菜栽培品种“福山大包头”的子叶柄为供试材料 ,对影响大白菜植株再生和基因转化频率的因素进行了研究。在此基础上 ,建立了大白菜高效再生体系和有效的基因转化体系 ,并将芜菁花叶病毒的 CP基因 (Tu MV- CP)导入大白菜中 ,获得转化植株。 PCR检测和 Southern杂交分析证明Tu MV- CP基因已整合于大白菜的基因组中 ;Northern杂交分析及 EL ISA检测表明 Tu MV- CP基因在转录和翻译水平上进行了有效表达。转基因植株 T1代的遗传分析表明 ,外源基因在转基因植株后代中遵循 3∶ 1的分离规律。抗病性测定结果显示 ,转基因植株具有明显的抗病毒侵染能力。 展开更多
关键词 大白菜 TuMV-CP基因 根癌 农杆菌 基因转化
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根癌农杆菌介导TA29-Barnase基因转化甘蓝型油菜的研究 被引量:41
14
作者 何业华 熊兴华 +8 位作者 官春云 李栒 林良斌 陈社员 刘忠松 李文彬 钟军 刘春林 周小云 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期615-620,共6页
经比较影响农杆菌介导Barnase嵌合基因转化甘蓝型油菜的各种因素后 ,建立了高效稳定的转基因实验体系。按该体系 ,甘蓝型油菜“湘油 15”子叶柄预培养 2 0h ,OD60 0 为 0 5农杆菌菌液感染后共培养 3d ,在MS +2mg·L-1AgNO3 +4 5mg&... 经比较影响农杆菌介导Barnase嵌合基因转化甘蓝型油菜的各种因素后 ,建立了高效稳定的转基因实验体系。按该体系 ,甘蓝型油菜“湘油 15”子叶柄预培养 2 0h ,OD60 0 为 0 5农杆菌菌液感染后共培养 3d ,在MS +2mg·L-1AgNO3 +4 5mg·L-1BA +10mg·L-1Km +30 0mg·L-1Carb培养基上进行选择 ,转化率为 8 8% ,PCR检测和Southern杂交检测证明外源基因已整合了甘蓝型油菜基因组中。 展开更多
关键词 根癌农杆菌介导 TA29-Barnase基因 基因转化 甘蓝型油菜 雄性不育
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84K杨树耐盐基因转化研究 被引量:38
15
作者 樊军锋 韩一凡 +2 位作者 李玲 彭学贤 李嘉瑞 《西北林学院学报》 CSCD 北大核心 2002年第4期33-37,共5页
在已建立了 84K杨叶片外植体再生系统的基础上 ,利用叶盘法首次开展了 84K杨双价耐盐基因 mtl D/gut D的转化研究 ,经诱导不定芽及诱导生根阶段卡那霉素 (选择性抗生素 )连续筛选 ,获得了 1 6株卡那霉素抗性转化植株。抗性植株经 PCR检... 在已建立了 84K杨叶片外植体再生系统的基础上 ,利用叶盘法首次开展了 84K杨双价耐盐基因 mtl D/gut D的转化研究 ,经诱导不定芽及诱导生根阶段卡那霉素 (选择性抗生素 )连续筛选 ,获得了 1 6株卡那霉素抗性转化植株。抗性植株经 PCR检测 ,有 4株呈阳性。耐盐实验表明 ,3株阳性植株抗 Na Cl能力比对照有不同程度提高。 展开更多
关键词 基因转化 84K 耐盐基因 卡那霉素 叶盘法
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农杆菌介导法获得小麦转基因植株的研究 被引量:37
16
作者 黄益洪 周淼平 +3 位作者 叶兴国 唐克轩 程红梅 陆维忠 《作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第4期510-515,共6页
从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,... 从 gus基因的瞬时表达入手 ,利用不同种类的农杆菌菌株感染小麦不同基因型和同一基因型的不同外植体 ,研究了农杆菌菌系、小麦基因型和外植体对转化效率的影响。从中优选出了对小麦愈伤组织感染力比较强的农杆菌菌系 AGL 0和 MOG10 1,以及高敏感受体基因型 Alondra和扬麦 15 8等。实验结果还表明 ,预培养 10~ 15天的幼胚愈伤组织具有较高的瞬时表达率和再生能力 ,是较好的转化受体。对愈伤组织与农杆菌共培养后的筛选程序进行了摸索 ,获得了 70多个 PPT(Phosphinothricin)抗性植株 ,经 PCR等分子检测分析 ,证明部分植株实现了外源基因的成功转化 ,为进一步的研究工作打下了基础。 展开更多
关键词 农杆菌介导法 小麦 基因植株 基因转化 GUS 瞬时表达 PPT
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影响农杆菌介导的大豆基因转化因素的研究 被引量:35
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作者 赵桂兰 刘艳芝 +3 位作者 李俊波 徐洪志 刘莉 尹爱平 《大豆科学》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期84-88,共5页
通过农杆菌介导法用含NPT -Ⅱ和Barnase基因导入到大豆幼胚 ,大豆子叶节中 ,然后经过含Kan的筛选培养基中连续筛选 ,获得一批Barnase转基因植株。经PCR扩增结果 ,证实此基因已整合到大豆中 ,在当代植株中生物学特性观察。花粉粒不育率在... 通过农杆菌介导法用含NPT -Ⅱ和Barnase基因导入到大豆幼胚 ,大豆子叶节中 ,然后经过含Kan的筛选培养基中连续筛选 ,获得一批Barnase转基因植株。经PCR扩增结果 ,证实此基因已整合到大豆中 ,在当代植株中生物学特性观察。花粉粒不育率在 98%。 展开更多
关键词 大豆 农杆菌介导法 Barnase基因 基因转化 雄性不育 基因 选择压
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黑核桃体细胞胚状体发生及其基因转化系统的建立 被引量:31
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作者 方宏筠 王关林 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第6期406-411,共6页
以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转... 以我国种植的优良品种黑核桃 (JuglansnigiaL .)幼胚和幼叶为外植体诱导出体细胞胚状体 ,通过根癌农杆菌介导将nptⅡ和gus基因导入体细胞胚 ,同时研究了激素、体细胞胚的发育时期及预培养等对转化率的影响 ,建立了黑核桃体细胞胚基因转化系统 ,还分析了体细胞胚胎转化系统的特点和潜力。 展开更多
关键词 黑核桃 体细胞胚 GUS基因 基因转化
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超强表达豇豆胰蛋白酶抑制剂基因(CpTI)转化苹果的研究 被引量:27
19
作者 达克东 崔德才 +3 位作者 张松 金德敏 王斌 束怀瑞 《园艺学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期57-58,I001,共3页
通过农杆菌介导法将超强表达载体PECp中的豇豆胰蛋白酶抑制剂基因CpTI转入了苹果品种‘嘎拉’。
关键词 苹果 CPTI 超强启动子 基因转化
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硝酸银对黄瓜离体子叶培养芽再生的促进效应 被引量:26
20
作者 曹利仙 赵鹂 +1 位作者 唐宇力 朱诚 《甘肃农业大学学报》 CAS CSCD 2001年第2期168-171,共4页
以黄瓜品种“津春4号”无菌苗子叶为材料,研究了AgNO3对离体子叶芽再生频率的促进作用。结果表明,在含KT 2mg/L和NAA 0.1~0.4mg/L的MS培养基中附加AgNO3 2~6mg/L,可显著地提高离体子叶芽再生频率,其中最适培养基为:KT 2mg/L+NAA ... 以黄瓜品种“津春4号”无菌苗子叶为材料,研究了AgNO3对离体子叶芽再生频率的促进作用。结果表明,在含KT 2mg/L和NAA 0.1~0.4mg/L的MS培养基中附加AgNO3 2~6mg/L,可显著地提高离体子叶芽再生频率,其中最适培养基为:KT 2mg/L+NAA 0.3mg/L+AgNO3 2mg/L,芽再生频率达到77.2%。这种促进作用与AgNO3抑制乙烯的形成有关。 展开更多
关键词 黄瓜 子叶 离体培养 芽再生 硝酸银 促进效应 基因转化 受体系统
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