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慢性乙型肝炎患者表位特异性CTL定量检测的评价 被引量:3
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作者 张静波 陈思源 +3 位作者 杨志清 李廷荣 陈安 吴玉章 《世界华人消化杂志》 CAS 2004年第5期1069-1072,共4页
目的:评价慢性乙肝患者体内不同表位特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的功能状态. 方法:采用MHC/肽四聚体复合物技术,即tetramer技术, 定量外周血HLA-A2限制性表位即核心抗原core18-27、被膜抗原env 183-191、335-343... 目的:评价慢性乙肝患者体内不同表位特异性细胞毒性T细胞(cytotoxic T lymphocyte,CTL)的功能状态. 方法:采用MHC/肽四聚体复合物技术,即tetramer技术, 定量外周血HLA-A2限制性表位即核心抗原core18-27、被膜抗原env 183-191、335-343、聚合酶抗原pol 575-583 4种表位特异性CTL,通过多元回归分析进行综合评价. 结果:慢性乙肝患者体内存在多克隆CTL反应,core 18- 27为优势性表位.4种表位特异陛CTL的频率与病毒载量无相关性(P>0.05);表位特异性CTL与血清转氨酶水平均无显著相关性(P>0.05). 结论:体内存在的CTL数量并不能代表机体的保护性免疫状态. 展开更多
关键词 慢性乙型肝炎 CTL定量检测 基因表位 血清转氨酶
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多型FMDV VP1表位融合蛋白SLP-MultiVP1的纯化及鉴定 被引量:4
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作者 特尼格尔 赵慧 +3 位作者 小琴 陆继爽 黄天鹏 格日勒图 《中国兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2015年第10期1622-1625,1655,共5页
口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要感染偶蹄兽引起的烈性传染病。本研究对已构建的含有VP1表位肽基因的原核表达载体pGEX-SLP-MultiVP1进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE试验在菌体... 口蹄疫(foot-and-mouth disease,FMD)是由口蹄疫病毒(foot-and-mouth disease virus,FMDV)主要感染偶蹄兽引起的烈性传染病。本研究对已构建的含有VP1表位肽基因的原核表达载体pGEX-SLP-MultiVP1进行IPTG诱导表达,经SDS-PAGE试验在菌体裂解物中证明了80 000融合蛋白的存在。通过Pierce?GST Spin Purification Kit亲和层析和切胶相结合的方法,成功纯化出融合蛋白GST-SLP-MultiVP1,并用Prescission Protease将该融合蛋白中的GST标签切掉,获得大小为54 000的目的蛋白SLP-MultiVP1,并用Western Blot试验证明了该蛋白与牛A、O、AsiaⅠ型疫苗株阳性血清均有特异性的结合。本试验进一步为口蹄疫VP1表位肽的免疫原性研究奠定了基础。 展开更多
关键词 口蹄疫 融合蛋白 纯化 VP1基因表位 鉴定
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伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的克隆与序列测定 被引量:3
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作者 敖敬群 娄高明 +4 位作者 杨林 杜伟贤 龙綮新 王珣章 谢明权 《畜牧兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2002年第5期492-495,共4页
用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到 pMD18-T载体后 ,转化大肠杆菌XL 1-blue菌株。重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较 ,确证含有PRV闽A株 gE基因... 用PCR方法以伪狂犬病病毒闽A株的基因组DNA为模板扩增到了gE基因表位抗原决定域的编码区段。PCR产物连接到 pMD18-T载体后 ,转化大肠杆菌XL 1-blue菌株。重组质粒经测序并与GenBank中已登录的gE基因序列比较 ,确证含有PRV闽A株 gE基因的表位抗原编码区。此区段与PRVRice株相应区段的DNA序列同源性为 97 3% ,氨基酸序列同源性为 94 7%。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因表位抗原编码区 序列测定 PCR扩增 基因克隆
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利用真核表达载体构建表达PRV闽A株gE基因表位抗原编码区片段的重组质粒
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作者 敖敬群 娄高明 +2 位作者 杨林 杜伟贤 王章 《中国预防兽医学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第1期14-16,共3页
根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与两种真核表达载体pPICZaA、pAcGP6 7A的序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这 2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP... 根据伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的序列与两种真核表达载体pPICZaA、pAcGP6 7A的序列与特性分别设计了两对PCR引物。通过PCR方法扩增到了两端具不同酶切位点的gE基因表位抗原编码片段。将这 2个片段分别克隆到pPICZaA与pAcGP6 7A载体 ,转化大肠杆菌TOP 10菌株及XL1_Blue菌株 ,获得了含伪狂犬病病毒闽A株gE基因表位抗原编码区的重组质粒pPICZaA_FS与pAcGP6 7A_FS。序列测定结果显示两个重组质粒中插入片段的大小与方向均正确。 展开更多
关键词 伪狂犬病病毒 gE基因表位抗原编码区 重组质粒
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利用目的基因随机表位库筛选葡激酶抗原决定簇
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作者 王晓文 杨子义 +4 位作者 王金凤 蔡欣 徐滔 邹民吉 王嘉玺 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2004年第11期780-782,共3页
目的 :用目的基因随机表位库方法寻找葡激酶 (straphylokinaseSAK)的显性表位。方法 :①SAK免疫BALB C小鼠 ,免疫亲和层析纯化抗血清后 ,抗SAK抗体用生物素标记 ;②构建SAK随机表位肽库 ,随机挑取 12个独立克隆测序 ,分析库DNA片段的分... 目的 :用目的基因随机表位库方法寻找葡激酶 (straphylokinaseSAK)的显性表位。方法 :①SAK免疫BALB C小鼠 ,免疫亲和层析纯化抗血清后 ,抗SAK抗体用生物素标记 ;②构建SAK随机表位肽库 ,随机挑取 12个独立克隆测序 ,分析库DNA片段的分布和碱基含量情况 ;③以多抗为靶蛋白用克隆原位杂交法筛选肽库 ;④构建SAK的缺失突变体mSAK ,Westernblot分析mSAK的免疫反应性。结果 :①筛选肽库得到一个由 19个氨基酸组成的免疫显性表位区 ,命名为A1区 ;②mSAK不能与抗SAK多抗反应。结论 :用简便、有效的方法筛选得到了SAK的一个表位A1区 ,初步确定A1区是SAK引起免疫反应的重要区域。 展开更多
关键词 葡激酶 表位 目的基因随机表位
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猪巨细胞病毒gB基因优势抗原表位区的原核表达及间接ELISA方法的建立 被引量:1
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作者 刘骁 廖珊 +2 位作者 朱玲 周远成 周璐 《中国兽医科学》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期152-158,共7页
扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接... 扩增了猪巨细胞病毒(PCMV)gB基因的优势抗原表位区,将构建成功的gB基因优势抗原表位区原核表达重组质粒(pET32a-gB)转化入表达菌Rosetta(DE3)中进行表达,以表达的重组蛋白作为包被抗原建立了一种检测PCMV抗体的间接ELISA方法,并对该间接ELISA检测方法进行了优化。结果显示,最佳抗原包被浓度为1.9μg/mL,最佳血清稀释度为1∶160,二抗最佳稀释度为1∶10 000;当样品D450nm≥0.26时判为阳性,当样品D450nm<0.215时判为阴性,介于两者之间时判为可疑。用该间接ELISA方法对138份PCMV阴性血清与240份PCMV阳性血清进行检测的结果显示,它的特异性为97.83%,敏感性为97.9%,变异系数均小于10%。用该ELISA方法和Western-blot对184份临床样品进行检测,结果二者的符合率为92.4%。结果表明,该间接ELISA方法简便快捷,具有良好的特异性、敏感性及重复性,适用于对PCMV抗体的大规模检测。 展开更多
关键词 猪巨细胞病毒 原核表达 gB基因优势抗原表位区蛋白 间接ELISA
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