种子老化的分子生物学研究 被引量：13

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作者 程航 陈玲玲 +2 位作者 夏方山 闫慧芳 毛培胜 《草业科学》 CAS CSCD 北大核心 2017年第1期129-137,共9页

种子作为最基本的生产资料,是农业生产得以发展的必要条件。老化将导致种子质量下降,最终失去生命力,给生产带来巨大经济损失。因此,研究种子老化机制对寻找应对种子老化的办法具有重要的意义。目前,关于种子老化的研究大多集中在生理... 种子作为最基本的生产资料,是农业生产得以发展的必要条件。老化将导致种子质量下降,最终失去生命力,给生产带来巨大经济损失。因此,研究种子老化机制对寻找应对种子老化的办法具有重要的意义。目前,关于种子老化的研究大多集中在生理生化变化方面,而随着分子生物学技术的飞速发展,合理运用这些技术,必将使从更深层次解释种子老化机制成为可能。本文对近年来种子老化分子生物学方面研究取得的成果进行了综述,发现种子老化后其遗传完整性降低,与能量代谢、信号转导、刺激响应、衰老死亡以及糖酵解途径等相关的基因表达发生变化,一些与脂质过氧化及DNA损伤修复相关的基因功能已得到验证。最后对种子老化机理的研究前景做出展望,指出蛋白和mRNA定位、基因功能研究以及完善信号转导途径的重要性。 展开更多

关键词 种子老化 分子标记 转录组学 蛋白质组学 基因功能验证 活性氧 脂质过氧化

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FLS基因调控玉兰与紫玉兰花色形成的机制研究 被引量：3

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作者 吴超 戴梦怡 +4 位作者 张超 石从广 任明杰 马晶晶 申亚梅 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第10期1947-1956,共10页

黄酮醇合成酶(FLS)是植物黄酮醇合成途径中的关键酶。为探究FLS对玉兰属植物花色形成的影响,以玉兰(Yulania denudata)和紫玉兰(Yulania liliiflora)为研究对象,利用超高效液相色谱技术(UPLC)测定其花开放五个关键时期的花被片黄酮醇含... 黄酮醇合成酶(FLS)是植物黄酮醇合成途径中的关键酶。为探究FLS对玉兰属植物花色形成的影响,以玉兰(Yulania denudata)和紫玉兰(Yulania liliiflora)为研究对象,利用超高效液相色谱技术(UPLC)测定其花开放五个关键时期的花被片黄酮醇含量;基于转录组数据对玉兰和紫玉兰的FLSs基因进行克隆;利用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析玉兰与紫玉兰不同组织和开花五个关键时期的FLSs基因表达量;通过洋葱表皮细胞瞬时转化对FLSs蛋白进行亚细胞定位;通过异源转化烟草进行FLSs基因功能验证,并利用qRT-PCR和UPLC分析转基因烟草花冠中黄酮醇含量差异。结果表明,玉兰花被片黄酮醇含量随花开放呈现先升高后降低的趋势,紫玉兰花被片黄酮醇含量逐渐下降。YdFLS和YlFLS具有序列保守性,在不同组织中均有表达,YdFLS在花中表达量最高,YlFLS在嫩叶中表达量最高;在花开放进程中,YdFLS表达量逐渐升高,至盛开期最高,而YlFLS则表现相反的表达模式。YdFLS与YlFLS都定位于细胞质;YdFLS和YlFLS过表达烟草植株花冠的颜色变浅,黄酮醇含量增加且花青素苷积累被抑制。综上,本研究验证了FLS基因在玉兰属植物花色形成过程中功能保守,发挥促进黄酮醇合成的作用,其转录水平的差异是各色花色形成的主要原因。本研究结果揭示了FLS基因在玉兰属植物花色形成中发挥着重要功能。 展开更多

关键词 玉兰 花色 黄酮醇合成酶基因 基因功能验证

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CRISPR基因编辑技术加速蔬菜作物遗传改良

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作者 任文静 司劲超 +6 位作者 陈立 杨丽梅 庄木 吕红豪 王勇 季家磊 张扬勇 《中国农学通报》 2024年第24期107-115,共9页

现代生物技术,特别是基于CRISPR/Cas系统的基因编辑技术,对作物遗传改良产生了深远影响。本文综合分析了CRISPR/Cas基因编辑系统的组成、机制,综述了基因编辑技术在蔬菜作物基因功能验证和作物遗传改良方面取得的突破性进展,及其在蔬菜... 现代生物技术,特别是基于CRISPR/Cas系统的基因编辑技术,对作物遗传改良产生了深远影响。本文综合分析了CRISPR/Cas基因编辑系统的组成、机制,综述了基因编辑技术在蔬菜作物基因功能验证和作物遗传改良方面取得的突破性进展,及其在蔬菜作物如番茄、西瓜、甘蓝、胡萝卜和黄瓜等中的应用。CRISPR/Cas基因编辑系统是目前应用最广泛的基因编辑系统,为了加深对CRISPR/Cas基因编辑系统的了解、促进其在蔬菜作物改良中的重要作用,本研究探讨了影响遗传转化效率的因素,提出了提高转化效率的策略,讨论了当前技术的局限性,如作物转化再生难度和基因型的依赖性。本文强调,筛选易于遗传转化的品种、开发高效的植物转化和再生系统,以及创造更高效、精确和多功能的基因编辑工具是未来研究的关键方向。 展开更多

关键词 现代育种技术 CRISPR/Cas系统 CRISPR基因编辑 基因编辑效率 基因功能验证 作物遗传改良 蔬菜作物改良 遗传转化效率 生物技术

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板栗花发育B类基因CmPI的克隆及功能分析

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作者 郭晓萌 杨前宇 +5 位作者 程丽莉 胡广隆 刘钊 周广柱 兰彦平 程运河 《果树学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第7期1322-1331,共10页

【目的】PISTILLATA(PI)基因作为控制花器官发育的B类功能基因中的一员,在花器官发育中起到重要的作用。为探究PI基因在板栗花发育中的功能,对板栗花器官B类基因PISTILLATA(PI)进行鉴定和功能分析。【方法】在板栗基因组数据中检索PI同... 【目的】PISTILLATA(PI)基因作为控制花器官发育的B类功能基因中的一员,在花器官发育中起到重要的作用。为探究PI基因在板栗花发育中的功能,对板栗花器官B类基因PISTILLATA(PI)进行鉴定和功能分析。【方法】在板栗基因组数据中检索PI同源基因CmPI,并克隆编码区序列。利用在线工具对CmPI进行生物信息学分析。通过荧光定量PCR分析CmPI在板栗不同组织及不同花发育时期的时空表达模式。构建35S::CmPI-GFP融合载体,瞬时转化烟草叶片,进行基因表达的亚细胞定位分析。将过表达载体35S::CmPI转入野生型拟南芥获得过表达植株,验证CmPI在花发育中的功能。【结果】克隆到的板栗CmPI基因开放阅读框长度630 bp,编码209个氨基酸,有高度保守的MADS域(MADS-box)和K域(K-box),属MADS的Ⅱ型亚家族转录因子,定位于细胞核。CmPI主要在板栗雄花中表达。在拟南芥中过表达CmPI导致萼片转变为花瓣样组织。荧光定量PCR结果表明,CmPI过表达拟南芥中除C类基因AtAG表达量显著高于野生型外,其他A类、B类、E类基因的表达量均低于野生型拟南芥。【结论】鉴定到的MADSbox基因CmPI为板栗花发育B类基因,可导致萼片花瓣化,可能是抑制雌花苞片进一步发育的关键基因。 展开更多

关键词 板栗 花器官 B类基因 基因功能验证 PISTILLATA

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一个类黄酮3'-羟化酶参与多星韭花色素生物合成的功能解析

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作者 孔德静 梁进丽 +4 位作者 宫秋玲 俞沙沙 梁琳 孙威 鞠志刚 《安徽农业大学学报》 CAS CSCD 2024年第4期581-587,共7页

类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信... 类黄酮3'-羟化酶(F3'H)在花色素苷生物合成过程中起关键作用。明确多星韭F3'H在花色素苷生物合成中的功能,将为多星韭花色形成及改良研究提供基因资源。基于转录组数据从多星韭花朵中克隆获得AwF3'H,并对其进行生物信息学分析,利用Real time PCR对AwF3'H1的表达模式进行分析,并利用蘸花法将AwF3'H转入拟南芥中,同时对转基因植株进行表型观察及花色素苷检测分析。结果表明,Aw F3'H的ORF全长为1545 bp,编码514个氨基酸,属于细胞色素P450家族成员,与洋葱AcF3'H的亲缘关系最近;在所检测组织均有表达,但在雄蕊中表达最高,根中表达最低;与野生型拟南芥相比,转AwF3'H拟南芥T2代幼苗子叶及下胚轴颜色明显加深,矢车菊素与天竺葵素类花色苷积累量显著增加。表明AwF3'H具有类黄酮3'-羟化酶的功能。 展开更多

关键词 多星韭 基因功能验证 类黄酮3'-羟化酶 表达分析 花青素

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外源硫诱导苦荞镉胁迫响应的比较转录组学分析 被引量：1

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作者 刘辉 卢扬 +4 位作者 叶夕苗 周帅 李俊 唐健波 陈恩发 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第5期177-191,共15页

Cd(镉)含量超标是影响苦荞(Fagopyrum tararicum)安全生产的主要重金属污染。为揭示外源添加硫(S)对苦荞耐Cd胁迫影响的分子机理,通过比较转录组学分析手段,分析根施100 mg/kg(NH_(4))_(2)SO_(4)(S)处理与5 mg/kg CdCl_(2)(Cd)处理后苦... Cd(镉)含量超标是影响苦荞(Fagopyrum tararicum)安全生产的主要重金属污染。为揭示外源添加硫(S)对苦荞耐Cd胁迫影响的分子机理,通过比较转录组学分析手段,分析根施100 mg/kg(NH_(4))_(2)SO_(4)(S)处理与5 mg/kg CdCl_(2)(Cd)处理后苦荞叶片的差异表达基因及其功能。结果显示,共获得393983500条干净序列,鉴定到19875个基因,其中差异表达基因共有1760个。通过GO注释和KEGG pathway对这些差异表达基因进行分析表明,外源S添加增强谷胱甘肽还原酶途径,抑制氧化还原途径,并诱导水杨酸响应、脱落酸响应以及生长素响应途径应对Cd毒害。转录组数据鉴定到苦荞FtbHLH68受Cd+S处理特异诱导表达,模式植物拟南芥(Arabidopsis thaliana)同源基因突变体Atbhlh68表现出Cd+S处理缺陷表型,且Atbhlh68中叶绿素含量、净光合、GR活性和GSH活性变化均不响应Cd+S处理。研究结果揭示了苦荞响应Cd胁迫转录水平调控过程,阐明外源添加S增强植物抗Cd胁迫的分子机理,为外源S在苦荞抗Cd胁迫中的应用奠定理论基础并提供了作用靶点。 展开更多

关键词 镉胁迫 外源S 苦荞 比较转录组 基因功能验证 氧化还原途径 脱落酸 生长素

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基于TRV病毒的工业大麻(Cannabis sativa L.)VIGS体系的优化

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作者 刘俊飞 杨晓娟 +2 位作者 潘根 郑建树 黄思齐 《中国麻业科学》 2023年第5期197-205,214,共10页

病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术是一种可以通过感染病毒抑制植物内源基因表达的方法,对于验证植物基因的功能非常重要。在工业大麻中,由于其遗传体系尚不稳定,构建和优化工业大麻VIGS体系对于验证部分基因功... 病毒诱导基因沉默(virus-induced gene silencing,VIGS)技术是一种可以通过感染病毒抑制植物内源基因表达的方法,对于验证植物基因的功能非常重要。在工业大麻中,由于其遗传体系尚不稳定,构建和优化工业大麻VIGS体系对于验证部分基因功能具有重要的意义。研究以工业大麻八氢番茄红素脱氢酶基因(phytoene desaturase gene,PDS)作为报告基因,利用烟草脆裂病毒(tobacco rattle virus,TRV)作为载体,注射到工业大麻叶片后观察沉默效果,并对工业大麻VIGS体系进行优化,考察不同侵染方式、侵染的苗龄、目的基因片段、工作液浓度以及农杆菌菌株对沉默效率的影响。结果表明,在1周龄时采用叶背注射法,侵染菌液浓度为OD_(600)=1.0,选择GV3101作为农杆菌菌株,使用PDS片段为960~1259 bp或126~425 bp,侵染后在24℃条件下培养2~3周,可以观察到明显的沉默效果。该结果为进一步研究工业大麻的基因功能及后续的遗传改良和品种改良提供了重要的基础。同时,优化的工业大麻VIGS体系也为其他植物的VIGS研究提供了参考和借鉴。 展开更多

关键词 VIGS 工业大麻 PDS 基因功能验证

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小麦种子萌发基因TaJAZ1的克隆和功能研究

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作者 姚雅鑫 刘函西 +4 位作者 王伟伟 张礼宁 孙风丽 张超 奚亚军 《麦类作物学报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1081-1092,共12页

小麦品种铭贤169是我国黄淮麦区育种研究广泛应用的条锈病诱发材料,但其种子休眠时间过长,不仅影响播种后均匀发芽和生长发育,其收获掉落籽粒也容易导致秋季育种田的生物学混杂。本研究通过筛选其休眠种子与萌发种子的转录组学数据,克... 小麦品种铭贤169是我国黄淮麦区育种研究广泛应用的条锈病诱发材料,但其种子休眠时间过长,不仅影响播种后均匀发芽和生长发育,其收获掉落籽粒也容易导致秋季育种田的生物学混杂。本研究通过筛选其休眠种子与萌发种子的转录组学数据,克隆获得差异表达基因TaJAZ1,并对其生物信息学特性、亚细胞定位、表达模式进行分析,结合解析拟南芥jaz3(与TaJAZ1同源性最高)突变体、TaJAZ1过表达拟南芥和水稻的表型反应。结果表明,TaJAZ1基因编码区全长1230 bp,可编码409个氨基酸,在不同物种间保守性较强,与野生二粒小麦JAZ1基因的亲缘关系最近;启动子区含有脱落酸响应元件ABRE和茉莉酸甲酯响应元件CGTCA-motif和TGACG-motif;该基因定位于细胞核和细胞膜,TaJAZ1基因在种子发育中穗发芽时期表达量达到最高,进入成熟时期表达量显著降低;ABA能诱导TaJAZ1基因的表达,ABA处理下过表达拟南芥的萌发率比野生型和jaz3突变体高,ABA信号通路基因AtABI5的诱导量变低;TaJAZ1过表达水稻的萌发率高于受体水稻,ABA处理后,OsABI5的诱导量也降低。以上结果证明,TaJAZ1基因能促进种子萌发,进一步验证其在ABA信号通路中起负调控作用,为改良铭贤169等强休眠性小麦品种提供参考。 展开更多

关键词 小麦(Triticum aestivum L.) 萌发 TaJAZ1 ABA 基因功能验证

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丛枝菌根真菌异形根孢囊霉14-3-3蛋白基因的克隆及功能验证 被引量：3

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作者 徐丽娇 郝志鹏 +3 位作者 李涛 李芳 李景龙 陈保冬 《东北林业大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第8期63-68,共6页

为证明丛枝菌根(AM)真菌在增强植物抗旱性方面的直接作用,克隆了AM真菌异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis)DAOM 197198中的14-3-3蛋白基因Ri14-3-3;通过设计特异性引物,在AM真菌中扩增到了该基因的全长片段。通过酿酒酵母(Saccharom... 为证明丛枝菌根(AM)真菌在增强植物抗旱性方面的直接作用,克隆了AM真菌异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis)DAOM 197198中的14-3-3蛋白基因Ri14-3-3;通过设计特异性引物,在AM真菌中扩增到了该基因的全长片段。通过酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)177 w异源表达实验验证了Ri14-3-3的功能。结果表明:在正常水分条件和干旱胁迫下,Ri14-3-3均提高了酵母的生长速率和生长量。正常水分条件下,Ri14-3-3上调了钙调蛋白基因(MAC1)、下调了水孔蛋白基因(AQY3)的表达;干旱胁迫下,Ri14-3-3上调了质膜H+-ATP酶基因(PMA1)、水孔蛋白基因(AQY1)、钙调蛋白基因(CMP)的表达。Ri14-3-3基因能够上调酵母质膜H+-ATP酶基因和水孔蛋白基因,说明干旱胁迫下AM真菌14-3-3蛋白可以调控干旱胁迫响应基因,促进真菌向植物运输水分,从而增强植物抗旱性。 展开更多

关键词 丛枝菌根真菌 14-3-3蛋白 抗旱性 基因功能验证 异源表达

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丛枝菌根真菌砷酸盐还原酶基因RiarsC的克隆和功能分析 被引量：3

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作者 李景龙 孙玉青 +3 位作者 陈保冬 李涛 胡亚军 张莘 《生态毒理学报》 CAS CSCD 北大核心 2018年第3期71-77,共7页

丛枝菌根真菌(AMF)在增强植物砷(As)抗性方面发挥着重要作用。已有相关研究表明,接种AMF能提高植物体内三价砷As(III)的比例,AMF可能参与了将五价砷As(V)还原为As(III)的过程从而提高了菌根植物的As抗性,但目前尚缺乏直接分子证据。本... 丛枝菌根真菌(AMF)在增强植物砷(As)抗性方面发挥着重要作用。已有相关研究表明,接种AMF能提高植物体内三价砷As(III)的比例,AMF可能参与了将五价砷As(V)还原为As(III)的过程从而提高了菌根植物的As抗性,但目前尚缺乏直接分子证据。本文从异形根孢囊霉(Rhizophagus irregularis)菌丝中克隆得到了一个砷酸盐还原酶基因RiarsC并进行序列分析。将该基因转入arsC缺陷型大肠杆菌(Escherichia coli)菌株WC3110(ΔarsC)中,通过As(V)抗性生长曲线和As形态测定,分析了该基因的功能。结果显示,RiarsC属于谷氧还蛋白-谷胱甘肽依赖的砷酸盐还原酶家族;RiarsC基因的表达显著提高了As敏感型E.coli菌株对As(V)的抗性,当培养基中As(V)浓度为100μmol·L-1时表现更加明显。As形态分析表明,表达RiarsC的E.coli菌株能够将培养基中71.03%的As(V)还原为As(III);与表达空载体的菌株相比,还原效率提高了61.98%。本研究证明了AMF的砷解毒还原能力,为进一步开展AMF的砷代谢机制研究提供了一定的分子生物学基础。 展开更多

关键词 丛枝菌根真菌 砷酸盐还原酶基因 克隆 基因功能验证

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牛胰腺DNaseⅠ基因的合成、表达及功能验证 被引量：1

11

作者 覃鸿妮 谢钰珍 +3 位作者 薛高旭 梅啸 沈为琴 蔡一林 《西南大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2018年第6期24-31,共8页

从NCBI下载牛胰腺DNaseⅠ蛋白序列,利用密码子优化软件(Codon Optimization)进行序列优化,设计并合成24条首尾重叠的引物合成786bp的DNaseⅠ基因,构建重组载体pET30a-DNaseⅠ,转入BL21(DE3),ArcticExpress(DE3),BL21(DE3)pLysS 3种感受... 从NCBI下载牛胰腺DNaseⅠ蛋白序列,利用密码子优化软件(Codon Optimization)进行序列优化,设计并合成24条首尾重叠的引物合成786bp的DNaseⅠ基因,构建重组载体pET30a-DNaseⅠ,转入BL21(DE3),ArcticExpress(DE3),BL21(DE3)pLysS 3种感受态中诱导表达后,纯化目的蛋白并验证其活性.结果表明:BL21(DE3),ArcticExpress(DE3)两种感受态菌落生长异常,且未纯化到目的蛋白,BL21(DE3)pLysS感受态菌落生长正常,但未经诱导和葡萄糖诱导表达的菌液中也未纯化到目的蛋白,IPTG诱导扩大培养的菌液中纯化到0.15 mg/mL的目的蛋白.经验证,酶原液能彻底消化λ-DNA和不同大小的质粒DNA,酶稀释液消化产物电泳检测显示条带拖尾弥散,表明酶稀释液只能消化部分λ-DNA. 展开更多

关键词 DNaseⅠ 基因合成 基因表达 基因功能验证

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异源表达板栗坚果淀粉合成酶基因对水稻籽粒淀粉合成的影响 被引量：1

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作者 王玉龙 张卿 +4 位作者 赵永廉 刘建玲 秦岭 曹庆芹 邢宇 《北京农学院学报》 2019年第3期15-20,共6页

【目的】验证板栗淀粉合成酶基因的功能。【方法】将中国板栗淀粉合成酶相关基因SSS、SBE和PUL在水稻‘日本晴(Oryzasativa,Nipponbare)’中过量表达,设置转空载体水稻株系作为阴性对照,通过比较转基因植株籽粒的直链淀粉、支链淀粉、... 【目的】验证板栗淀粉合成酶基因的功能。【方法】将中国板栗淀粉合成酶相关基因SSS、SBE和PUL在水稻‘日本晴(Oryzasativa,Nipponbare)’中过量表达,设置转空载体水稻株系作为阴性对照,通过比较转基因植株籽粒的直链淀粉、支链淀粉、总淀粉和抗性淀粉含量与转空载体对照株系的差异,从而验证板栗淀粉合成酶基因的相关功能。【结果】CmSSSⅡ在水稻中的异源表达使水稻籽粒直链淀粉含量显著上升,而CmSBEⅠ使直链淀粉含量显著降低;CmSSSⅡ和CmSBEⅠ在水稻中的异源表达使水稻籽粒中支链淀粉含量、总淀粉含量、抗性淀粉含量显著上升;CmSSSⅢ和CmSBEⅡ转基因水稻株系未鉴定到转基因阳性植株;CmSSSⅣ和CmPUL转基因水稻株系淀粉含量没有显著变化。【结论】板栗SSSⅡ和SBEⅠ基因功能在直链淀粉、支链淀粉、总淀粉和抗性淀粉的积累中表现的功能有差异。 展开更多

关键词 板栗 淀粉合成酶 水稻 过表达 基因功能验证

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酵母前体饲喂验证植物次生代谢产物功能基因方法学初探

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作者 刘金凤 黄鹏 +4 位作者 卿志星 刘秀斌 柳亦松 唐其 曾建国 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2017年第3期559-566,共8页

目的筛选效率最高的酵母前体饲喂方式,为在酵母中进行基因功能验证提供方法学指导。方法首先构建含PsP6H基因和PsCPR基因重组酵母工程菌,然后用4种不同的方法进行前体饲喂,最后质谱检测下游产物二氢血根碱来确定最优方案。结果最优的前... 目的筛选效率最高的酵母前体饲喂方式,为在酵母中进行基因功能验证提供方法学指导。方法首先构建含PsP6H基因和PsCPR基因重组酵母工程菌,然后用4种不同的方法进行前体饲喂,最后质谱检测下游产物二氢血根碱来确定最优方案。结果最优的前体饲喂方法是将酵母工程菌经过半乳糖诱导31 h后在pH 8.0的Tris EDTA溶液中孵育24 h。结论不同的前体饲喂方式对酵母工程菌下游产物产生不同影响,经优化后的酵母前体饲喂方法较稳定,重复性好。 展开更多

关键词 次生代谢 基因功能验证 酵母前体饲喂 PsP6H基因 PsCPR基因

原文传递

CASQ2基因c.381C>T突变致儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速的分子机制 被引量：2

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作者 李翠兰 袁越 +1 位作者 刘文玲 胡大一 《中国循环杂志》 CSCD 北大核心 2021年第7期692-699,共8页

目的:对心电图上有U波,首诊怀疑长QTU综合征(LQTU)的两个家系进行基因筛查和功能检验,以期找到致病突变并结合临床信息作出疾病诊断。方法:筛查对象是2004~2005年来我院就诊的两个初诊为LQTU的家系L79和L104。诊断依据包括临床特征,如... 目的:对心电图上有U波,首诊怀疑长QTU综合征(LQTU)的两个家系进行基因筛查和功能检验,以期找到致病突变并结合临床信息作出疾病诊断。方法:筛查对象是2004~2005年来我院就诊的两个初诊为LQTU的家系L79和L104。诊断依据包括临床特征,如交感神经兴奋相关的晕厥,心电图记录到QT间期(或QU间期)延长及室性心动过速,且无器质性心脏病。记录先证者及其父母和一级亲属的病史、心电图和家族史,包括12导联静息心电图、24 h动态心电图和运动试验等。采用全外显子及Sanger测序法进行基因筛查。对发现的突变利用微小基因(minigene)技术进行功能验证。结果:两个家系中共有3例女性患者,皆为5岁左右首次发生晕厥。儿时心电图上有显著U波,随年龄增加U波幅度降低或消失。校正QT间期正常或临界值。基因筛查发现3例患者携带有CASQ2基因上的c.381C>T(p.Gly127=)纯合突变,父母杂合携带。其中L79家系先证者同时携带KCNQ1/c.921+1G>T杂合突变。Minigene实验证实,CASQ2/c.381C>T(p.Gly127=)突变虽未引起编码氨基酸改变,但其改变了3号外显子后面的生理性剪接位点并在380_381位点引入了一个新的剪切位点,致使其后41个核苷酸缺失,并在第128位置产生提前终止密码子。3例患者服用普萘洛尔或联合使用美西律,近3~15年无晕厥。结论:基因筛查及minigene功能验证结合家系临床表现,可确诊这3例患者为CASQ2/c.381C>T(p.Gly127=)纯合突变引起的儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速(CPVT)2型,L79先证者同时伴有KCNQ1/c.921+1G>T杂合突变所致的长QT综合征1型。本研究在中国CPVT患者中发现CASQ2基因编码区内的核苷酸同义变异可导致剪接突变效应。 展开更多

关键词 儿茶酚胺敏感性多形性室性心动过速 U波 CASQ2基因 c.381C>T 剪接突变 微小基因功能验证

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“棉花工厂化转基因技术体系”通过河南省科技厅鉴定

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《棉花学报》 CSCD 北大核心 2004年第6期356-356,共1页

2004年9月19日，经河南省科技厅组织，由科技部“国家转基因植物研究与产业化专项”资助、中国农业科学院棉花研究所承担，喻树迅、李付广、刘传亮等为主要完成人的成果——“棉花工厂化转基因技术体系”，在河南安阳通过河南省科技厅... 2004年9月19日，经河南省科技厅组织，由科技部“国家转基因植物研究与产业化专项”资助、中国农业科学院棉花研究所承担，喻树迅、李付广、刘传亮等为主要完成人的成果——“棉花工厂化转基因技术体系”，在河南安阳通过河南省科技厅成果鉴定。专家认为，该成果取得了重大进展。 展开更多

关键词 棉花 工厂化转基因技术体系 植物嫁接技术 快速基因功能验证体系 产业化

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