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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序功能的研究 被引量：1
1
作者 牟丹蕾 王英鹏 +8 位作者 姜泓 肖书渊 于旭 李光玉 王平忠 孙永涛 聂青和 黄长形 白雪帆 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2007年第6期424-428,共5页
汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷... 汉滩病毒（HTNV）的G1蛋白胞质区尾段包含保守的免疫受体酪氨酸活化基序（ITAM）样基序，该基序与许多重要的免疫受体胞质区ITAM基序同源性较高。为了研究HTNV的G1ITAM样基序的免疫信号转导功能，首先人工合成了一段保守的酪氨酸残基磷酸化的G1ITAM样基序多肽，应用体外蛋白激酶共沉淀实验，分别从Jur—kat细胞和Raji细胞裂解物中初筛到5～9种与该基序相互作用的磷酸化蛋白或激酶；然后通过突变体分析、体外磷酸化实验和体外激酶共沉淀-免疫印迹分析，进一步确证了G1ITAM样基序在体外可以与Src家族蛋白酪氨酸激酶（PTK）Lyn、Fyn及其下游Syk家族激酶Syk、ZAP-70相互作用，而这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。上述研究表明，HTNVG1蛋白胞质区包含一个高度保守的功能性ITAM样基序，该基序在体外可以与TCR和BCR信号转导中关键的PTK相互作用，为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在肾综合征出血热（HFRS）免疫信号传递中的作用奠定了基础。 展开更多
关键词 汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序 蛋白酪氨酸激酶 信号转导
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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用
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作者 牟丹蕾 姜泓 +6 位作者 王英鹏 王平忠 李光玉 徐哲 张野 黄长形 白雪帆 《世界感染杂志》 2007年第2期106-109,共4页
目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以... 目的研究汉滩病毒（HTNV）G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的体外相互作用。方法通过体外激酶共沉淀和免疫印迹分析，获取G1ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用的证据。结果体外激酶共沉淀一免疫印迹分析证明，在体外HTNVG1 ITAM样基序可以与Syk相互作用。结论HTNVGI蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外可以与Syk相互作用，为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序 蛋白酪氨酸激酶 信号转导
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用Gateway技术克隆并表达汉滩病毒G1蛋白ITAM样基序
3
作者 牟丹蕾 姜泓 +7 位作者 王英鹏 李光玉 潘蕾 李新红 王临旭 张岩 黄长形 白雪帆 《第四军医大学学报》 北大核心 2007年第15期1345-1348,共4页
目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI... 目的:克隆并表达汉滩病毒(HTNV)囊膜糖蛋白(G1)胞质区尾段ITAM样基序及其突变体.方法:采用RT-PCR方法,扩增HTNVG1蛋白ITAM样基序及其中2个保守酪氨酸残基突变基序编码基因,应用Gateway技术将目的基因克隆至pDESTTM15表达载体,在BL21-AI中经L-阿拉伯糖诱导表达,免疫印迹确证融合蛋白的表达.结果:成功地构建了2个含汉滩病毒G1胞质区尾段ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-L,pDEST-ITAM和1个含保守酪氨酸残基突变的G1ITAM样基序编码序列表达载体pDEST-ITAM-YY-FF(Y615F,Y628F),并在大肠埃希杆菌中得到高效表达,免疫印迹证实目的蛋白与GST融合表达.结论:获得了3种与谷胱甘肽-S-转移酶(GST)融合的G1ITAM样基序及其突变基序的重组蛋白,为进一步探讨HTNVG1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用奠定了基础. 展开更多
关键词 汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序
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汉滩病毒G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk细胞内相互作用
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作者 牟丹蕾 王英鹏 +10 位作者 姜泓 王平忠 于旭 肖书渊 孙永涛 聂青和 王临旭 张岩 李新红 黄长形 白雪帆 《中国免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2008年第3期205-209,215,共6页
目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分... 目的:研究汉滩病毒(HTNV)G1蛋白胞质区ITAM样基序与Syk的细胞内相互作用。方法:构建用于研究Syk和G1 ITAM样基序之间相互作用的哺乳动物细胞双杂交系统,验证G1 ITAM样基序与Syk之间是否存在细胞内相互作用。结果:哺乳动物细胞双杂交分析证实G1 ITAM样基序在哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用;而突变体分析表明,这种相互作用依赖于该基序中两个高度保守的酪氨酸残基的存在。结论:HTNV G1蛋白胞质区高度保守ITAM样基序在体外和哺乳动物细胞内可以与Syk相互作用,为进一步探讨G1蛋白ITAM样基序在HFRS免疫信号传递中的作用及其与血管内皮损伤的关系奠定了基础。 展开更多
关键词 汉坦病毒 囊膜糖蛋白类 免疫受体酪氨酸活化基序 蛋白酪氨酸激酶 信号转导
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