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葡萄Fe-S簇装配基因的鉴定、克隆和表达特征分析 被引量：7
1
作者 张璐 宗亚奇 +9 位作者 徐维华 韩蕾 孙浈育 陈朝晖 陈松利 张凯 程杰山 唐美玲 张洪霞 宋志忠 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第23期5068-5082,共15页
【目的】从葡萄中克隆并鉴定Fe-S簇装配基因,在转录水平探索其组织特异性表达特征及其对缺铁胁迫的差异响应,明确主效基因。【方法】通过同源克隆法,在葡萄基因组中筛选并鉴定参与Fe-S簇装配的基因;借助生物信息学软件分析葡萄Fe-S簇装... 【目的】从葡萄中克隆并鉴定Fe-S簇装配基因,在转录水平探索其组织特异性表达特征及其对缺铁胁迫的差异响应,明确主效基因。【方法】通过同源克隆法,在葡萄基因组中筛选并鉴定参与Fe-S簇装配的基因;借助生物信息学软件分析葡萄Fe-S簇装配相关基因及其编码蛋白的详细特征;利用实时荧光定量PCR分析Fe-S簇装配相关基因在葡萄不同组织部位的表达模式及其对缺铁胁迫的响应情况;利用MEGE 7.0软件建立不同植物ISU1同源蛋白的系统进化树。【结果】在葡萄基因组中检索并克隆获得46个Fe-S簇装配基因,分布于16条染色体上,含有1—21个长度不一的内含子,且主要分布于质体、线粒体和细胞质,分别含有14、21和11个基因成员;葡萄Fe-S簇装配蛋白在多种亚细胞结构中均有定位,且不同装配机制中蛋白的亚细胞定位情况差异很大;所选10种植物ISU1蛋白序列的一致性高达77%,系统发育树分析表明同一属的ISU1同源蛋白如十字花科的拟南芥和盐芥、禾本科的水稻和短柄草、蔷薇科的桃和苹果,倾向于紧密聚在一起,但葡萄ISU1和番茄ISU1紧密聚集在一起;葡萄Fe-S簇装配基因在3年生‘马瑟兰’成年树体和组培幼苗不同组织中的表达水平差异较大,其中,ISU1整体水平的表达量最为丰富(尤其是成熟期果实中的表达量最高),其次是HSCA1、ISA2、NFU2、SUFA和SUFB等基因,而SUFE2、NFS1、HSCA2、HSCA6、TAH18和CIA2在本研究所有葡萄组织中均未检测到表达量;在‘马瑟兰’幼苗中,葡萄Fe-S簇装配基因对缺铁处理较为敏感,所有基因至少在1个检测的组织部位对缺铁处理有响应,其中,22个基因的表达水平在所有检测组织中均受缺铁处理调控:根部Fe-S簇装配基因的表达水平易受缺铁胁迫诱导而上调,但地上部(茎和叶)Fe-S簇装配基因的表达水平易受缺铁胁迫抑制而下调。【结论】从葡萄中克隆并鉴定了46个Fe 展开更多
关键词 葡萄 铁代谢 缺铁 Fe-S簇 装配机制 基因克隆及表达
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半滑舌鳎稚鱼脂肪分解关键酶基因的克隆及饲料中脂肪水平对其表达的调控 被引量：3
2
作者 艾庆辉 袁禹惠 +4 位作者 麦康森 李松林 徐玮 张彦娇 周慧慧 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2014年第10期65-71,共7页
克隆了半滑舌鳎脂肪分解关键酶基因即激素敏感脂肪酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)和脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)cDNA部分序列,并探讨了饲料中脂肪水平对半滑舌鳎稚鱼HSL及ATGL基因表达的影响。克隆所得到... 克隆了半滑舌鳎脂肪分解关键酶基因即激素敏感脂肪酶(Hormone-sensitive lipase,HSL)和脂肪甘油三酯脂肪酶(Adipose triglyceride lipase,ATGL)cDNA部分序列,并探讨了饲料中脂肪水平对半滑舌鳎稚鱼HSL及ATGL基因表达的影响。克隆所得到的HSL和ATGL片段长度分别为589bp和581bp,序列和系统进化分析表明半滑舌鳎的HSL和ATGL与大部分鱼类具有较高的同源性。采用不同水平的鱼油配制成5种不同脂肪水平(6.68%、9.84%、13.47%、17.89%和21.88%干物质)的等氮饲料,饲养35日龄半滑舌鳎稚鱼30d,养殖过程中每天饱食投喂5次,养殖实验结束后采用实时荧光定量PCR分别测定各处理稚鱼内脏团的HSL及ATGL mRNA相对表达量。结果表明,高脂饲料组(21.88%)显著促进了半滑舌鳎稚鱼内脏团HSL基因的表达(P<0.05),但饲料脂肪水平对于半滑舌鳎稚鱼内脏团的ATGL表达量未产生显著影响(P>0.05)。 展开更多
关键词 激素敏感脂肪酶 脂肪甘油三酯脂肪酶 基因克隆及表达 半滑舌鳎 脂肪水平
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高等植物中DELLA蛋白的研究进展 被引量：3
3
作者 王倩 杨凤萍 +2 位作者 张秀海 肖伟 董然 《分子植物育种》 CAS CSCD 北大核心 2019年第10期3231-3240,共10页
在赤霉素(GA)信号传导过程中,有一类起着负调控作用的蛋白——DELLA蛋白,是GRAS家族的亚家族,因其N端含有DELLA结构域而命名。该蛋白对种子萌发、茎的伸长、下胚轴伸长以及花发育等起着重要的调控作用。本研究主要讲述了DELLA蛋白如何... 在赤霉素(GA)信号传导过程中,有一类起着负调控作用的蛋白——DELLA蛋白,是GRAS家族的亚家族,因其N端含有DELLA结构域而命名。该蛋白对种子萌发、茎的伸长、下胚轴伸长以及花发育等起着重要的调控作用。本研究主要讲述了DELLA蛋白如何参与多种信号传导,分析了模式植物拟南芥中5种DELLA蛋白对植物生长发育的作用,分别介绍了DELLA蛋白的保守结构域及其作用,总结了目前已知DELLA蛋白的克隆及表达情况,最后对今后DELLA蛋白的研究进行展望,以期更好地揭示DELLA蛋白的调控机制。 展开更多
关键词 DELLA蛋白 基因克隆及表达 植物激素 信号传导
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海湾扇贝促性腺激素释放激素基因克隆及表达分析 被引量：3
4
作者 李婉茹 张玲玲 +4 位作者 张美溦 李若佼 李仰平 郭振义 包振民 《中国海洋大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2020年第2期68-74,共7页
促性腺激素释放激素(Gonadotropin Releasing Hormone,GnRH)是脊椎动物下丘脑-垂体-性腺轴的关键信号分子。近年来的研究显示,GnRH也存在于贝类等无脊椎动物,且在雌雄异体性别分化与繁殖中起重要作用,然而雌雄同体贝类GnRH的研究仍处于... 促性腺激素释放激素(Gonadotropin Releasing Hormone,GnRH)是脊椎动物下丘脑-垂体-性腺轴的关键信号分子。近年来的研究显示,GnRH也存在于贝类等无脊椎动物,且在雌雄异体性别分化与繁殖中起重要作用,然而雌雄同体贝类GnRH的研究仍处于空白。本文以海湾扇贝为研究对象,利用RACE技术克隆获得GnRH的cDNA全长序列,该基因长1335 bp,编码101个氨基酸,前体包含1个由24个氨基酸组成的信号肽以及1个具有酰胺化修饰的活性肽(QNFHYSNGWQP-amide)。GnRH在脑足神经节和脏神经节中均有表达,且在2015年10月-2016年1月,GnRH在脑足神经节中的表达量显著高于脏神经节(P<0.05);GnRH在两个神经节中的表达均呈现先上升后下降的趋势,峰值出现在11月份,推测可能与性腺发育启动有关。本研究为深入理解GnRH在贝类繁殖调控中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 海湾扇贝 促性腺激素释放激素 性腺发育 雌雄同体 性别分化 基因克隆及表达 脏神经节 氨基酸组成
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对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒衣壳蛋白基因的克隆表达及抗体制备 被引量：2
5
作者 彭小莉 刘棠 +5 位作者 徐维佳 王群力 陈伟玲 陈双雅 王景明 谢明星 《台湾海峡》 CAS CSCD 北大核心 2008年第1期37-42,共6页
本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a... 本文根据GenBank登录的对虾传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)的全基因组序列(NC-002190),设计出主要结构蛋白基因的相应引物,从厦门发病的对虾中,提取DNA,以此为模板,利用PCR扩增目的基因.再将目的基因分别与pGEX-6p1载体和pET-28a载体连接,构建重组表达载体pGEX-IV、pET-IV,重组子经酶切和测序鉴定后导入表达型大肠杆菌BL21,IPTG诱导表达,SDS-PAGE检测,大小约为62KDa和41KDa,与预测大小一致.将pET-IV表达重组蛋白经纯化,免疫小鼠,W estern免疫印迹反应结果表明其抗体均可与pGEX-IV和pET-IV表达的蛋白发生特异性反应.本研究的结果为对虾IHHNV的快速检测及其免疫提供了研究基础. 展开更多
关键词 传染性皮下及造血组织坏死病毒 衣壳蛋白 基因克隆及表达 蛋白质纯化 Western免疫印迹 对虾
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长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)普鲁兰酶在大肠杆菌中的活性表达与分泌调控 被引量：16
6
作者 严伟 聂尧 徐岩 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2013年第2期145-153,共9页
【目的】从长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)JNB-1中克隆出普鲁兰酶基因并在大肠杆菌系统中表达,通过优化诱导条件和使用化学添加剂提高了胞外酶活。【方法】采用PCR方法,从B.naganoensis基因组中扩增出普鲁兰酶基因pul,构建重组菌E.... 【目的】从长野芽胞杆菌(Bacillus naganoensis)JNB-1中克隆出普鲁兰酶基因并在大肠杆菌系统中表达,通过优化诱导条件和使用化学添加剂提高了胞外酶活。【方法】采用PCR方法,从B.naganoensis基因组中扩增出普鲁兰酶基因pul,构建重组菌E.coli BL21/pET-20b-pul。通过优化,确定优化后的IPTG诱导条件以及甘氨酸、Na+的最佳添加参数。【结果】普鲁兰酶在大肠杆菌中得到有效表达,其相对分子质量为119kDa。在优化后的诱导条件(诱导温度20℃,IPTG终浓度0.4 mmol/L,在菌体OD600至1.2时诱导)下,普鲁兰酶的总酶活达到10.8 U/mL。添加甘氨酸和Na+均能有效促进普鲁兰酶的分泌。在诱导时添加终浓度0.08 mol/L的甘氨酸和0.2 mol/L Na+,胞外酶活提高至8.1 U/mL,是不加任何添加剂的10.3倍。【结论】该重组菌的构建为普鲁兰酶制剂的工业生产提供了有价值的菌株,对化学添加剂促进分泌的研究也为重组酶的高水平胞外生产提供了有效的方法。 展开更多
关键词 普鲁兰酶 基因克隆和表达 诱导条件 优化 化学添加剂 分泌
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苹果酸-乳酸发酵的相关酶和基因的研究进展 被引量：11
7
作者 刘延琳 李华 +1 位作者 蒋思欣 张博润 《微生物学通报》 CAS CSCD 北大核心 2003年第4期103-107,共5页
对苹果酸 乳酸发酵的相关酶及其基因的研究进展作了简要综述。
关键词 乳酸菌 苹果酸-乳酸发酵 基因克隆与表达
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锰超氧化物歧化酶基因的克隆和在保加利亚乳杆菌中的表达 被引量：12
8
作者 黄勇 张德纯 《食品科学》 EI CAS CSCD 北大核心 2005年第5期92-95,共4页
目的:克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因(sodA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达,以提高该菌对氧的耐受性,同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础。方法:PCR扩增大肠杆菌sodA,将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中,并将该重组质粒pMG36e-so... 目的:克隆大肠杆菌锰超氧化物歧化酶基因(sodA)并在保加利亚乳杆菌(L6032)中表达,以提高该菌对氧的耐受性,同时为SOD发酵奶的研制奠定实验室基础。方法:PCR扩增大肠杆菌sodA,将其克隆入乳酸菌表达载体pMG36e中,并将该重组质粒pMG36e-sod电转入L6032中表达。用SOD测试盒测定SOD的表达活性,同时对L6032及其重组子在MRS平板上的生长情况及其在有氧条件下的存活情况进行比较,初步探讨SOD在L6032中的活性表达对其氧耐受性的影响。结果:构建了重组质粒pMG36e-sod,经酶切和PCR鉴定与预期完全吻合。核酸测序显示插入的sodA片段能正确编码SOD氨基酸序列。利用电转化成功地将重组质粒导入L6032中,SOD的表达活性约590.5NU/mgprot。SOD的活性表达,能增强保加利亚乳杆菌对氧的耐受性,在有氧条件下重组子的生长和存活率都优于原菌。结论:SodA在保加利亚乳杆菌中获得了成功表达,增强了该菌对氧的耐受性,有利于该菌的开发应用。同时也为下一步SOD发酵奶的研制奠定了实验室基础。 展开更多
关键词 保加利亚乳杆菌 超氧化物歧化酶 基因克隆与表达
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番茄蔗糖代谢关键基因的分子生物学研究 被引量：8
9
作者 姜晶 李天来 《生物技术》 CAS CSCD 2005年第1期82-85,共4页
蔗糖代谢相关的酶类主要有转化酶、蔗糖合成酶和蔗糖磷酸合成酶。
关键词 番茄 酸性转化酶 蔗糖合成酶 蔗糖磷酸合成酶 基因克隆与表达 转基因
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植物类黄酮O-甲基转移酶研究进展 被引量：10
10
作者 张传丽 仲月明 +1 位作者 沈丹红 陈鹏 《西北植物学报》 CAS CSCD 北大核心 2012年第6期1274-1281,共8页
植物类黄酮O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)属转移酶类的甲基转移酶家族,是一类可催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)中的-CH3基团转移到类黄酮-OH上的蛋白质酶。甲基化是类黄酮物质最基本、最主要的... 植物类黄酮O-甲基转移酶(flavonoid O-methyltransferase,FOMT)属转移酶类的甲基转移酶家族,是一类可催化S-腺苷甲硫氨酸(S-adenosyl-L-methionine,SAM)中的-CH3基团转移到类黄酮-OH上的蛋白质酶。甲基化是类黄酮物质最基本、最主要的修饰反应之一,不仅可以降低类黄酮的化学反应活性,而且增加了其脂溶性,赋予了类黄酮更多的生理生化特性。该文对近年来国内外有关类黄酮甲基化对植物中FOMT催化的生理生化代谢反应、FOMT的分类、FOMT酶蛋白结构域、生物学功能以及FOMT基因克隆与表达调控等方面的研究进展进行综述,为植物类黄酮更广泛、更深入的研究提供新的思路与途径。 展开更多
关键词 类黄酮O-甲基转移酶 分类 结构域 基因克隆与表达 生物学功能
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黄瓜扩张蛋白基因CsEXP10的克隆与表达 被引量：8
11
作者 孙涌栋 张兴国 +2 位作者 杜小兵 苏承刚 毕喜红 《植物生理与分子生物学学报》 CAS CSCD 北大核心 2006年第3期375-380,共6页
以cDNA-AFLP差示片段的序列(CO434610)为基础,通过RACE延伸和与EST序列拼接,得到长度为1191bp的、包含完整3'末端的CsEXP10基因cDNA序列。Southern杂交结果表明,该基因在黄瓜基因组中以单拷贝形式存在。RT-PCR检测发现,该基因不在... 以cDNA-AFLP差示片段的序列(CO434610)为基础,通过RACE延伸和与EST序列拼接,得到长度为1191bp的、包含完整3'末端的CsEXP10基因cDNA序列。Southern杂交结果表明,该基因在黄瓜基因组中以单拷贝形式存在。RT-PCR检测发现,该基因不在根、茎和叶中表达,而在果实中表达。Northern杂交显示,该基因在授粉后迅速生长的幼果中丰量表达,而在幼小子房、开花当天的未授粉子房和生长停止的果实中不表达,由此推测CsEXP10基因与授粉后黄瓜果实膨大生长有密切关系。 展开更多
关键词 黄瓜 果实发育 扩张蛋白基因CsEXP10 基因克隆与表达
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芽孢杆菌α-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 被引量：6
12
作者 彭平 吴襟 +2 位作者 程安春 高启禹 张树政 《微生物学报》 CAS CSCD 北大核心 2005年第6期876-880,共5页
在仔猪结肠内容物中分离出一株能利用淀粉的芽孢杆菌Bacillussp.WS06,构建了全基因组DNA文库,从中筛选出α_淀粉酶基因amyF,分析测定了其核苷酸序列并进行了表达;其中amyF编码的蛋白有526个氨基酸、分子量为58.6kD;它与已报道的Bacillus... 在仔猪结肠内容物中分离出一株能利用淀粉的芽孢杆菌Bacillussp.WS06,构建了全基因组DNA文库,从中筛选出α_淀粉酶基因amyF,分析测定了其核苷酸序列并进行了表达;其中amyF编码的蛋白有526个氨基酸、分子量为58.6kD;它与已报道的Bacillusmegaterium的α_淀粉酶序列有93%的同源性。经过氨基酸序列比较分析还发现,AmyF含有淀粉酶家族中4个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化,重组酶的比活共提高了22.2倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS_PAGE检测,AmyF酶分子量为57kD。该酶的最适反应温度为55℃～60℃,酶的最适反应pH为7.0,在温度不超过55℃时,酶活较稳定;AmyF能迅速降解淀粉生成麦芽寡糖,属于内切糖苷酶。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 Α-淀粉酶 基因克隆和表达 酶学性质
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巨大芽孢杆菌β-淀粉酶基因的克隆、表达和酶学性质分析 被引量：7
13
作者 吴襟 张树政 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2008年第10期1740-1746,共7页
从巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的全基因组DNA文库中筛选出一个β-淀粉酶基因amyG,分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达;其中amyG编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194 kD,与已报道的巨大芽孢杆菌DSM319的β-淀粉酶序列有... 从巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的全基因组DNA文库中筛选出一个β-淀粉酶基因amyG,分析测定了其核苷酸序列并进行了诱导表达;其中amyG编码的蛋白有545个氨基酸、分子量为60.194 kD,与已报道的巨大芽孢杆菌DSM319的β-淀粉酶序列有着94.5%的同源性。经氨基酸序列比较分析发现,AmyG从N末端到C末端依次由信号肽域、糖基水解酶催化功能域和淀粉结合域3个功能域组成。其中催化功能域里含有第14家族糖基水解酶常见的几个高度保守的酶催化活性区。经多步纯化,重组酶的比活共提高了7.4倍,获得凝胶电泳均一的蛋白样品;经SDS-PAGE电泳测定,酶AmyG的分子量为57 kD。该酶的最适反应温度为60oC,最适反应pH为7.0;在温度不超过60oC时,酶活较稳定;AmyG能迅速降解淀粉生成麦芽糖,属于外切β-糖苷酶。 展开更多
关键词 巨大芽孢杆菌 Β-淀粉酶 基因克隆和表达 酶学性质
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木素过氧化物酶的研究进展 被引量：5
14
作者 姜杰 杨暖 +3 位作者 丁梦旋 汪文静 王子元 谢响明 《生物技术通报》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期30-33,共4页
木素过氧化物酶是一种能降解木素,由微生物分泌的胞外酶,广泛应用于生物制浆、纸浆的酶法漂白、有机污染物的降解和环境的生物修复等方面。介绍了木素过氧化物酶的来源、结构与性质、催化机理以及基因工程方面的研究成果,并对其可能带... 木素过氧化物酶是一种能降解木素,由微生物分泌的胞外酶,广泛应用于生物制浆、纸浆的酶法漂白、有机污染物的降解和环境的生物修复等方面。介绍了木素过氧化物酶的来源、结构与性质、催化机理以及基因工程方面的研究成果,并对其可能带来的工业应用前景以及今后的研究方向进行了展望。 展开更多
关键词 木素过氧化物酶 放线菌 耐热耐碱性 基因克隆与表达
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筇竹K^(+)通道蛋白QtKCO1基因的克隆与表达分析
15
作者 张倩 张馨艺 +1 位作者 芮蕊 王澍 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2024年第17期5587-5592,共6页
为分析KCO家族基因在筇竹钾运输中起到的重要作用,本研究以筇竹实生苗(2年生)为试材,利用RACE技术,克隆出KCO家族基因,命名为QtKCO1(基因登录号:MT078981),并分析其表达特征。结果表明,QtKCO1基因全长为1502 bp,开放阅读框为1041 bp,编... 为分析KCO家族基因在筇竹钾运输中起到的重要作用,本研究以筇竹实生苗(2年生)为试材,利用RACE技术,克隆出KCO家族基因,命名为QtKCO1(基因登录号:MT078981),并分析其表达特征。结果表明,QtKCO1基因全长为1502 bp,开放阅读框为1041 bp,编码347个氨基酸。QtKCO1具有5个跨膜区域,且与野生二粒小麦(Triticum dicoccoides)的同源性最高,为85.88%。另外,QtKCO1基因是组成型表达,在筇竹每个组织器官(竹笋,根,茎,叶)均有表达,表达量依次为竹笋>茎>叶>根。高浓度KCl胁迫下,随着处理时间的增加,QtKCO1基因在根表达量增加,而在茎和叶中表达量则下降。与对照组相比,NaCl胁迫处理条件下,筇竹QtKCO1在筇竹各个组织器官中均呈现上调表达,且表达量依次为叶>茎>根。本研究为进一步分析KCO家族基因在钾运输中的作用提供了理论依据。 展开更多
关键词 外向整流型钾离子通道 筇竹 QtKCO1 胁迫 基因克隆和表达
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芽孢杆菌BC4铬抗性相关基因chrA的克隆表达
16
作者 苍岩 陈旭 +1 位作者 冉钟吕 蔡亚君 《武汉纺织大学学报》 2023年第5期25-30,共6页
以芽孢杆菌BC4菌株为对象,通过对其铬抗性相关基因chr A的克隆表达来测定其编码蛋白ChrA还原Cr(Ⅵ)的能力以及该蛋白在芽孢杆菌Cr(Ⅵ)去除中的作用,可帮助进一步阐明芽孢杆菌与Cr(Ⅵ)的作用机理,并为芽孢杆菌应用于铬污染治理奠定理论... 以芽孢杆菌BC4菌株为对象,通过对其铬抗性相关基因chr A的克隆表达来测定其编码蛋白ChrA还原Cr(Ⅵ)的能力以及该蛋白在芽孢杆菌Cr(Ⅵ)去除中的作用,可帮助进一步阐明芽孢杆菌与Cr(Ⅵ)的作用机理,并为芽孢杆菌应用于铬污染治理奠定理论基础。PCR扩增出芽孢杆菌BC4菌株铬抗性相关基因chr A,PCR产物经克隆与测序,得到chr A完整的DNA序列。该序列大小为1182bp,共编码393个氨基酸,预测编码蛋白分子量为43kDa。根据利用NCBI所进行的BLAST序列比对结果,判断该基因为铬转运蛋白编码基因。将chr A基因PCR产物双酶切后连接到表达载体pET28b并转化进大肠杆菌BL21中,对其表达产物进行分析。结果表明,chr A基因在大肠杆菌BL21中表达约43kDa的蛋白,与预期结果相符;重组菌株对Cr(Ⅵ)的耐受能力高于对照菌株,说明ChrA蛋白在芽孢杆菌BC4的Cr(Ⅵ)抗性机制中起重要作用,且重组菌株对Cr(Ⅵ)具备较强的抗性。 展开更多
关键词 芽孢杆菌 chrA基因 基因克隆与表达 重组菌株
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津田芜菁和赤丸芜菁苯丙氨酸解氨酶基因(PAL)的克隆和表达 被引量：4
17
作者 许志茹 崔国新 +2 位作者 李春雷 孙燕 李玉花 《植物生理学通讯》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期485-490,共6页
以UV-A处理津田芜菁和赤丸芜菁块根24h后提取总RNA,再用RT-PCR方法分别克隆BrPAL1和BrPAL2基因的结果表明,BrPAL1和BrPAL2的开放读码框为2 169bp,编码722个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrPAL1和BrPAL2与甘蓝型油菜苯丙氨酸解氨酶(PAL)... 以UV-A处理津田芜菁和赤丸芜菁块根24h后提取总RNA,再用RT-PCR方法分别克隆BrPAL1和BrPAL2基因的结果表明,BrPAL1和BrPAL2的开放读码框为2 169bp,编码722个氨基酸。氨基酸序列分析显示,BrPAL1和BrPAL2与甘蓝型油菜苯丙氨酸解氨酶(PAL)的同源性达99%,第61～559的肽段具有PAL结构域。BrPAL1和BrPAL2的核苷酸序列在9个位置上存在差异,而推导的氨基酸序列仅在3个位置上有差异。BrPAL1和BrPAL2基因有高度同源性。Northern杂交结果显示,UV-A可以诱导BrPAL1和BrPAL2表达,基因的表达量与处理时间呈相关。 展开更多
关键词 芜菁 花青素 苯丙氨酸解氨酶基因 基因克隆与表达 序列分析
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大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质 被引量：4
18
作者 于平 刘航 +4 位作者 朱鹏志 胡淳玉 杨柳贞 贺敏 马健 《中国食品学报》 EI CAS CSCD 北大核心 2021年第8期35-45,共11页
目的:研究大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质。方法:首先采用PCR技术克隆编码大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因gadA,并将该基因克隆至载体pET-28a(+)中,形成重组质粒pET28a-gadA;然后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建... 目的:研究大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因克隆与表达及其酶学性质。方法:首先采用PCR技术克隆编码大肠杆菌谷氨酸脱羧酶A的基因gadA,并将该基因克隆至载体pET-28a(+)中,形成重组质粒pET28a-gadA;然后将该重组质粒转化至大肠杆菌BL21,构建重组菌株大肠杆菌BL21/pET28a-gadA。进一步采用Ni2+亲和层析色谱分离纯化谷氨酸脱羧酶A,研究其酶学性质。结果:经PCR和双酶切鉴定,重组质粒pET28a-gadA构建成功。SDS-PAGE分析表明Ni2+亲和层析纯化后得到电泳纯级谷氨酸脱羧酶A,其比活力为19 U/mg,得率为12.8%。在pH 4.5时,谷氨酸脱羧酶A的酶活力最高。该酶的最适温度为50℃,且在40℃时有较高的热稳定性,70℃时热稳定性较差,酶活力仅为初始酶活的17.9%。Cu2+对该酶的酶活力有较强的抑制作用,Ba2+、Co2+和Mg2+对其酶活力影响不大,Ca2+能显著增加该酶的酶活力。结论:研究结果为深入理解谷氨酸脱羧酶A的酶学性质及其γ-氨基丁酸的制备提供了试验基础。 展开更多
关键词 大肠杆菌 谷氨酸脱羧酶A 基因克隆与表达 酶学性质
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圆斑星鲽MHCⅠα基因的克隆与组织表达分析 被引量：4
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作者 王娟 王宏伟 +4 位作者 刘星 李宏俊 苏浩 高祥刚 赫崇波 《水产科学》 CAS 北大核心 2011年第8期457-462,共6页
采用表达序列标签法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术,成功获得了圆斑星鲽主要组织相容性复合体MHCⅠα的全长cDNA序列。该cDNA全长2171 bp,5′UTR为20 bp,3′UTR为1053bp,开放阅读框（ORF）长度为1098 bp,可编码365个氨基酸,包含信号肽... 采用表达序列标签法和cDNA末端快速扩增（RACE）技术,成功获得了圆斑星鲽主要组织相容性复合体MHCⅠα的全长cDNA序列。该cDNA全长2171 bp,5′UTR为20 bp,3′UTR为1053bp,开放阅读框（ORF）长度为1098 bp,可编码365个氨基酸,包含信号肽、抗原结合域（α1、α2）,IGC类似区（α3）,连接肽（跨膜区）和胞质区5个结构域。同源分析表明,圆斑星鲽MHCⅠα氨基酸序列与其他硬骨鱼具有31%~74%的同源性,与人的相似性较低。利用荧光定量PCR分析组织表达发现MHCⅠα基因在健康圆斑星鲽9种组织中均有表达,但表达量存在差异,肾的表达量最高,肌肉和皮的表达量最低。 展开更多
关键词 圆斑星鲽 MHCⅠα 基因克隆与表达
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产纤维素酶菌株选育技术研究进展 被引量：3
20
作者 蒋倩婷 宋斌 闫文娟 《江苏农业科学》 CSCD 北大核心 2011年第6期584-587,共4页
综述了产纤维素酶菌株选育技术的研究进展,包括常规理化诱变、原生质体融合技术、基因工程技术、原生质体诱变技术和基因组改组技术等方面。
关键词 纤维素酶 诱变 原生质体 基因克隆与表达 基因组改组
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