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幽门螺杆菌粘附素基因保守区的克隆及免疫原性研究 被引量:8
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作者 白杨 张亚历 +2 位作者 王继德 张兆山 周殿元 《中华医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2003年第9期736-739,共4页
目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp) 4种粘附素 (BabA2 、AlpA、AlpB和HopZ)保守区蛋白质的候选菌株 ,并研究其免疫原性。方法 利用PCR技术扩增粘附素保守区 (命名为CB)基因 ,将其定向插入pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ;... 目的 构建表达幽门螺杆菌 (Hp) 4种粘附素 (BabA2 、AlpA、AlpB和HopZ)保守区蛋白质的候选菌株 ,并研究其免疫原性。方法 利用PCR技术扩增粘附素保守区 (命名为CB)基因 ,将其定向插入pET 2 2b(+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 ;表达产物经亲和层析纯化和免疫印迹鉴定 ,ELISA法测定Hp感染者血清中抗CB抗体。结果 构建了 4种粘附素保守区的重组质粒 ,测序显示CB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸。SDS PAGE和凝胶扫描分析 ,CB基因表达的蛋白质相对分子质量约为 2 2 5 0 0 ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9%。经免疫印迹证实该重组蛋白质可以被Hp阳性患者血清所识别 ,ELISA法共检测了 5 5份血清 ,以快速尿素酶实验 (RUT)作为平行对照 ,两法的评价判断一致性程度的指标卡帕系数为 0 .76。结论 CB有可能成为一种有效的疫苗 ,用于幽门螺杆菌感染的预防和治疗。 展开更多
关键词 幽门螺杆菌粘附素 基因保守 克隆 免疫原性研究 免疫疗法
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聚合酶链反应检测肝硬化患者腹水中细菌DNA 被引量:6
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作者 袁春 叶进 +1 位作者 黄长形 连建奇 《中西医结合肝病杂志》 CAS 2005年第2期100-102,共3页
目的:探讨PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性。方法:在细菌16SrRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBVDNA、3 7份肝硬化患者腹水进行聚合酶链反应扩增。结果:7种对照菌株均获得5 3 0bpDNA片段。而... 目的:探讨PCR方法检测肝硬化患者腹水中细菌DNA的可行性。方法:在细菌16SrRNA基因保守区设计一对通用引物,对7种对照菌株、人基因组DNA、HBVDNA、3 7份肝硬化患者腹水进行聚合酶链反应扩增。结果:7种对照菌株均获得5 3 0bpDNA片段。而与人基因组DNA、HBVDNA无交叉阳性反应,敏感性试验可检测出1pg的细菌DNA。3 7份腹水中有9份获得5 3bpDNA片段,阳性率2 4 3 % (9/3 7) ,而腹水细菌培养阳性率为5 4%(2 /3 7) ,两者比较差异有显著性意义(P <0 0 5 )。结论:将通用引物通过PCR方法扩增细菌16SrRNA基因,具有高度敏感性、特异性,可应用于肝硬化患者腹水中细菌DNA的检测及细菌移位的研究。 展开更多
关键词 细菌DNA 肝硬化患者 聚合酶链反应检测 腹水 16SrRNA基因 聚合酶链反应扩增 基因组DNA HBVDNA PCR方法 DNA片段 通用引物 基因保守 敏感性试验 阳性反应 细菌培养 细菌移位 阳性率 显著性 特异性 菌株 对照
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优化的套式核酸体外扩增方法用于甲型流感病毒快速诊断的研究 被引量:3
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作者 李先茜 康向东 +2 位作者 董婕 杜培革 王笑英 《国外医学(流行病学.传染病学分册)》 2005年第2期73-76,共4页
目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生... 目的临床上对流感的有效控制与治疗在于实验室快速与准确的诊断,这对于指导用药和避免滥用抗生素具有重要意义。RT_PCR在流感病毒检测中特异性和灵敏度较强,nestedmultiplexRT_PCR法可以在此基础上提高灵敏度。实验的目的是应用分子生物学方法对流感病毒进行快速诊断。方法我们结合流感病毒M基因、NS基因、HA基因的结构和进化特性设计多元引物达到流感病毒的型和亚型准确与快速的鉴定。结果甲型流感病毒以M基因保守区域设计引物,PCR后电泳带为413bp;甲型流感病毒以HA基因分亚型,H1N1亚型PCR后电泳带为348bp,H3N2亚型PCR后电泳带为291bp,H5N1亚型PCR后电泳带为326bp。结论应用优化的套式核酸体外扩增方法进行流感病毒的型与亚型的诊断是比较快速的,且所需要的病毒量少(0.01~0.1TCID50),灵敏度较高。 展开更多
关键词 甲型流感病毒 快速诊断 扩增方法 体外 核酸 套式 优化 RT-PCR法 分子生物学方法 流感病毒M基因 nested H3N2亚型 滥用抗生素 基因保守 有效控制 重要意义 指导用药 病毒检测 高灵敏度 NS基因 HA基因 设计引物 H1N1 H5N1
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PCR检测病原性真菌及其临床应用 被引量:1
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作者 程梅 丁训敏 王礼文 《临床检验杂志》 CAS CSCD 北大核心 1999年第6期351-352,共2页
选用多数真菌所共有的18 SrDNA基因保守区的一对寡核苷酸序列B2 F和B4R为引物, 用PCR方法对病原性真菌的基因进行扩增。检测常见病原性真菌的5 个菌属15 种真菌, 其扩增产物经琼脂糖电泳均出现一条687 bp 的... 选用多数真菌所共有的18 SrDNA基因保守区的一对寡核苷酸序列B2 F和B4R为引物, 用PCR方法对病原性真菌的基因进行扩增。检测常见病原性真菌的5 个菌属15 种真菌, 其扩增产物经琼脂糖电泳均出现一条687 bp 的特异性条带。其DNA检出最低限量为10 pg。而毛霉菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌均无此条带, 39 份临床标本中, 培养法18例阳性, 基因扩增检出阳性20 例, 实验结果表明该法应用于临床病原性真菌检验具有较高的特异性和敏感性。 展开更多
关键词 病原性真菌 聚合酶链反应 DNA 基因保守
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幽门螺杆菌AlpA基因中四种黏附素基因保守区的克隆、表达、纯化及鉴定 被引量:12
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作者 白杨 但汉雷 +4 位作者 王继德 张兆山 S.ODENBREIT 周殿元 张亚历 《生物化学与生物物理进展》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第6期922-926,共5页
幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而... 幽门螺杆菌 (Helicobacterpylori,Hp)感染是慢性活动性胃炎和消化性溃疡的主要病因 ,与胃腺癌、胃黏膜相关淋巴样组织 (MALT)淋巴瘤的发生亦密切相关 .鉴于Hp已证实的四种粘附素保守区 (AB)是外膜蛋白 (OMP)和膜孔素 (porin)样成分 ,而外膜蛋白和膜孔素样成分是优秀的疫苗候选抗原 .用PCR技术扩增AB基因 ,将其定向插入 pET 2 2b (+)载体 ,在BL2 1(DE3)大肠杆菌中表达 .测序显示AB基因长 5 88bp ,编码 195个氨基酸 .SDS 聚丙烯酰胺凝胶电泳和凝胶扫描分析 ,AB基因表达的蛋白质分子质量约为 2 2 5ku ,其重组蛋白质表达量占菌体总蛋白质的 2 9% ,表达产物经亲和层析纯化后蛋白质纯度达 96 % .经免疫印迹证实该重组蛋白可以被AlpA免疫兔血清所识别 . 展开更多
关键词 幽门螺杆菌 AlpA基因 黏附素基因保守 克隆 表达 纯化 鉴定
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大肠埃希菌氨基糖苷类耐药株aac(3)—Ⅱ基因保守区分析
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作者 陈接根 吕建新 +3 位作者 楼永良 彭颖 陈秀枢 陆永绥 《检验医学教育》 2003年第2期40-42,共3页
常规分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3)—Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)—Ⅱ基因保守区之间... 常规分离鉴定47株大肠埃希菌,以标准纸片扩散法(K—B法)对其进行常用氨基糖苷类药物敏感性测定,耐药株经PCR检测aac(3)—Ⅱ基因保守区,扩增产物进行DNA测序分析。初步探讨大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株与aac(3)—Ⅱ基因保守区之间的关系,结果显示本地区大肠埃希菌氨基糖苷类抗生素耐药株的aac(3)—Ⅱ基因保守区具65位G、84位T和65位A、84位C两种基因型,且高度耐药菌株皆为65位G、84位T。 展开更多
关键词 大肠埃希菌 氨基糖苷类 耐药株 aac(3)-Ⅱ基因保守 药物敏感性 检测 抗生素
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抗病毒治疗后CHB患者HBV多聚酶基因P区突变检测及分析
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作者 赵建强 《山东医药》 CAS 2014年第15期59-60,共2页
目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者多聚酶基因逆转录保守区(P区)突变情况,分析其相关因素。方法选择220例行核苷(酸)类似物抗病毒治疗的CHB患者,采用套式PCR方法扩增HBV多聚酶基因P区特异性片段,焦磷酸测序法检测相关位点突变情... 目的观察慢性乙型肝炎(CHB)患者多聚酶基因逆转录保守区(P区)突变情况,分析其相关因素。方法选择220例行核苷(酸)类似物抗病毒治疗的CHB患者,采用套式PCR方法扩增HBV多聚酶基因P区特异性片段,焦磷酸测序法检测相关位点突变情况,并分析性别、年龄与突变率的关系及联合位点突变情况。结果HBV基因P区突变位点包括173、180、181、184、202、204、236和250,其突变率依次为1.81%、22.72%、13.63%、5.90%、0.45%、34.09%、5.00%、1.36%;204位点突变率在男性显著高于女性(P〈0.01),180、181、236位点突变率无显著性别差异;180位点突变率在不同年龄组之间比较均有显著差异,204位点突变率在〈30岁者与41—50岁、51—60岁者间比较有显著差异(P〈0.05或0.01);204位点联合180位点突变率为66.67%,181位点联合236位点突变率为36.67%。结论抗病毒治疗后CHB患者的HBV多聚酶基因P区突变主要集中在204、180位点,对抗病毒治疗耐药的HBV患者进行相关位点突变检测有利于指导临床治疗。 展开更多
关键词 乙型肝炎病毒 多聚酶基因逆转录保守 焦磷酸测序 耐药突变 变异率
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