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细胞钙离子荧光探针研究进展 被引量:1
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作者 黄致远 赵旭鹏 +1 位作者 徐伟刚 张坤 《生命的化学》 CAS 2021年第12期2598-2605,共8页
钙离子(Ca;)广泛参与细胞生理病理反应,其含量和在胞内位置的改变可激发不同效应。因此,快速有效检测胞内Ca;浓度及其分布对于了解其在细胞活动中的作用具有重要意义。荧光探针法由于灵敏度高、使用方便、成本低廉等优点得到广泛应用,... 钙离子(Ca;)广泛参与细胞生理病理反应,其含量和在胞内位置的改变可激发不同效应。因此,快速有效检测胞内Ca;浓度及其分布对于了解其在细胞活动中的作用具有重要意义。荧光探针法由于灵敏度高、使用方便、成本低廉等优点得到广泛应用,但不同类型的探针在准确性、灵敏度和稳定性等方面各有优劣。本文系统总结了现有的Ca;化学荧光探针和基因编码探针,为开展Ca;相关研究时合理选择检测方法提供参考。 展开更多
关键词 荧光探针 钙离子 化学荧光探针 基因编码探针
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两种基因编码的探针特异性检测小鼠脑5-HT信号的比较
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作者 张坤 王建刚 +4 位作者 王静怡 罗静 范蕾 程傲冰 韩燕飞 《现代生物医学进展》 CAS 2022年第14期2601-2606,共6页
目的:五羟色胺(5-HT)对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要。最近新开发的i SeroSnFR和GRAB_(5-HT1.0)两类5-HT荧光探针,具... 目的:五羟色胺(5-HT)对中枢神经系统发挥着重要的调控作用,其功能失调与许多精神类疾病密切相关,因此开发能实时灵敏检测5-HT的工具对研究此类疾病及研发靶向药物至关重要。最近新开发的i SeroSnFR和GRAB_(5-HT1.0)两类5-HT荧光探针,具有细胞特异性、反应灵敏以及高时空分辨率等显著优势,已经成为深入探究5-HT作用机制的有力工具。本研究旨在探究荧光探针i SeroSnFR和GRAB_(5-HT1.0)哪种能更有效地检测5-HT递质释放及动态变化,从而为后续优化5-HT荧光探针和利用这一有力工具解析神经疾病中的递质异常提供新思路。方法:将i SeroSnFR或GRAB_(5-HT1.0)探针的基因序列插入到Sindbis病毒表达载体,然后把病毒分别转染到培养的小鼠离体脑片的海马CA1区,比较两种探针在神经元中的表达差异;并检测其对外源性5-HT药物诱导产生的荧光反应。另外,将上述病毒转染到急性小鼠脑片中缝核(DRN)区,给与电刺激检测两种探针响应内源5-HT释放的荧光信号差异。结果:在转染i SeroSnFR的海马CA1区神经元中均有荧光表达,但细胞边界不清晰;而转染了GRAB_(5-HT1.0)的神经元细胞膜上表达有强烈的绿色荧光信号。用1μM 5-HT处理培养的小鼠脑片海马CA1神经元时,i SeroSnFR探针没有明显的荧光强度变化;而GRAB_(5-HT1.0)探针产生的荧光强度显著增强;用1 m M 5-HT处理时,i SeroSnFR探针产生一定强度的荧光反应,但响应幅度弱于GRAB_(5-HT1.0)探针。另外,利用上述病毒转染急性小鼠脑片DRN区,通过电刺激诱导内源性5-HT释放,发现仅在表达GRAB_(5-HT1.0)探针的DRN神经元中观察到显著增强的荧光反应;而i SeroSnFR探针几乎未产生明显荧光变化。结论:在小鼠脑中,GRAB_(5-HT1.0)荧光探针对外源性及内源性的5-HT的亲和力更高、灵敏度更强。 展开更多
关键词 基因编码探针 GPCR PBPs 5-HT
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基因编码荧光探针的构建与应用
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作者 崔萌萌 王殿冰 张先恩 《中国科学:化学》 CAS CSCD 北大核心 2022年第9期1699-1711,共13页
基因编码荧光探针能够可视化探测活细胞中多种分析物及其相关分子事件,已成为细胞生物学等生命科学研究的强大分子工具.本文介绍了基因编码荧光探针的类型和主要应用场景,归纳了现有探针的优点和存在的问题,并对其未来发展进行了展望.
关键词 基因编码荧光探针 荧光共振能量转移(FRET) 环状排列荧光蛋白(cpFP)
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基于FRET荧光蛋白探针的活体定量分子影像方法探究 被引量:1
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作者 王颖奇 唐吉 +2 位作者 刘晴 白净 刘晓冬 《北京生物医学工程》 2016年第6期566-570,共5页
目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标... 目的荧光共振能量转移(fluorescent resonance energy transfer,FRET)探针由于自身仍存在诸多局限,其在活体成像领域尚未得到广泛应用。本文旨在解决FRET探针在活体定量分子影像应用中所存在的瓶颈问题,即如何利用FRET探针精准计算目标物浓度,以及如何基于FRET探针实现三维成像。方法基于探针和目标物结合时的化学反应平衡关系,提出一种新型分析方法,以精确定量待测物[钙调素(calmodulin,Ca M)]的浓度。同时对于FRET探针的活体分子成像,结合荧光透射成像(3DFMT)方法,建立了可进行三维时空动态FRET检测的平台系统,对FRET探针的测量结果(即待测物浓度)进行实时定量的三维重建。结果准确地定量了待测物Ca M浓度,并得到了高质量的3D-FRET分布影像。结论提出FRET探针在活体成像应用领域两个关键问题的解决方案,为基因编码FRET探针向活体分子影像领域的推广奠定了重要的技术基础。 展开更多
关键词 荧光共振能量转移 基因编码FRET探针 荧光蛋白 荧光断层成像 钙调素
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流式细胞术在检测细胞氧化还原状态荧光蛋白探针中的应用
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作者 田烨 刘奥 +3 位作者 董瑞 祁星 易静 杨洁 《上海交通大学学报(医学版)》 CAS CSCD 北大核心 2018年第1期10-17,共8页
目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用r... 目的·探索流式细胞术检测基因编码的荧光蛋白探针ro GFP2的方法,比较其与经典的激光扫描共聚焦显微镜(laser scanning confocal microscope,LSCM)检测方法的异同,探讨其在检测不同氧化还原状态细胞亚群中的应用价值。方法·用ro GFP2转染He La细胞,经H_2O_2处理后,采用LSCM技术和流式细胞术分别检测ro GFP2,以405 nm/488 nm荧光信号强度比值反映细胞氧化还原状态。转染胰腺癌细胞株Panc-1细胞,应用流式细胞术检测CD44和CD24不同标记细胞亚群的ro GFP2,比较干细胞与其他细胞氧化还原状态的异同。结果·与LSCM技术相比,流式细胞术也可检测H_2O_2引起的ro GFP2变化,且可区分群体中不同的亚群。Panc-1细胞中CD24^+/CD44^+肿瘤干细胞群与非干细胞群相比,ro GFP2比值更低,细胞处于更还原的状态。结论·流式细胞术可用于检测基因编码的氧化还原探针和特异地分析亚群的变化,可能将应用于肿瘤生物学、干细胞生物学等研究中。 展开更多
关键词 流式细胞术 细胞氧化还原状态 基因编码荧光蛋白探针 roGFP2 肿瘤干细胞
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