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全基因合成方法学研究(英文)
被引量：
4
1
作者
牛丹丹
王正祥
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期515-518,共4页
通过基因全合成实现基因的分子改造和人工组建正成为一种实验室常规手段,因此,建立一种能够在相对低廉和短时间内准确和高效地设计和合成长片段基因的方法十分重要.本研究报道了一种重复性好、错误率低、低成本和简便的基因设计和全合...
通过基因全合成实现基因的分子改造和人工组建正成为一种实验室常规手段,因此,建立一种能够在相对低廉和短时间内准确和高效地设计和合成长片段基因的方法十分重要.本研究报道了一种重复性好、错误率低、低成本和简便的基因设计和全合成方法.此方法包含经DNA2.0软件的序列优化,Gene2Oligo软件的寡核苷酸设计,覆盖全长基因双链的寡核苷酸的组合和引物介导下的全基因的合成等步骤.运用此方法,对3个不同长度的基因(分别为653bp,1309bp和1498bp)成功地进行了密码子优化和一步全合成.其中的amyFF在大肠杆菌中表达量提高了12倍.
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关键词
基因
全
合成
组合PCR
基因
设计
下载PDF
职称材料
全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
2
作者
王志臻
仝艳军
+1 位作者
杨海麟
王武
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第1期34-39,共6页
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78...
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。
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关键词
3α-羟类固醇脱氢酶
基因
全
合成
密码子优化
重组DNA表达
酶学性质
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职称材料
题名
全基因合成方法学研究(英文)
被引量：
4
1
作者
牛丹丹
王正祥
机构
江南大学生物工程学院工业生物技术教育部重点实验室
出处
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007年第4期515-518,共4页
基金
Supported by the Program of New Century Excellent Talents in Universities, Ministry of Education, China ( NCET-04-9704)
the National High-tech Development Program of China (2006AA020204)
文摘
通过基因全合成实现基因的分子改造和人工组建正成为一种实验室常规手段,因此,建立一种能够在相对低廉和短时间内准确和高效地设计和合成长片段基因的方法十分重要.本研究报道了一种重复性好、错误率低、低成本和简便的基因设计和全合成方法.此方法包含经DNA2.0软件的序列优化,Gene2Oligo软件的寡核苷酸设计,覆盖全长基因双链的寡核苷酸的组合和引物介导下的全基因的合成等步骤.运用此方法,对3个不同长度的基因(分别为653bp,1309bp和1498bp)成功地进行了密码子优化和一步全合成.其中的amyFF在大肠杆菌中表达量提高了12倍.
关键词
基因
全
合成
组合PCR
基因
设计
Keywords
total gene synthesis
assembly PCR
gene design
分类号
Q75 [生物学—分子生物学]
下载PDF
职称材料
题名
全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
2
作者
王志臻
仝艳军
杨海麟
王武
机构
江南大学工业生物技术教育部重点实验室
出处
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014年第1期34-39,共6页
基金
江苏省科技计划项目(SBE201170578)(No.SBE201170578)
江苏省科技计划项目(SBE201077545)(No.SBE201077545)
+1 种基金
江苏省自然科学基金(SBK201240329(No.SBK201240329)
国家高技术研究发展计划(863计划)(2012AA021201)
文摘
以NCBI报道的Comamonas testosteroni ATCC11996中3α-羟类固醇脱氢酶基因(3α-hydroxysteroid dehydrogenase gene,3α-hsd,AF092031.2)为模板,通过改变碱基序列但不影响酶的氨基酸序列,将该基因相对于大肠杆菌的密码子适用指数由0.78提高到0.87,GC含量由原来的63.17降低到56.46,大幅度减少了GC簇及寡聚A和T局域的存在,提高3α—hsd的可表达性。全合成基因定向克隆到pET28a载体中,并转化至大肠杆菌B121(DE3)中表达。采用乳糖诱导后,SDS—PAGE检测在约27 kD处有一高效表达的蛋白条带。采用Ni螯合柱分离纯化3α-HSD,获得了较高纯度及较高的产率。酶学性质初步分析表明,全基因合成表达的3α-HSD的性质与原始的3α-HSD基本相同。
关键词
3α-羟类固醇脱氢酶
基因
全
合成
密码子优化
重组DNA表达
酶学性质
Keywords
3α-hydroxysteroid dehydrogenase
gene synthesis
codon alteration
gene recombinant expression
enzymatic property
分类号
Q55 [生物学—生物化学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
全基因合成方法学研究(英文)
牛丹丹
王正祥
《应用与环境生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2007
4
下载PDF
职称材料
2
全合成3α-羟类固醇脱氢酶基因密码子优化及酶性质研究
王志臻
仝艳军
杨海麟
王武
《工业微生物》
CAS
CSCD
2014
0
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职称材料
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