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人肠类器官培养及基因导入体系建立
被引量：
1
1
作者
孙家亮
曾之扬
+2 位作者
李亮
李大力
张学利
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1066-1069,共4页
目的建立体外人肠类器官培养以及基于慢病毒介导的基因高效导人体系。方法（1）将外科手术中回肠或结肠标本取下3～5cm后，将黏膜层与肌层分离开，用预冷的乙二胺四乙酸螯合液消化、分离并收集肠隐窝。用基质胶重悬肠隐窝后接入预热的9...
目的建立体外人肠类器官培养以及基于慢病毒介导的基因高效导人体系。方法（1）将外科手术中回肠或结肠标本取下3～5cm后，将黏膜层与肌层分离开，用预冷的乙二胺四乙酸螯合液消化、分离并收集肠隐窝。用基质胶重悬肠隐窝后接入预热的96孔板，待凝固后冉加人含有生长因子的培养基，每日观察类器官生长情况，每隔2～3d更换培养基，6～7d后传代。（2）包装高滴度带有报告基因一绿色荧光蛋白的慢病毒感染肠类器官，观察类器官中绿色荧光的表达量。结果分离的肠隐窝可在体外培养形成“出芽”球状的微型肠类器官结构，且两组隐窝一类器官的存活效率均大于70％。在小肠类器官中可以表达正常肠上皮组织中吸收细胞相关的蛋白标志物。使用慢病毒载体导入的报告基因可以在类器官中持续稳定地表达。结论这种新型的肠类器官培养模型有利于研究基因在肠稳态维持中的功能。
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关键词
肠类器官
隐窝底部柱状细胞
慢病毒
基斟编辑
基因
导
人
体系
原文传递
题名
人肠类器官培养及基因导入体系建立
被引量：
1
1
作者
孙家亮
曾之扬
李亮
李大力
张学利
机构
锦州医科大学-上海市奉贤区中心医院研究生培养基地普外科
华东师范大学生命科学学院
出处
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第6期1066-1069,共4页
文摘
目的建立体外人肠类器官培养以及基于慢病毒介导的基因高效导人体系。方法（1）将外科手术中回肠或结肠标本取下3～5cm后，将黏膜层与肌层分离开，用预冷的乙二胺四乙酸螯合液消化、分离并收集肠隐窝。用基质胶重悬肠隐窝后接入预热的96孔板，待凝固后冉加人含有生长因子的培养基，每日观察类器官生长情况，每隔2～3d更换培养基，6～7d后传代。（2）包装高滴度带有报告基因一绿色荧光蛋白的慢病毒感染肠类器官，观察类器官中绿色荧光的表达量。结果分离的肠隐窝可在体外培养形成“出芽”球状的微型肠类器官结构，且两组隐窝一类器官的存活效率均大于70％。在小肠类器官中可以表达正常肠上皮组织中吸收细胞相关的蛋白标志物。使用慢病毒载体导入的报告基因可以在类器官中持续稳定地表达。结论这种新型的肠类器官培养模型有利于研究基因在肠稳态维持中的功能。
关键词
肠类器官
隐窝底部柱状细胞
慢病毒
基斟编辑
基因
导
人
体系
Keywords
Intestinal organoid
Crypt base colunmar cells
Lentivirus
Gene - editing
Gene delivery system
分类号
R329 [医药卫生—人体解剖和组织胚胎学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
人肠类器官培养及基因导入体系建立
孙家亮
曾之扬
李亮
李大力
张学利
《中华实验外科杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2018
1
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