D-二聚体、抗凝血酶Ⅲ、凝血因子Ⅷ、凝血因子Ⅸ检测对肝脏疾病诊断的意义 被引量：19

1

作者 钟洪明 黄宇清 曾荔山 《国际检验医学杂志》 CAS 2010年第7期707-709,共3页

目的研究凝血因子、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性和D-二聚体(D-D)含量测定对肝脏疾病的诊断意义。方法对126例肝脏疾病患者和30例健康体检者的血浆样本用免疫比浊法测定D-二聚体含量,用凝固法测定凝血因子Ⅷ和Ⅸ活性;用发色底物法检测抗凝血... 目的研究凝血因子、抗凝血酶Ⅲ(AT-Ⅲ)活性和D-二聚体(D-D)含量测定对肝脏疾病的诊断意义。方法对126例肝脏疾病患者和30例健康体检者的血浆样本用免疫比浊法测定D-二聚体含量,用凝固法测定凝血因子Ⅷ和Ⅸ活性;用发色底物法检测抗凝血酶Ⅲ活性。结果肝癌组和肝硬化组血浆D-二聚体含量与健康对照组比较显著升高(P<0.05),而肝炎组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05);不同类型肝病患者凝血因子Ⅷ活性与健康对照组相比较显著升高(P<0.05),肝癌组凝血因子Ⅸ活性与健康对照组比较有显著升高(P<0.01),肝炎组和肝硬化组凝血因子Ⅸ活性与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),抗凝血酶Ⅲ与健康对照组相比均显著降低(P<0.01)。结论 D-二聚体含量、凝血因子Ⅷ活性增加和抗凝血酶Ⅲ活性降低是肝病患者疾病发展的敏感性指标,而凝血因子Ⅸ活性可能只是反映肝癌疾病的敏感指标。 展开更多

关键词 抗凝血酶III 因子Ⅷ 因子ix 肝疾病

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新生儿血友病七例 被引量：11

2

作者 刘靖媛 刘红 +4 位作者 吴润晖 靳绯 李耿 翁景文 吴海兰 《中国新生儿科杂志》 CAS 2013年第3期159-162,共4页

目的探讨新生儿血友病的临床特点及诊治经验。方法选择本院新生儿重症监护病房2010年4月至2012年3月收治的新生儿血友病患儿,回顾性分析其临床特点及诊疗过程,并复习国内外相关文献。结果研究期间收治的7例新生儿血友病患儿均为男性,有... 目的探讨新生儿血友病的临床特点及诊治经验。方法选择本院新生儿重症监护病房2010年4月至2012年3月收治的新生儿血友病患儿,回顾性分析其临床特点及诊疗过程,并复习国内外相关文献。结果研究期间收治的7例新生儿血友病患儿均为男性,有出血表现,首次出血日龄平均3.7天,2例有明确血友病家族史。3例入院时有休克,出血部位包括头颅血肿、颅内、皮下、肌肉、肾脏出血等。7例患儿活化部分凝血活酶时间均延长,凝血酶原时间、血小板计数等正常,5例因子Ⅷ促凝活性降低诊断血友病A,2例因子Ⅸ促凝活性降低诊断血友病B。入院后予对症治疗,确诊后,血友病A予以静脉输注Ⅷ因子,血友病B予以凝血酶原复合物。6例好转,1例家长放弃。结论新生儿期发病的血友病多起病急,对有出血表现者,尽早进行血友病筛选及确诊试验,以提高该病在新生儿期的诊断率、改善预后。 展开更多

关键词 血友病 出血性疾病 因子Ⅷ 因子ix 婴儿 新生

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降钙素原联合凝血因子预测肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎预后的研究 被引量：10

3

作者 盛棋跃 刘敏慧 +4 位作者 陈海君 郭玉香 应华永 汪建明 盛吉芳 《中华临床感染病杂志》 2018年第5期353-358,共6页

目的 探究降钙素原（PCT）联合凝血因子在评价肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎（SBP）短期预后中的价值.方法 回顾性分析2014年6月至2017年10月金华市中心医院感染科128例肝硬化并发SBP住院患者临床资料.根据患者3个月生存情况,将其分为... 目的 探究降钙素原（PCT）联合凝血因子在评价肝硬化并发自发性细菌性腹膜炎（SBP）短期预后中的价值.方法 回顾性分析2014年6月至2017年10月金华市中心医院感染科128例肝硬化并发SBP住院患者临床资料.根据患者3个月生存情况,将其分为存活组（n=83）和死亡组（n=45）,采用多因素Logistic回归分析影响肝硬化并发SBP的预后因素,计算回归系数作为权重,建立预测指数模型.计算受试者工作曲线下面积（AUC）,评价PCT联合凝血因子预测肝硬化并发SBP预后的准确性.结果 单因素分析显示,基线PCT、总胆红素（TBil）、血肌酐（Scr）、凝血酶原时间（PT）、凝血酶原活动度（PTA）及凝血因子Ⅱ、Ⅴ、Ⅶ、Ⅸ、Ⅹ、Ⅺ、Ⅻ水平是影响肝硬化并发SBP患者预后的相关因素（P〈0.01）.多因素Logistic回归分析显示,PCT、凝血因子Ⅴ和Ⅸ均能独立预测肝硬化并发SBP患者短期预后,其模型为Logit（P）=1.200＋0.099×PCT-0.026×凝血因子Ⅴ-0.038×凝血因子Ⅸ,模型的敏感度为0.822,特异度为0.675,AUC为0.829.与经典MELD评分比较,差异无统计学意义（P〉0.05）.结论 基于PCT与凝血因子Ⅴ、Ⅸ的预测指数模型能较好的预测肝硬化并发SBP患者的短期生存率,其总体预后的评估能力与MELD评分相仿,但模型简单,计算简便,临床较易掌握. 展开更多

关键词 因子V 因子ix 降钙素原 肝硬化 自发性细菌性腹膜炎 预后

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应用多聚酶链反应和双链DNA循环测序对FIX基因点突变的研究 被引量：7

4

作者 王宁遂 邓兵 朱静 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1995年第5期227-228,共2页

应用多聚酶链反应扩增因子ＩＸ（ＦＩＸ）基因外显子８的４８１ｂｐＤＮＡ片段，并利用双链ＤＮＡ循环测序，对两例血友病乙ＦＩＸ基因缺陷进行了研究。发现这两例都发生在３１１１９位的碱基替换，Ｇ（ＣＧＡ）→Ａ（ＣＡＡ）。该突变... 应用多聚酶链反应扩增因子ＩＸ（ＦＩＸ）基因外显子８的４８１ｂｐＤＮＡ片段，并利用双链ＤＮＡ循环测序，对两例血友病乙ＦＩＸ基因缺陷进行了研究。发现这两例都发生在３１１１９位的碱基替换，Ｇ（ＣＧＡ）→Ａ（ＣＡＡ）。该突变为ＦＩＸ基因ＣＧ双核苷酸突变热点，改变了正常ＦＩＸ的结构和凝血功能，因而导致血友病乙。重复点突变的发现，对血友病乙分子缺陷的发病机制研究十分重要。 展开更多

关键词 血友病 因子ix 点突变 聚合酶链反应

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高分辨率熔解曲线分析在血友病BF9基因突变检测中的应用 被引量：1

5

作者 郁婷婷 戴菁 +1 位作者 傅启华 王学锋 《中华检验医学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2012年第7期620-624,共5页

目的利用高分辨率熔解曲线（HRM）技术建立简便有效的血友病B（HB）基因诊断的方法。方法收集2005年1月至2010年6月就诊于上海瑞金医院的55例HB患者的外周血标本，抽提外周血基因组DNA。采用PCR扩增结合测序的方法对40例HB患者进行F9基... 目的利用高分辨率熔解曲线（HRM）技术建立简便有效的血友病B（HB）基因诊断的方法。方法收集2005年1月至2010年6月就诊于上海瑞金医院的55例HB患者的外周血标本，抽提外周血基因组DNA。采用PCR扩增结合测序的方法对40例HB患者进行F9基因突变检测，利用其中21例带有阳基因1～7号外显子突变的HB患者标本建立相应的HRM突变筛查方法。采用阳基因1～7号外显子的PCR—HRM突变筛查方法及8号外显子的DNA直接测序方法，对15例未知F、9基因突变的HB患者进行基因诊断。结果通过PCR扩增结合测序，40例HB患者均检测到F9基因突变。21例带有D基因1～7号外显子突变的HB患者标本中，19例（90％）患者的突变可通过PCR．HRM技术进行检测。通过D基因1～7号外显子PCR—HRM突变筛查及8号外显子的DNA直接测序，15例未知F、9基因突变的HB患者均检测到F9基因突变。55例HB患者中共检测到34种F9基因突变。结论HB基因诊断的新方法，即PCR．HRM筛查阳基因1～7号外显子突变结合8号外显子的DNA测序法操作简便、结果可靠。 展开更多

关键词 血友病B 因子ix 突变 聚合酶链反应

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microRNA125对无义突变的人凝血因子Ⅸ基因调控的分子机制 被引量：1

6

作者 王刚 杨林花 +5 位作者 柴宝峰 张翠明 王梅芳 王琨 陈玙 李玲 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2016年第5期388-392,共5页

目的构建人凝血因子Ⅸ小基因（Mini．hF9）及无义突变体，检测其mRNA表达水平，分析microRNA125对无义突变的F9基因表达调控的分子机制。方法利用PCR定点突变技术构建若干无义突变的人Mini—hF9并转染哺乳动物细胞HEK293T等，同时转染mi... 目的构建人凝血因子Ⅸ小基因（Mini．hF9）及无义突变体，检测其mRNA表达水平，分析microRNA125对无义突变的F9基因表达调控的分子机制。方法利用PCR定点突变技术构建若干无义突变的人Mini—hF9并转染哺乳动物细胞HEK293T等，同时转染miR－125模拟物，通过实时荧光定量PCR（q—PCR）检测Mini—hF9基因mRNA表达水平。结果成功构建了Mini—hF9并在细胞中正确剪接。成功构建了无义突变体M1（nt34G〉TinExon7）、M2（nt52G〉TinExon7）和M3（nt85G〉TinExon7）。M1和M2突变体中Mini．hF9基因mRNA表达水平分别为野生型的14．1％（t=-15．464，P=0．004）和22．4％（t=-15．755，P=0．004），通过放线菌酮处理实验证实这是由于无义介导的mRNA降解（nonsense—mediatedmRNAdecay,NMD）所致。分别转染miR-125a模拟物和miR-125b模拟物后，M1突变体中Mini-hF9基因mRNA水平分别升高到1．70倍（t=-4．883，P=-0．039）和2．40倍（t=-17．537，P=0．003），M2突变体Mini—hF9mRNA水平分别升高到2．02倍（t=-19．264，P=0．003）和2．07倍（t=-9．158，P=0．012）。结论无义突变发生的位置是触发NMD途径的一个关键因素；microRNA125能够通过抑制NMD途径提高无义突变的凝血因子Ⅸ的mRNA水平。 展开更多

关键词 因子ix 微RNAS 基因表达调控 无义介导的mRNA降解 Mini—hF9基因

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遗传病的基因治疗研究

7

作者 邱信芳 薛京伦 《自然科学进展（国家重点实验室通讯）》 1994年第5期573-579,共7页

遗传病的种类已不下4700余种,全世界患者有几百万人,患者除本身受到折磨外,还会把缺陷基因遗传给后代,给社会和家庭带来更多更大的悲剧。因此多年来一直在探索采用基因治疗手段去根治遗传病。经过20年的技术发展,遗传病的体细胞基因治... 遗传病的种类已不下4700余种,全世界患者有几百万人,患者除本身受到折磨外,还会把缺陷基因遗传给后代,给社会和家庭带来更多更大的悲剧。因此多年来一直在探索采用基因治疗手段去根治遗传病。经过20年的技术发展,遗传病的体细胞基因治疗已从实验室研究走向临床,并取得了初步成效。血友病B是10来种最适合用于研究体细胞基因治疗的病种之一,因为它的致病基因小,遗传规律清楚,调控又不那么要求精确。 展开更多

关键词 基因治疗 血友病B 遗传病 因子ix

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血友病乙基因治疗临床研究 被引量：18

8

作者 王健民 韩凤来 +7 位作者 杨健民 孟沛霖 闵碧荷 邱信芳 卢大儒 薛京伦 周洁民 王肖鹏 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第6期282-285,共4页

用逆转录病毒载体将人ＩＸ因子ｃＤＮＡ转入血友病乙患者皮肤成纤维细胞，体外培养扩增后与胶原混合皮下注射，作了２例临床基因治疗。注射细胞总数分别为１１．４×１０￣８和６×１０￣８，结果患者血浆ＩＸ：Ａｇ和ＩＸ：Ｃ... 用逆转录病毒载体将人ＩＸ因子ｃＤＮＡ转入血友病乙患者皮肤成纤维细胞，体外培养扩增后与胶原混合皮下注射，作了２例临床基因治疗。注射细胞总数分别为１１．４×１０￣８和６×１０￣８，结果患者血浆ＩＸ：Ａｇ和ＩＸ：Ｃ均升高，例１ＩＸ：Ａｇ由８４．２ｎｇ／ｍｌ升至２５１．０ｎｇ／ｍｌ，ＩＸ：Ｃ由２．１９％升至５．９２％。例２ＩＸ：Ａｇ由９８．５ｎｇ／ｍｌ升至１９９．１ｍｇ／ｍｌ，ＩＸ：Ｃ由２．４０％上升至４．１３％。已持续表达逾５００天，临床出血倾向有所改善，至今未发现与基因治疗相关的毒副反应。 展开更多

关键词 血友病乙 凝血因子ix 基因治疗

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转基因动物育种研究的现状与趋势 被引量：12

9

作者 刘岩 童佳 +4 位作者 张然 汤波 彭云乾 王淑辉 李宁 《中国医药生物技术》 CSCD 2009年第5期329-334,共6页

20世纪80年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中，使其得以表达的技术。转基因动物育种是指通过转基因的手段，从分子水平对动物进行改良，以期得到目标性状。1997年，克隆羊Dolly的诞生... 20世纪80年代以来发展的转基因动物技术是指将已知的外源基因导入动物细胞并稳定整合到基因组中，使其得以表达的技术。转基因动物育种是指通过转基因的手段，从分子水平对动物进行改良，以期得到目标性状。1997年，克隆羊Dolly的诞生，开创了哺乳动物体细胞核移植技术的先河，随后，乳腺中表达人凝血因子IX的转基因克隆羊Polly培育成功。 展开更多

关键词 转基因动物技术 育种 体细胞核移植技术 转基因克隆羊 人凝血因子ix 外源基因导入 动物细胞 分子水平

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带有人Ⅸ因子cDNA的反转录病毒载体的构建及其在血友病B患者皮肤成纤维细胞中的高效转移和表达 被引量：8

10

作者 戴一凡 邱信芳 +1 位作者 薛京伦 刘祖洞 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1990年第12期1284-1292,共9页

本文报道对血友病B实施基因治疗的可能性,首先将由SV40早期启动子,小鼠MT-1启动子和反转录病毒LTR启动子控制的Ⅸ因子cDNA构建到反转录病毒载体,然后用电穿孔法将构建的4个反转录病毒载体分别转入一株Amphotropic辅助细胞,PA317细胞,再... 本文报道对血友病B实施基因治疗的可能性,首先将由SV40早期启动子,小鼠MT-1启动子和反转录病毒LTR启动子控制的Ⅸ因子cDNA构建到反转录病毒载体,然后用电穿孔法将构建的4个反转录病毒载体分别转入一株Amphotropic辅助细胞,PA317细胞,再用一株人纤维肉瘤细胞,HT1080细胞,测定这些辅助细胞的产病毒滴度,可得到2×10~4CFU/ml到5×10~5CFU/ml左右的病毒感染颗粒,用ELISA分别测定转有不同病毒载体的PA317细胞的Ⅸ因子蛋白产量,发现LTR启动子的表达效率最高,Ⅸ因子蛋白的分泌速率可达584ng/10~6细胞/24h,而SV40早期启动子和MT-1启动子的表达效率分别只有它的1/10和1/20,将表达效率最高的反转录病毒载体pXL—Ⅸ 1转入一株取自血友病B患者原代培养的皮肤成纤维细胞后同样能产生较高浓度的Ⅸ因子蛋白,其分泌速率可达549ng/10~6细胞/24h,其中75％以上的Ⅸ因子具有凝血活性,从而达到了首先在体外培养细胞纠正Ⅸ因子基因缺陷的目的,实现了血友病B基因治疗的第一步。 展开更多

关键词 血友病B 基因治疗 凝血因子ix

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人类巨细胞病毒启动子控制的人Ⅸ因子cDNA在人体细胞中的高效表达 被引量：8

11

作者 王平 戴一凡 +1 位作者 邱信芳 薛京伦 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1991年第13期1021-1023,共3页

凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝系统的重要成分之一,它的缺乏或功能缺陷可导致血友病B.在血友病B基因治疗的研究中,如何提高Ⅸ因子蛋白的产量是关键问题之一。在以前的研究中,我们比较了SV40早期启动子、小鼠金属硫基因蛋白启动子和M... 凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝系统的重要成分之一,它的缺乏或功能缺陷可导致血友病B.在血友病B基因治疗的研究中,如何提高Ⅸ因子蛋白的产量是关键问题之一。在以前的研究中,我们比较了SV40早期启动子、小鼠金属硫基因蛋白启动子和Moloney小鼠白血病病毒LTR启动子的作用。 展开更多

关键词 HCMV 启动子 凝血因子ix 血友病B

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人凝血因子Ⅸ在家兔体内的持续表达 被引量：7

12

作者 周洁民 邱信芳 +2 位作者 卢大儒 陆建英 薛京伦 《中国科学（B辑）》 CSCD 北大核心 1992年第11期1189-1195,共7页

本文报道用构建有人凝血因子Ⅸ cDNA的重组质粒(pCMV Ⅸ)或重组反转录病毒(XLⅨ和N2CMVⅨ)转染家兔原代培养的皮肤成纤维细胞(RSF),经过选择后将转有人Ⅸ因子cDNA的细胞包埋于胶原基质,然后进行自体或同种异体移植。腹腔移植有RSF-XLⅨ... 本文报道用构建有人凝血因子Ⅸ cDNA的重组质粒(pCMV Ⅸ)或重组反转录病毒(XLⅨ和N2CMVⅨ)转染家兔原代培养的皮肤成纤维细胞(RSF),经过选择后将转有人Ⅸ因子cDNA的细胞包埋于胶原基质,然后进行自体或同种异体移植。腹腔移植有RSF-XLⅨ转化细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子表达水平可达100ng/ml,表达持续5个半月;腹腔移植有RSF-pCMVⅨ细胞的家兔血浆中人Ⅸ因子水平可高达2.95ng/ml,表达至今已超过10个月,而且仍在继续检测中。在移植方法上,我们做了进一步改进,将收缩后的细胞胶原块移植改为细胞胶原液注射,使移植方法更简便有效,无需进行手术,用此法皮下移植有RSF-N2CMVⅨ转化细胞的家兔血浆中,人Ⅸ因子表达水平可高达480ng/ml,表达至今已有3个多月,其持续表达的趋势仍很乐观,为基因治疗的临床试验提供了一条更加切实可行的技术路线。 展开更多

关键词 基因治疗 人 凝血因子ix 血友病

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重组腺相关病毒(rAAV)介导的人凝血因子Ⅸ高活性突变衍生物在血友病B基因治疗研究中的应用 被引量：4

13

作者 陆华中 陈立 +7 位作者 王红卫 卢大儒 邱信芳 薛京伦 伍志坚 吴小兵 王学峰 王鸿利 《中国科学（C辑）》 CSCD 北大核心 2001年第6期523-528,共6页

采用定点诱变技术,将R338A点突变引入人凝血因子Ⅸ基因,并构建于AAV载体上,以rHSV/AAV杂合辅助病毒系统介导制备rAAV-hFIX重组病毒,然后,经肌肉注射对血友病B小鼠进行治疗实验,观察该突变基因在小鼠体内的表达、活性以及机体对该突变衍... 采用定点诱变技术,将R338A点突变引入人凝血因子Ⅸ基因,并构建于AAV载体上,以rHSV/AAV杂合辅助病毒系统介导制备rAAV-hFIX重组病毒,然后,经肌肉注射对血友病B小鼠进行治疗实验,观察该突变基因在小鼠体内的表达、活性以及机体对该突变衍生物的免疫反应与治疗效果.结果显示:（i）治疗小鼠体内可检测到hFIX-R338A突变衍生物的存在,并持续15周以上;（ii）突变衍生物hFIX-R338A在小鼠血浆中的凝血活性达（34.2±5.23）％,显著高于野生型Ⅸ因子凝血活性（（14.27±3.4）％）;（iii）治疗小鼠体内未检测到抗Ⅸ因子突变衍生物抗体的存在;（iv）未发现与治疗相关的局部及全身性毒副作用.提示:以AAV介导人凝血因子Ⅸ高活性突变衍生物hFIX-R338A基因治疗可能成为替代野生型Ⅸ因子进行血友病B基因治疗的一个更为有效的途径. 展开更多

关键词 血友病B 凝血因子ix 突变衍生物 重组腺相关病毒 基因治疗 定点诱变技术 凝血功能

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人凝血因子Ⅸ基因在中国仓鼠卵巢细胞中的转移及表达 被引量：7

14

作者 戴一凡 刘坚 +1 位作者 邱信芳 薛京伦 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1989年第12期932-934,共3页

凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝系统的重要成分之一,它的缺失或功能缺陷可导致出血性疾病——血友病B。Ⅸ因子由肝脏产生,在翻译后需经过一系列依赖维生素K的复杂修饰过程才能形成有活性的Ⅸ因子。因此,一般认为肝外组织不能产生有... 凝血因子Ⅸ(简称Ⅸ因子)是人体内凝系统的重要成分之一,它的缺失或功能缺陷可导致出血性疾病——血友病B。Ⅸ因子由肝脏产生,在翻译后需经过一系列依赖维生素K的复杂修饰过程才能形成有活性的Ⅸ因子。因此,一般认为肝外组织不能产生有凝血活性的Ⅸ因子。自1982年以来,国外几个实验室相继克隆了人Ⅸ因子cDNA,并发现。 展开更多

关键词 人 凝血因子ix 基因转移 仓鼠 卵巢

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中国人凝血因子Ⅸ基因MseⅠ多态性 被引量：6

15

作者 朱静 王宁遂 邓兵 《中华血液学杂志》 CAS CSCD 北大核心 1994年第9期451-452,共2页

利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二... 利用聚合酶链反应（ＰＣＲ）和限制性内切酶ＭｓｅⅠ酶解分析，发现我国人群凝血因子ＩＸ（ＦｌＸ）基因５’侧翼－６９８位核苷酸存在ＭｓｅＩ多态性，该多态性由８３ｂｐ／５８ｂｐ＋２５ｂｐ组成。在受检的１１８个ＦＩＸ基因中，二者基因频率分别为０．６３５和０．３６５，多态性信息量为０．４６３。此系我国人群中发现的第二种限制性片段长度多态（ＲＦＬＰ），有助于血友病乙携带者的检测及产前基因诊断。 展开更多

关键词 血友病乙 凝血因子ix 聚合酶链反应

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反转录病毒介导的人凝血因子IX小基因在奶山羊乳腺中的分泌表达 被引量：3

16

作者 张克忠 包云 +7 位作者 卢大儒 薛京伦 邱信芳 黄英 李兵岩 李华 黄淑帧 曾溢滔 《科学通报》 EI CAS CSCD 北大核心 1997年第12期1333-1337,共5页

通过受精卵显微注射胚胎移植建立哺乳动物乳腺生产系统是近年来生物工程领域的研究热点,但该工作周期长、成本高、难度和工作量都很大.1994年Johanna等人曾经报道以反转录病毒作载体将hGH(human growth hormone)cDNA导入山羊乳腺组织并... 通过受精卵显微注射胚胎移植建立哺乳动物乳腺生产系统是近年来生物工程领域的研究热点,但该工作周期长、成本高、难度和工作量都很大.1994年Johanna等人曾经报道以反转录病毒作载体将hGH(human growth hormone)cDNA导入山羊乳腺组织并获得表达.但是由于病毒LTR控制下的hGH基因的表达在活体动物乳腺组织内受到一定程度的抑制,因此表达水平比较低,持续时间短.我们以微小MCK(Muscle creatine kinase)增强子,β-actin启动子控制hFⅨ(human clotting factorⅨ)小基因(minigene)表达顺序反向插入GINa框架,构建为复制缺陷反转录病毒载体.首次通过反转录病毒直接转染活体奶山羊乳腺小叶和乳腺导管导入的方法建立了hFⅨ蛋白的乳腺表达系统.hFⅨ蛋白在羊奶中的最高表达量为47.9ng/mL乳汁,其中1头奶山羊2个月后表达量仍维持在12ng/mL乳汁.Western 展开更多

关键词 人凝血因子ix 反转录病毒 基因表达 乳腺 山羊

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血友病B替代治疗药物研究现状及进展 被引量：4

17

作者 严红 曾凡一 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第2期164-171,共8页

血友病B是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病,患者因体内缺乏凝血因子IX(FIX)而易发生出血事件,病情严重程度与FIX的缺乏程度相关,严重影响患者的寿命和生存质量。文中通过相关文献资料的查阅和整理,对血友病B替代治疗药物进行归... 血友病B是一种X染色体连锁的隐性遗传性出血性疾病,患者因体内缺乏凝血因子IX(FIX)而易发生出血事件,病情严重程度与FIX的缺乏程度相关,严重影响患者的寿命和生存质量。文中通过相关文献资料的查阅和整理,对血友病B替代治疗药物进行归纳和综述,重点阐述上市重组凝血因子IX制品和相关在研药物尤其是长效凝血因子IX的研究进展,为血友病B治疗药物的研发提供基础。 展开更多

关键词 血友病B 凝血因子ix替代治疗药物 长效凝血因子ix

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基于凝血因子IX基因剔除小鼠建立血友病乙转基因动物模型 被引量：6

18

作者 车文良 贺艳 +2 位作者 姚真真 李坚 傅继梁 《Acta Genetica Sinica》 SCIE CAS CSCD 北大核心 2002年第7期594-598,共5页

为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载... 为在凝血因子IX基因剔除小鼠基础上建立基因组中整合有含特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体的转基因小鼠家系 ,为血友病乙的研究提供更接近临床实际的动物模型。利用体外定点突变技术 ,构建含有特定点突变的人凝血因子IX基因表达载体 ,该载体包括由人凝血因子IX编码区及第一内含子构成的人凝血因子IX基因(hFIXml)、4个拷贝的MCK增强子 (MCKe)、鸡 β -肌动蛋白启动子 (bA)及PolyA ,命名为pMe4bAIXml质粒。将其线性化后 ,用显微注射法注射入 817只凝血因子IX基因剔除小鼠受精卵雄原核 ,再将它们分别回输 4 5只假孕受体母鼠的输卵管中 ,共产仔 6 9只 ,存活 6 3只。采用PCR与基因组Southern杂交筛选法鉴定小鼠 ,证实 6只小鼠基因组中整合有含特定点突变的pMe4bAIXml质粒 ,并对 1只小鼠的PCR产物进行测序 。 展开更多

关键词 血友病乙 转基因小鼠模型 点突变 人凝血因子ix基因

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微小腺病毒载体介导的人凝血IX因子小基因的离体表达 被引量：4

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作者 高啸波 侍鼎 +3 位作者 王飞 卢大儒 邱信芳 薛京伦 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2000年第4期294-298,共5页

将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小... 将带有内源内含子的人凝血IX因子cDNA(hFIX小基因 )构建到不含腺病毒基因而只带有反向末端重复顺序 (ITR)和包装信号 ψ等顺式元件的微小腺病毒 (mini adenovirus)载体GT2 0 73上 ,得到载体GTi’IX。将该载体与带有lacZ报告基因的微小腺病毒载体 pRP10 0 1分别转移入腺病毒包装细胞 2 93Cre4中 ,随后再转染辅助病毒AdLC8,从而包装出微小腺病毒AdGTi’IX和AdRP10 0 1。经超离心纯化后对两种病毒的检测结果表明 ,病毒颗粒浓度分别为 2 4× 10 12 /ml和 2 2× 10 12 /ml,辅助病毒所占比例均小于 0 8% ;用AdRP10 0 1以感染复数 (MOI)为 5 0的比例转染 3T3细胞 ,X - gal染色后发现细胞蓝染率在 90 %以上 ;用AdGTi’IX以MOI =5 0的比例转染 3T3细胞 ,ELISA结果表明 ,其瞬时表达为 1 4μg/10 6细胞·2 4h。此结果显示出该载体系统在血友病B基因治疗方面有很好的应用前景 ,为进一步的动物试验及免疫原性研究等临床前研究奠定了良好的基础。 展开更多

关键词 微小腺病毒载体 人凝血因子ix 基因表达 血友病

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重组人凝血因子Ⅸ预防性治疗中国儿童中、重型血友病B的单中心临床观察 被引量：5

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作者 李刚 吴润晖 +8 位作者 吴心怡 甄英姿 张宁宁 王岩 何雯雯 彭芸 LUKE Koon-hung POON Man-Chiu ANDREA Doria 《中华实用儿科临床杂志》 CAS CSCD 北大核心 2013年第15期1128-1130,共3页

目的应用重组人凝血因子Ⅸ（FIX）预防性治疗中国儿童中、重型血友病B，了解其疗效及安全性。方法使用重组人FIX开展儿童血友病B小剂量预防治疗，重组人FIX20IT]／（kg·次），1次／周，I临床观察指标包括：（1）疗效：出血减少率... 目的应用重组人凝血因子Ⅸ（FIX）预防性治疗中国儿童中、重型血友病B，了解其疗效及安全性。方法使用重组人FIX开展儿童血友病B小剂量预防治疗，重组人FIX20IT]／（kg·次），1次／周，I临床观察指标包括：（1）疗效：出血减少率、日常活动参与改善情况；（2）安全性：用药中不良事件及抑制物产生情况。结果共收集11例病例，观察时间18～27周（平均25．5周）；年龄9个月～15岁（平均7岁1个月）；重型9例，中间型2例；开始观察前接受按需治疗6例，预防治疗4例，无治疗1例；中位暴露日（ED）63ED（范围0～〉150ED）。（1）疗效：总出血减少率67．7％（与原按需治疗／无治疗比较减少78．6％；与原预防治疗比较减少47．8％）；9例中8例日常活动参与改善（与原按需／无治疗比较6例中5例改善，与原预防治疗比较3例全部改善）；（2）安全性：应用过程中无不良事件发生；治疗过程中仅有1例有1次抑制物检测滴度达0．6BU／mL，治疗结束后降至0BU／mL。结论重组人FIX应用于中国中、重型血友病B儿童的小剂量预防治疗安全、有效。 展开更多

关键词 血友病B 重组人凝血因子ix 预防治疗 儿童

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