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MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定
1
作者
邱小华
胡金霞
+1 位作者
柯爱武
李羲
《江西医学检验》
2004年第6期495-497,共3页
目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2。方法根据人MeCP2mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态...
目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2。方法根据人MeCP2mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态细胞(E.Coli),使其在大肠杆菌内大量复制,提取质粒,PCR鉴定。结果合成的寡核苷酸序列与要求的序列完全相符,且以正确的方向插入。结论成功构建两个MeCP2特异性SiRNA表达质粒psilence-MeCP2/Ⅰ和psilence-MeCP2/Ⅱ。
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关键词
甲基化CPG结合蛋白2
短发夹核糖核酸
抑癌
基因
基因
表达
沉默
真核细胞
下载PDF
职称材料
siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
2
作者
田生礼
刘桂云
+3 位作者
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1118-1125,共8页
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-M...
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.
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关键词
RNA干涉
多药耐药相关蛋白1
基因
表达
沉默
RNA二级结构
下载PDF
职称材料
维生素对人类基因表达调控的研究
被引量：
2
3
作者
楼秀余
《中国保健营养（下半月）》
2012年第7期2858-2859,共2页
本文综述了维生素对人类基因表达与沉默的调控以及相关代谢机制的初步研究,并介绍了人体摄入维生素A、B、C、D、E等对部分基因表达产生的重要影响。
关键词
维生素
基因
表达
与
沉默
调控
下载PDF
职称材料
干旱胁迫下过表达和沉默Z257 snoRNA基因对水稻耐旱性及表型的影响
4
作者
马廷臣
夏加发
+3 位作者
王元垒
周坤能
云鹏
李泽福
《中国农学通报》
2020年第23期1-5,共5页
研究旨在分析过表达和基因沉默水稻Z257 SnoRNA对水稻耐旱性、农艺性状和品质性状的影响,以转基因品系和野生型对照日本晴为研究材料,通过苗期干旱和抽穗期干旱处理的方法,分析Z257SnoRNA的作用方式。结果表明:过表达Z257 SnoRNA的转基...
研究旨在分析过表达和基因沉默水稻Z257 SnoRNA对水稻耐旱性、农艺性状和品质性状的影响,以转基因品系和野生型对照日本晴为研究材料,通过苗期干旱和抽穗期干旱处理的方法,分析Z257SnoRNA的作用方式。结果表明:过表达Z257 SnoRNA的转基因水稻品系GB日本晴的耐旱性要高于野生型对照日本晴和Z257 SnoRNA沉默的转基因水稻品系CM日本晴,因此Z257 SnoRNA基因应与水稻耐旱性相关;幼苗期干旱胁迫后GB日本晴的根系较野生型日本晴更为强壮,CM日本晴根系最弱;抽穗期干旱胁迫后GB日本晴的农艺性状要好于野生型对照日本晴,CM日本晴农艺性状最劣;GB日本晴较野生型对照日本晴和基因沉默品系CM日本晴有更好的品质,而沉默该基因的品系品质指标受影响最大,品质最劣。Z257 snoRNA与水稻耐旱性高度相关,可以减少干旱胁迫对水稻根系、农艺性状和品质性状的影响,因此该基因可以作为耐旱候选基因使用。
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关键词
干旱胁迫
小核RNA
基因
过
表达
和
沉默
耐旱性
农艺性状和品质性状
下载PDF
职称材料
题名
MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定
1
作者
邱小华
胡金霞
柯爱武
李羲
机构
江西医学院第二附属医院分子中心
出处
《江西医学检验》
2004年第6期495-497,共3页
文摘
目的构建MeCP2特异性SiRNA表达质粒pSilence-MeCP2。方法根据人MeCP2mRNA序列设计作用靶序列,化学合成两条互补的DNA寡核苷酸链,该序列中包含靶序列正义链、反义链,两者间的连接序列及与质粒相匹配的酶切位点序列,连接质粒后转化感受态细胞(E.Coli),使其在大肠杆菌内大量复制,提取质粒,PCR鉴定。结果合成的寡核苷酸序列与要求的序列完全相符,且以正确的方向插入。结论成功构建两个MeCP2特异性SiRNA表达质粒psilence-MeCP2/Ⅰ和psilence-MeCP2/Ⅱ。
关键词
甲基化CPG结合蛋白2
短发夹核糖核酸
抑癌
基因
基因
表达
沉默
真核细胞
Keywords
Methy1-CpG-binding protein2
shRNA
psilence-MeCP2
分类号
R730.3 [医药卫生—肿瘤]
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职称材料
题名
siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
2
作者
田生礼
刘桂云
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
机构
深圳市微生物基因工程重点实验室
中国科学院广州生物医药与健康研究院
深圳华大基因研究院
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第12期1118-1125,共8页
基金
Supported by Fundation of Shenzhen Bureau of Science and Technology(No.20008)~~
文摘
利用pSIREN-RetroQ载体构建了3个沉默多药耐药相关蛋白(MRP1)基因表达质粒pSIREN-siRNAs.并通过限制性内切酶酶切鉴定和DNA测序鉴定,将截断的MRP1和全长MRP1cDNA分别克隆到真核表达载体pEGFP-N2和pcDNA3.1中,产生了pEGFP-MRP1T和pcDNA-MRP1表达质粒.质粒pEGFP-MRP1T分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞沉默MRP1T-GFP靶基因,pSIREN-siRNA1作为阴性对照.荧光显微镜下显示结果表明,与pSIREN-siRNA1相比,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3产生的siRNA能够有效沉默MRP1T-GFP融合蛋白的表达.为了沉默全长MRP1基因的表达,pcDNA-MRP1分别与3个pSIREN-siRNAs共转染HEK293细胞.Western印迹和MTT分析表明,pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能有效抑制190kDMRP1在HEK293细胞中的表达,而pSIREN-siRNA1则不能.pSIREN-siRNA2和pSIREN-siRNA3能逆转MRP1转染HEK293细胞产生的多药耐药性.RNA二级结构预测结果分析表明,siRNA1靶序列mRNA局部自由能热动力参数ΔG低于siRNA2和siRNA3靶序列mRNA局部自由能热动力参数,siRNA1的GC含量和Tm值高于siRNA2和siRNA3.这些数据提示,siRNA和局部靶结构可能影响siRNA对MRP1 mRNA表达的沉默作用.
关键词
RNA干涉
多药耐药相关蛋白1
基因
表达
沉默
RNA二级结构
Keywords
RNA interference
multidrug resistance-associated protein （ MRP1 ）
gene expression silencing
RNA secondry structure
分类号
Q752 [生物学—分子生物学]
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职称材料
题名
维生素对人类基因表达调控的研究
被引量：
2
3
作者
楼秀余
机构
上海舒泽生物科技研究所
出处
《中国保健营养（下半月）》
2012年第7期2858-2859,共2页
文摘
本文综述了维生素对人类基因表达与沉默的调控以及相关代谢机制的初步研究,并介绍了人体摄入维生素A、B、C、D、E等对部分基因表达产生的重要影响。
关键词
维生素
基因
表达
与
沉默
调控
分类号
R151 [医药卫生—营养与食品卫生学]
下载PDF
职称材料
题名
干旱胁迫下过表达和沉默Z257 snoRNA基因对水稻耐旱性及表型的影响
4
作者
马廷臣
夏加发
王元垒
周坤能
云鹏
李泽福
机构
安徽省农业科学院水稻研究所
出处
《中国农学通报》
2020年第23期1-5,共5页
基金
安徽省自然科学基金面上项目“水稻根系Z257snoRNA基因耐旱分子机理”(1608085MC51)。
文摘
研究旨在分析过表达和基因沉默水稻Z257 SnoRNA对水稻耐旱性、农艺性状和品质性状的影响,以转基因品系和野生型对照日本晴为研究材料,通过苗期干旱和抽穗期干旱处理的方法,分析Z257SnoRNA的作用方式。结果表明:过表达Z257 SnoRNA的转基因水稻品系GB日本晴的耐旱性要高于野生型对照日本晴和Z257 SnoRNA沉默的转基因水稻品系CM日本晴,因此Z257 SnoRNA基因应与水稻耐旱性相关;幼苗期干旱胁迫后GB日本晴的根系较野生型日本晴更为强壮,CM日本晴根系最弱;抽穗期干旱胁迫后GB日本晴的农艺性状要好于野生型对照日本晴,CM日本晴农艺性状最劣;GB日本晴较野生型对照日本晴和基因沉默品系CM日本晴有更好的品质,而沉默该基因的品系品质指标受影响最大,品质最劣。Z257 snoRNA与水稻耐旱性高度相关,可以减少干旱胁迫对水稻根系、农艺性状和品质性状的影响,因此该基因可以作为耐旱候选基因使用。
关键词
干旱胁迫
小核RNA
基因
过
表达
和
沉默
耐旱性
农艺性状和品质性状
Keywords
drought stress
SnoRNA
overexpression and silencing of gene
drought tolerance
agronomic traits and quality traits
分类号
S-3 [农业科学]
下载PDF
职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
MeCP2特异性shRNA真核细胞表达质粒的构建与鉴定
邱小华
胡金霞
柯爱武
李羲
《江西医学检验》
2004
0
下载PDF
职称材料
2
siRNA介导多药耐药相关蛋白(MRP的表达沉默(英文)
田生礼
刘桂云
郑硕
梁惠卿
刘士德
张建华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
0
下载PDF
职称材料
3
维生素对人类基因表达调控的研究
楼秀余
《中国保健营养（下半月）》
2012
2
下载PDF
职称材料
4
干旱胁迫下过表达和沉默Z257 snoRNA基因对水稻耐旱性及表型的影响
马廷臣
夏加发
王元垒
周坤能
云鹏
李泽福
《中国农学通报》
2020
0
下载PDF
职称材料
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