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题名牛肌肉生长抑制素基因敲除打靶载体的构建
被引量：3
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作者
赵丽华
梁浩
云亭
李荣凤
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机构
内蒙古大学哺乳动物生殖生物学与生物技术教育部重点实验室
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出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第2期359-368,共10页
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基金
国家"863"计划项目(2009AA10Z111)
农业部转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08007-002)
内蒙古自治区自然科学基因资助项目(2009ZD02)
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文摘
【目的】构建两套用于牛肌肉生长抑制素(myostation,MSTN)基因敲除的置换型打靶载体。【方法】设计并合成含有限制性内切酶酶切位点的引物,利用聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)以牛耳皮肤组织基因组DNA为模板分别扩增出两套打靶载体的同源短臂和长臂,再分别插入到两套打靶专用基础载体pMCS-PLP和PⅢ中,构建两套用于牛MSTN基因敲除的置换型打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN。【结果】经过PCR、T载体连接和DNA测序,证实载体pPLP-MSTN包含2.8 kb同源短臂和4.0 kb同源长臂,载体PⅢ-MSTN包含1.3 kb同源短臂和6.8 kb同源长臂;经过限制性内切酶酶切鉴定,证实两套载体的同源臂分别正确插入到基础载体内。【结论】两套牛MSTN基因敲除打靶载体pPLP-MSTN和PⅢ-MSTN构建成功,载体pPLP-MSTN为不含负筛选标记的传统基因敲除打靶载体,载体PⅢ-MSTN为不含负筛选标记的荧光蛋白启动子捕获打靶载体。
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关键词
牛
生长抑制素基因
基因敲除打靶载体
胎儿成纤维细胞
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Keywords
bovine
MSTN gene
knock-out vector
fetal fibroblast
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分类号
Q78
[生物学—分子生物学]
S823
[农业科学—畜牧学]
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