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甲型流感病毒核蛋白基因的克隆表达及纯化 被引量：3
1
作者 房师松 程小雯 +3 位作者 刘涛 刘建军 赵树进 周丽 《中华实验和临床病毒学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2005年第2期165-168,共4页
目的　将甲型流感病毒核蛋白(NP)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT PCR扩增NP基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒... 目的　将甲型流感病毒核蛋白(NP)基因克隆到原核表达载体进行可溶性融合表达,制备纯化的病毒核蛋白,为制备甲型流感病毒单克隆抗体提供材料。方法　提取甲型流感病毒RNA ,设计引物,RT PCR扩增NP基因,利用基因工程的手段,将甲型流感病毒的NP基因在大肠埃希菌中进行融合表达,并将表达产物进行亲和层析。结果　成功构建了甲型流感病毒NP基因原核表达载体,经亲和层析制备了较高纯度的目的表达产物。结论　通过合理控制发酵时间、生长温度和诱导物浓度,制备了较为理想的可溶性甲型流感病毒核蛋白。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 核蛋白基因 纯化 表达及 RT-PCR扩增 基因原核表达载体 融合表达 亲和层析 表达产物 单克隆抗体 病毒RNA 大肠埃希菌 基因克隆 设计引物 基因工程 发酵时间 合理控制 可溶性 P基因 制备 高纯度 诱导物
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沙眼衣原体E型MOMP基因原核表达载体的构建和纯化 被引量：4
2
作者 李艳飞 刘原君 +2 位作者 王艳 齐蔓莉 刘全忠 《中华皮肤科杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第5期359-360,共2页
沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）共有19个血清型，其中D～K血清型则可通过性传播，引起人类泌尿生殖道感染，并可引起并发症。沙眼衣原体主要外膜蛋白（MOMP）携带Ct亚型等多种抗原决定簇，是诊断试剂和疫苗开发的基础。本研... 沙眼衣原体（Chlamydia trachomatis，Ct）共有19个血清型，其中D～K血清型则可通过性传播，引起人类泌尿生殖道感染，并可引起并发症。沙眼衣原体主要外膜蛋白（MOMP）携带Ct亚型等多种抗原决定簇，是诊断试剂和疫苗开发的基础。本研究选择MOMP基因作为研究对象，用PCR技术扩增E型沙眼衣原体MOMP基因片段，再将其定位插入到原核表达载体pGEX中，构建重组表达质粒。然后将重组表达质粒转化人大肠杆菌（BL-21）中，并用酶切分析、PCR扩增及部分序列测定等方法对重组质粒进行鉴定。诱导表达，用SDS—PAGE及蛋白印迹进行鉴定，并以亲和层析柱纯化表达产物，为进一步研究该蛋白的生物学特性，了解衣原体的致病机制奠定基础。 展开更多
关键词 基因原核表达载体 沙眼衣原体 MOMP 纯化 E型 重组表达质粒 泌尿生殖道感染 PCR扩增
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结核分枝杆菌esat6基因原核表达载体的构建和表达 被引量：1
3
作者 陈全 骆旭东 +2 位作者 蒋英 江山 朱道银 《重庆医科大学学报》 CAS CSCD 2003年第1期4-7,共4页
目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经... 目的:构建结核分枝杆菌(MTb)esat6基因原核表达载体并进行表达。方法:PCR扩增MTb esat6基因,克隆人pQE30质粒,测序正确后,再亚克隆人pET32a(+)质粒,构建pQE30-ESAT6和pET32a(+)-ESAT6重组体。结果:重组体分别转化DH5a和BL21(DE3)菌后,经IPTG诱导,pQE30-ESAT6未表达目的蛋白,而pET32a(+)-ESAT6表达出19kDa左右重组蛋白。SDS-PAGE分析显示,IPTG诱导4h重组蛋白表达量最高,表达蛋白以可溶性非包涵体形式存在于胞浆中,表达量占全菌蛋白质的42％,用Western blotting证实其有良好的抗原性。经过Ni-NTA柱纯化,获得了纯度为92％的重组蛋白。结论:成功构建原核表达载体pET32a(+)-ESAT6,并获得重组ESAT6蛋白,为MTb重组抗原的应用奠定基础。 展开更多
关键词 结核分枝杆菌 基因原核表达载体 克隆 重组ESAT6蛋白
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人CIDE-3基因原核表达载体的构建及蛋白的初步表达
4
《第四军医大学学报》 北大核心 2006年第15期1390-1390,共1页
目的：构建人CIDE-3基因的原核表达载体，并在E．coli BL21（DE3）中表达．方法：提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA，经RT—PCR扩增人CIDE-3基因片段，并将其克隆入原核表达载体pET28a（＋）中，构建重组质粒pET28a（＋）-CIDE-3... 目的：构建人CIDE-3基因的原核表达载体，并在E．coli BL21（DE3）中表达．方法：提取人肝母细胞瘤细胞系HepG2细胞的总RNA，经RT—PCR扩增人CIDE-3基因片段，并将其克隆入原核表达载体pET28a（＋）中，构建重组质粒pET28a（＋）-CIDE-3.经限制性内切酶Bam H I、Xho I双酶切鉴定及序列测定后，转化E．coli BL21（DE3），经IPTG诱导表达组氨酸融合蛋白． 展开更多
关键词 基因原核表达载体 融合蛋白 BL21(DE3) E.COLI HepG2细胞 初步 限制性内切酶 PCR扩增 总RNA 瘤细胞系
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