分子信标用于结核分枝杆菌的均相荧光PCR检测 被引量：10

1

作者 李庆阁 梁基选 +1 位作者 栾国彦 张洋 《中华微生物学和免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期385-386,共2页

关键词 分子信标 结核分枝杆菌 均相荧光 PCR 结核病

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TaqMan-分子灯标:一种新型的荧光基因检测探针 被引量：12

2

作者 孔德明 古珑 +1 位作者 沈含熙 宓怀风 《化学学报》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2003年第5期755-759,共5页

在TaqMan及分子灯标的基础上开发了一类新型的均相荧光检测探针———TaqMan 分子灯标 (TaqMan MB) ,该探针集合了分子灯标的发夹结构及TaqMan探针降解作用的工作原理 ,使检测效果更好 .与实时PCR仪联用 ,可用于靶基因的定量检测 .

关键词 TaqMan-分子灯标 荧光基因检测探针 均相荧光检测探针 聚合酶链式反应

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均相荧光探针PCR技术检测结核分支杆菌的评价 被引量：3

3

作者 熊国亮 雷建平 +1 位作者 刘珍琼 钭芳芳 《江西医学检验》 1999年第4期242-243,共2页

关键词 结核分支杆菌 聚合酶链反应 均相荧光探针

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NaYF_4:Er^(3+),Yb^(3+)UCNPs为供体的均相荧光分析 被引量：2

4

作者 宋凯 张庆彬 +1 位作者 赵军伟 孔祥贵 《光谱学与光谱分析》 SCIE EI CAS CSCD 北大核心 2013年第4期1005-1008,共4页

在基于荧光共振能量传递(FRET)的均相分析中,小尺寸的上转换发光纳米晶(UCNPs)用作供体被认为有很大的优势。通过配体交换的方式制备了大小约12nm、表面带有氨基的水溶性NaYF4∶Er3+,Yb3+UCNPs。傅里叶变换红外光谱证明配体交换成功;扫... 在基于荧光共振能量传递(FRET)的均相分析中,小尺寸的上转换发光纳米晶(UCNPs)用作供体被认为有很大的优势。通过配体交换的方式制备了大小约12nm、表面带有氨基的水溶性NaYF4∶Er3+,Yb3+UCNPs。傅里叶变换红外光谱证明配体交换成功;扫描电镜表明UCNPs的形貌和尺寸没有改变;圆二色光谱表征亲合素偶联UCNPs前后二级结构变化较小。以亲合素化的NaYF4∶Er3+,Yb3+UCNPs为供体;受体为生物素标记的藻红蛋白。通过亲合素—生物素系统拉近供体和受体,引发共振能量传递。当体系中加入自由的生物素分子,它们竞争地与UCNPs表面的亲合素结合,抑制能量传递过程,从而荧光光谱发生变化。根据这种光谱变化与加入生物素量之间的关系,对其进行定量检测,获得了纳摩尔级的检测限。 展开更多

关键词 上转换纳米晶 荧光共振能量传递 均相荧光分析

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基于量子点的新型均相荧光免疫分析技术 被引量：2

5

作者 陈玫君 陈振华 +3 位作者 吴英松 任志奇 李思雯 刘天才 《中国科技论文》 CAS 北大核心 2013年第6期487-491,共5页

研究一种检测人血清中癌胚抗原(CEA)的新型量子点均相免疫分析方法。制备还原型谷胱甘肽包被的水溶性量子点(QDs),偶联上抗CEA单克隆抗体,使异硫氰基荧光素(FITC)偶联上另一株抗CEA单克隆抗体,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与... 研究一种检测人血清中癌胚抗原(CEA)的新型量子点均相免疫分析方法。制备还原型谷胱甘肽包被的水溶性量子点(QDs),偶联上抗CEA单克隆抗体,使异硫氰基荧光素(FITC)偶联上另一株抗CEA单克隆抗体,采用双抗体夹心法模式,充分利用两株抗体与CEA抗原的相互作用,从而验证QDs、FTTC两者与抗体偶联的生物活性,并研究QDs用于均相荧光共振能量转移(HFRET)免疫分析中的可行性与实用性。结果表明,FITC与QDs之间能够发生能量转移,其荧光共振能量转移信号与CEA浓度成线性相关,其工作曲线为LogY=2.504+0.154LogX(r2=0.981 97,P=0.002),并计算出其分析灵敏度为0.4ng/mL。该新型均相荧光免疫分析方法具有不需冲洗掉游离荧光标记物、灵敏度高等优势,为今后实现快速便捷、多通道、高灵敏度、微量化、自动化及高通量化的生物医学传感技术和现代免疫分析技术提供科学依据。 展开更多

关键词 量子点 双抗体夹心法 荧光共振能量转移 均相荧光免疫分析

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抗体类生物治疗药物活性测定方法 被引量：10

6

作者 王兰 徐刚领 +1 位作者 高凯 王军志 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2015年第6期101-108,共8页

抗体类生物治疗药物的活性测定在质量控制中至关重要。目前抗体药物的活性分析方法主要是体外(in vitro)检测,其中基于细胞的分析方法由于其具有操作简便,周期短,特异性好,变异度小等优点得到广泛应用。为了获得反应性理想的细胞和简便... 抗体类生物治疗药物的活性测定在质量控制中至关重要。目前抗体药物的活性分析方法主要是体外(in vitro)检测,其中基于细胞的分析方法由于其具有操作简便,周期短,特异性好,变异度小等优点得到广泛应用。为了获得反应性理想的细胞和简便易行的检测方法,构建转基因细胞成为目前常用的策略之一。此外,一些新型技术也快速应用于抗体类药物的活性评价中。结合抗体类生物治疗药物活性测定方法的现状以及发展趋势,主要从基于细胞、转基因细胞以及新技术应用三方面对抗体药物活性测定方法进行简要综述,为抗体药物的研发和质量控制提供新思路。 展开更多

关键词 抗体类生物治疗药物 活性测定 转基因细胞 表面等离子共振 均相时间分辨荧光 Alpha技术

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纳米均相时间分辨荧光免疫法检测脱氧雪腐镰刀菌烯醇方法的建立 被引量：10

7

作者 周彬 高雷 +3 位作者 金坚 陈蕴 黄飚 赵卫国 《食品工业科技》 CAS CSCD 北大核心 2010年第8期338-342,共5页

目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测... 目的:利用抗脱氧雪腐镰刀菌烯醇(DON)多克隆抗体,采用纳米均相时间分辨荧光免疫法测定技术(AlphaLISA)建立间接竞争DON定量检测方法。方法:DON-BSA包被发光微粒,生物素化羊抗兔抗体与包被有链霉素的感光微粒共同构成检测试剂,优化检测条件并评价检测性能。结果:该方法的灵敏度为0.007ng/mL,检测范围为0.007～100ng/mL,批内批间变异系数均<5%。不同样品添加回收实验:玉米、小麦、啤酒回收率分别为84%～110%、67%～100%、74%～100%。结论:DON-AlphaLISA是目前DON检测中最灵敏的方法之一,该分析方法稳定性好,可测范围宽,具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 脱氧雪腐镰刀烯醇 生物毒素 纳米均相时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)

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基于NF-κB信号通路的高通量药物筛选细胞炎症模型的建立 被引量：8

8

作者 王楠楠 童晔玲 +2 位作者 刘霞 黄飞华 朱婉萍 《中国现代应用药学》 CAS CSCD 北大核心 2019年第4期397-402,共6页

目的建立均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度... 目的建立均相时间分辨荧光(homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF)测定炎症细胞模型中NF-κB的方法,为高通量筛选呼吸道炎症药物提供实验依据。方法采用HTRF检测细胞中Total-NF-κB及Phospho-NF-κB比率来确定NF-κB磷酸化程度。观察不同细胞密度(每孔5,25,50,100,150 k)、不同刺激因子(TNF-α、LPS)、不同作用时间(10,30,60 min)等条件对支气管平滑肌细胞(BSMC)、支气管上皮细胞(HBE) NF-κB磷酸化的影响,建立炎症细胞模型及HTRF测定NF-κB的方法。结果采用HBE细胞,细胞密度为每孔10 k,刺激因子TNF-α(10 ng·mL^(-1))刺激细胞,刺激10 min建立炎症细胞模型,可使细胞中NF-κB磷酸化水平达到52.6%,与正常对照组(14.2%)相比,有明显升高。结论成功建立了快速、特异性高、操作简便的HTRF测定细胞炎症模型中NF-κB磷酸化程度的方法,为气道炎症药物筛选研究提供了依据。 展开更多

关键词 均相时间分辨荧光 细胞炎症模型 NF-ΚB

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UPLC-Q-TOF-MS分析鸡血藤乙酸乙酯提取物中抑制表皮生长因子受体活性成分 被引量：8

9

作者 王冬梅 林森森 +1 位作者 郑司浩 黄林芳 《北京中医药大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2014年第1期58-62,共5页

目的应用均相时间分辨荧光（HTRF）技术，筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（EGFR）活性的鸡血藤提取物，同时采用超高效液相色谱．飞行时间质谱联用技术（UPLC—Q—TOF．MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法药材经石油醚渗滤、乙醇... 目的应用均相时间分辨荧光（HTRF）技术，筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（EGFR）活性的鸡血藤提取物，同时采用超高效液相色谱．飞行时间质谱联用技术（UPLC—Q—TOF．MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后，得到4个提取部位。采用HTRF法检测鸡血藤乙酸乙酯提取物对EGFR的抑制作用，计算提取物对EGFR的抑制率。采用ACQUITYUPLCBEH C-18色谱柱，以0．1％甲酸水溶液（A）．乙腈（B）为流动相梯度洗脱，200～400nm扫描，使用ESI离子源，在正离子模式下采集数据。结果首次发现鸡血藤的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性，IC-18为2．277mg／L，并从其活性部位中分析鉴定出15个化学物，主要成分为黄酮类化合物，其中10个分别是儿茶素．儿茶素，阿福豆素一儿茶素，杨梅素-3＇-O—β—D吡喃木糖苷，芒柄花苷，芒柄花黄素，Afrormosin，表没食子儿茶素，催吐萝芙木醇-9-O-木糖-（1→6）葡萄糖苷，木犀草苷，没食子儿茶素．儿茶素；5个未知成分。儿茶素、表没食子儿茶素、芒柄花黄素为主要活性成分。结论鸡血藤乙酸乙酯提取物所含的黄酮类成分为抑制EGFR活性的主要成分，本研究以期为其在抗癌方面的应用提供理论依据，同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。 展开更多

关键词 鸡血藤 表皮生长因子受体抑制剂 均相时间分辨荧光 有效成分 超高效液相色谱-飞行时 间质谱联用技术

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荧光技术在高通量药物筛选中的应用 被引量：5

10

作者 张怡轩 韩云波 《中国药学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2009年第11期801-804,共4页

目的高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一。荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述。方法查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应... 目的高通量筛选是现代发现药物先导化合物的主要手段之一。荧光技术在高通量药物筛选中被广泛使用,本文对荧光技术在高通量药物筛选中的研究进展进行综述。方法查阅近年国内外文献,对7种荧光检测技术的原理及其在高通量药物筛选中的应用情况进行归纳总结,包括荧光强度分析法、荧光偏振检测法、荧光共振能量转移检测法、均相时间分辨荧光检测法、荧光关联光谱、荧光成像分析、荧光报告系统。结果与结论现在已经建成多种高通量药物筛选模型,利用荧光检测技术进行高通量药物筛选具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 高通量筛选 荧光强度分析 荧光偏振检测 荧光共振能量转移检测 均相时间分辨荧光检测

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基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)的HSP90-HOP相互作用抑制剂活性测试方法的构建及其应用 被引量：5

11

作者 王慧洁 周子涵 +3 位作者 徐嘉辰 姜奋 尤启冬 徐晓莉 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第4期592-597,共6页

热休克蛋白90(HSP90)是细胞内大量表达的一类蛋白,其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。HSP90的众多客户蛋白与肿瘤的发生发展有重要的关系,因此抑制HSP90的功能可以使这些癌症相关蛋白降解,从而诱导肿瘤细胞凋亡,达到治... 热休克蛋白90(HSP90)是细胞内大量表达的一类蛋白,其主要功能是辅助细胞内其他蛋白(客户蛋白)的成熟。HSP90的众多客户蛋白与肿瘤的发生发展有重要的关系,因此抑制HSP90的功能可以使这些癌症相关蛋白降解,从而诱导肿瘤细胞凋亡,达到治疗肿瘤的目的。HSP90在发挥功能时还需要与辅伴侣蛋白HOP相互作用,因此靶向HSP90-HOP的相互作用开展抑制剂研发成为抑制HSP90伴侣系统的新策略。本文基于均相时间分辨荧光技术(HTRF)构建了稳定的用于测试HSP90-HOP相互作用抑制剂活性的方法,并用该方法研究了HSP90 C-端五肽MEEVD及其突变肽段对HSP90-HOP相互作用的抑制活性,为新型HSP90-HOP相互作用抑制剂的筛选和发现提供了重要基础。 展开更多

关键词 热休克蛋白90 HOP 均相时间分辨荧光技术 蛋白-蛋白相互作用

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以GLP-1受体为靶点的药物筛选模型的建立及功能鉴定 被引量：5

12

作者 黎思彤 郑雪萍 +4 位作者 杨学敏 聂涛 陈健文 刘培庆 李民 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2017年第2期285-289,共5页

目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,... 目的以GLP-1受体为靶点,建立GLP-1类似物活性检测的细胞模型,为GLP-1类似物以及GLP-1受体激动剂的药物筛选提供一种简单可靠的评价方法。方法首先将人源GLP-1受体基因插入pEGFP-N3,构建真核表达载体pEGFP-GLP-1R,并转染至HEK293A细胞中,经G418压力筛选后获得稳定表达GLP-1R-GFP的293A细胞株,然后通过GFP荧光信号和Western blot检测GLP-1R-GFP融合蛋白在该细胞中的表达与分布;最后利用GLP-1类似物利拉鲁肽刺激细胞,均相时间分辨荧光法检测细胞内cAMP含量变化。结果成功构建了GLP-1R-GFP-293A稳转细胞株,GLP-1RGFP蛋白主要分布在细胞膜表面,该细胞对GLP-1类似物利拉鲁肽具有高灵敏度和产生cAMP的特异性反应。结论利用所构建的细胞模型,可对小分子和GLP-1类似物进行体外活性分析,为筛选GLP-1受体激动剂奠定了模型基础。 展开更多

关键词 CAMP GLP-1受体 细胞模型 融合蛋白 均相时间分辨荧光法 糖尿病

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均相时间分辨荧光(HTRF)法测定重组单抗含量 被引量：4

13

作者 邓春平 秦玉敏 +2 位作者 邓巧春 王博 彭育才 《中国生物工程杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第12期64-68,共5页

建立了一种HTRF检测方法，可以快速、简便、稳定地测定重组单克隆抗体的含量。将检测试剂、标准品及待测样品加入96孔板，孵育后即可在酶标仪上读取荧光信号值，用软件对信号值进行四参数曲线拟合，绘制标准曲线，根据标准品四参数方程... 建立了一种HTRF检测方法，可以快速、简便、稳定地测定重组单克隆抗体的含量。将检测试剂、标准品及待测样品加入96孔板，孵育后即可在酶标仪上读取荧光信号值，用软件对信号值进行四参数曲线拟合，绘制标准曲线，根据标准品四参数方程计算待测样品中抗体的含量；同时对方法进行了验证。结果表明：该方法专属性强，抗体含量测定范围为25～1000ng/ml，线性相关系数在0．99以上，回收率范围为92．8％～103．6％，平均为98．9％；该法精密度较好，精密度的变异系数范围为0．2％～11．6％，平均为4．3％。适用于生物制药工艺开发过程中细胞培养上清、纯化产物及制剂中抗体含量的测定。 展开更多

关键词 均相时间分辨荧光 荧光共振能量转移 单克隆抗体

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五倍子抑制表皮生长因子受体活性及活性部位的UPLC/Q-TOF-MS分析 被引量：4

14

作者 王冬梅 林森森 +2 位作者 郑司浩 黄林芳 陈士林 《中草药》 CAS CSCD 北大核心 2013年第18期2515-2519,共5页

目的 应用均相时间分辨荧光（HTRF）技术，筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（EGFR）活性的五倍子提取物，同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC/Q-TOF-MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法 药材经石油... 目的 应用均相时间分辨荧光（HTRF）技术，筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（EGFR）活性的五倍子提取物，同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（UPLC/Q-TOF-MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法 药材经石油醚渗滤、乙醇提取、醋酸乙酯萃取和水煎煮后，得到4个提取部位。采用HTRF法检测五倍子醋酸乙酯提取物对EGFR的抑制作用，并计算抑制率。采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱，以0.1%甲酸水溶液-乙腈为流动相，梯度洗脱，200～400 nm扫描，使用ESI离子源，在正离子模式下采集数据。结果 五倍子的醋酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性，并从其活性部位中分析鉴定出14个化合物，主要成分为鞣质类化合物，其中11个分别为石榴皮鞣素、香草醛、六羟基二苯酰胺葡萄糖、鞣花鞣质、杨梅苷、原儿茶素、五倍子鞣质倍酰葡萄糖、五倍子鞣质、鞣花酸、3, 5-二咖啡酰奎宁酸、monogalloyl-glucose，另外3个为未知成分。结论 本研究首次发现五倍子醋酸乙酯提取部位具有较强的EGFR抑制活性，IC50为5.528 μg/mL，Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息鉴定表明五倍子醋酸乙酯提取物中主要为鞣质类成分，其中五倍子鞣质、鞣花酸、鞣花鞣质为最主要成分。五倍子中含有的鞣质类成分为抑制EGFR活性的主要成分，为其在抗癌方面的应用提供理论依据，同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体抑制剂 均相时间分辨荧光 五倍子 有效成分 UPLC Q—TOF—MS 鞣质

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均相时间分辨荧光法检测德谷胰岛素生物学活性

15

作者 高婧 王绿音 +3 位作者 李晶 吕萍 高向东 梁成罡 《药学学报》 CAS CSCD 北大核心 2024年第12期3347-3353,共7页

本研究以CHO_INSR_1284转基因细胞系为靶细胞,利用均相时间分辨荧光技术建立德谷胰岛素生物学活性检测方法。对关键参数进行优化,并依据中国药典(2020版四部通则9401、1431)进行验证。结果表明,德谷胰岛素在本方法中存在良好的剂量效应... 本研究以CHO_INSR_1284转基因细胞系为靶细胞,利用均相时间分辨荧光技术建立德谷胰岛素生物学活性检测方法。对关键参数进行优化,并依据中国药典(2020版四部通则9401、1431)进行验证。结果表明,德谷胰岛素在本方法中存在良好的剂量效应关系,符合四参数曲线。经优化,细胞种板密度为每毫升3.5×10^(5)个,德谷胰岛素初始浓度为57.18μg·m L^(-1),稀释倍数为4倍,刺激时间为45 min,孵育时间为4 h。本方法专属性强,5个效价水平几何变异系数GCV%为4.1%~10.6%,线性拟合的直线回归方程为y=1.015x-0.0277,R^(2)=0.9996,结果证明此方法具有的较好中间精密度和线性。且回归项非常显著(P<0.01),偏离平行项和模型失拟项均不显著(P≥0.05),均符合中国药典要求。本研究建立了一种基于均相时间分辨荧光技术的德谷胰岛素生物学活性检测方法,该方法可用于德谷胰岛素类产品的生物学活性评价和质量控制。 展开更多

关键词 生物学活性 德谷胰岛素 脂肪酸修饰胰岛素 转基因细胞 均相时间分辨荧光技术

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AlphaLISA技术在食品安全检测中的研究进展 被引量：4

16

作者 洪小柳 吕敬章 +3 位作者 张恒 范放 刘慧玲 赵芳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第1期198-202,共5页

纳米均相时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)是一种基于纳米微珠的光激化学发光的新型均相检测技术,较传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)具有均相、免清洗、敏感度高、特异性强等特点。本文介绍了AlphaLISA的原理和特点,简要总结了近年来国内外... 纳米均相时间分辨荧光免疫法(AlphaLISA)是一种基于纳米微珠的光激化学发光的新型均相检测技术,较传统的酶联免疫吸附测定(ELISA)具有均相、免清洗、敏感度高、特异性强等特点。本文介绍了AlphaLISA的原理和特点,简要总结了近年来国内外AlphaLISA技术的应用研究,重点综述了食品安全领域(包括生物毒素和药物残留)的研究进展,并对此技术的发展前景进行了展望。 展开更多

关键词 纳米均相时间分辨荧光免疫法 检测 食品安全

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盐酸克伦特罗的AlphaLISA检测方法的建立 被引量：4

17

作者 赵芳 岳振峰 +5 位作者 吕敬章 洪丹漩 张恒 刘慧玲 黄欣迪 洪小柳 《食品安全质量检测学报》 CAS 2014年第2期497-502,共6页

目的：采用纳米均相时间分辨荧光免疫技术(amplified luminescent proximity homogeneous assay, Alpha-LISA)建立高灵敏检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)残留的方法。方法在发光微粒上固定 CLB,与游离的CLB共同竞争固定在感光微粒上... 目的：采用纳米均相时间分辨荧光免疫技术(amplified luminescent proximity homogeneous assay, Alpha-LISA)建立高灵敏检测盐酸克伦特罗(clenbuterol, CLB)残留的方法。方法在发光微粒上固定 CLB,与游离的CLB共同竞争固定在感光微粒上的CLB单克隆抗体,优化检测条件并进行方法学考核。结果该方法的灵敏度为0.04 ng/mL。猪肉样品回收率在83%~109%之间,牛肉样品回收率在92%~112%之间；猪肉样品检测的批内变异系数CV<10%、批间变异系数CV<15%。与特布他林、沙丁胺醇的交叉反应率分别为34.5%、25.7%,与莱克多巴胺、妥布特罗、齐帕特罗无交叉反应。结论 CLB-AlphaLISA 检测肉类中克伦特罗残留具有简单、快速、灵敏性高、特异性强、稳定等特点,具有广阔的应用前景。 展开更多

关键词 盐酸克伦特罗 纳米均相时间分辨荧光免疫技术(AlphaLISA) 竞争反应

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小鼠肿瘤坏死因子ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测方法的建立及评估 被引量：3

18

作者 王柯 张艺 +4 位作者 张珏 周彬 马智鸿 朱岚 黄飚 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第2期152-155,166,共5页

目的分别建立ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测小鼠肿瘤坏死因子(mTNF-α)的方法,对3种检测技术进行评估。方法采用两株针对mTNF-α不同表位的单克隆抗体,分别构建双抗体夹心法mTNF-α-ELISA、mTNF-α-TRFIA、mT-NF-α-ALPHAScreen,对以上... 目的分别建立ELISA、TRFIA及ALPHAScreen检测小鼠肿瘤坏死因子(mTNF-α)的方法,对3种检测技术进行评估。方法采用两株针对mTNF-α不同表位的单克隆抗体,分别构建双抗体夹心法mTNF-α-ELISA、mTNF-α-TRFIA、mT-NF-α-ALPHAScreen,对以上3种检测方法进行反应动力学,方法学参数和相关性的比较。结果 ALPHAScreen采用均相反应系统,反应速度最快。TRFIA和ALPHAScreen由于采用了稀土离子作为标记物,其灵敏度和检测范围大大高于ELISA。样品检测结果表明,3种方法的相关性较好。结论本文建立的mTNF-α-TRFIA和mTNF-α-ALPHAScreen具有很好的应用前景。 展开更多

关键词 酶联吸附分析 时间分辨荧光免疫分析 纳米均相时间分辨荧光免疫分析 肿瘤坏死因子

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UPLC-Q-TOF-MS分析姜黄乙酸乙酯提取物抑制表皮生长因子受体活性的成分 被引量：3

19

作者 王冬梅 林森森 +1 位作者 郑司浩 黄林芳 《中国新药杂志》 CAS CSCD 北大核心 2014年第2期149-153,共5页

目的：应用均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）活性的姜黄提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪... 目的：应用均相时间分辨荧光（homogeneous time-resolved fluorescence,HTRF）技术,筛选发现具有抑制表皮生长因子受体（epidermal growth factor receptor,EGFR）活性的姜黄提取物,同时采用超高效液相色谱与串联四级杆飞行时间质谱仪联用技术（ultra-performance liquid chromatography/quadrupole time-offlight mass spectrometry,UPLC/Q-TOF-MS）对其活性部位进行分析和鉴别。方法：药材经石油醚渗滤、乙醇提取、乙酸乙酯萃取和水煎煮后,得到4个提取部位。采用HTRF法检测姜黄乙酸乙酯提取物对ERFR的抑制作用,计算提取物对EFFR的抑制率。采用ACQUITY UPLC BEH C18色谱柱,以0.1%甲酸水溶液（A）-乙腈（B）为流动相梯度洗脱,200~400 nm扫描,使用ESI离子源,在正离子模式下采集数据。结果：姜黄的乙酸乙酯部位显示较强的EGFR抑制活性,并从其活性部位中分析鉴定出9个化学物,主要成分为姜黄素类化合物,其中6个分别是香豆酸、姜黄酮、双去甲氧基姜黄素、去甲氧基姜黄素、姜黄素、1-（4-羟基-3,5-二甲氧基苯基）-7-（4-羟基-3-甲氧基苯基）-1,6-庚二烯-3,5-二酮,3个未知成分。结论：研究发现姜黄乙酸乙酯提取部位具有较强的EGFR抑制活性,IC50为3.621μg·mL-1,根据Q-TOF-MS测定的相对分子质量及正离子信息,鉴定了姜黄乙酸乙酯提取物主要为姜黄素类成分,其中以姜黄素、去甲氧基姜黄素、双去甲氧基姜黄素为主要活性成分,说明姜黄素类化合物为抑制EGFR活性的主要成分,为其在抗癌方面的应用提供理论依据,同时为进一步跟踪分离活性成分奠定基础。 展开更多

关键词 表皮生长因子受体抑制剂 均相时间分辨荧光 姜黄 有效成分 UPLC Q-TOF-MS

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BACE1抑制剂分子水平高通量筛选体系的建立 被引量：3

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作者 周金武 程肖蕊 +2 位作者 程军平 周文霞 张永祥 《国际药学研究杂志》 CAS 2010年第4期302-309,共8页

目的建立体外分子水平β-分泌酶(BACE1)抑制剂高通量筛选体系。方法采用均相时间分辨荧光法(HTRF),通过优化反应时间、酶浓度、检测仪器等实验条件,建立BACE1抑制剂高通量筛选体系,根据待测样品对BACE1活性抑制程度筛选其抑制剂。结果采... 目的建立体外分子水平β-分泌酶(BACE1)抑制剂高通量筛选体系。方法采用均相时间分辨荧光法(HTRF),通过优化反应时间、酶浓度、检测仪器等实验条件,建立BACE1抑制剂高通量筛选体系,根据待测样品对BACE1活性抑制程度筛选其抑制剂。结果采用HTRF法建立了BACE1抑制剂高通量筛选体系,其中反应时间确定为6h、BACE1浓度为670U/L,采用VICTOR3酶标仪测得信噪比为649.6,信背比为44.6,Z′因子为0.91,变异系数小于10%,并筛选到一系列IC50小于10-6mol/L的化合物。结论采用HTRF法建立的BACE1抑制剂筛选体系灵敏度高、特异性和稳定性好,可用于BACE1抑制剂的高通量筛选。 展开更多

关键词 Β分泌酶 BACE1抑制剂 均相时间分辨荧光 高通量筛选 Z′因子

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