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肠炎沙门菌菌影的制备及其作为疫苗载体的特性分析
被引量：
3
1
作者
焦红梅
郑文浩
+4 位作者
杨慧
堵嘉诚
刘夕珑
周芳鸣
成伟
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019年第3期315-318,322,共5页
目的制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究。方法以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负...
目的制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究。方法以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负载沙门菌菌影后转染小鼠巨噬细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测GFP的表达情况;用负载重组质粒pVAX1-NspA的沙门菌菌影经口灌胃免疫BALB/c小鼠,ELISA检测诱导抗体产生情况。结果重组菌诱导后的裂解效率达99%。沙门菌菌影负载pEGFP-N1转染小鼠巨噬细胞后可检测到GFP的表达。3次免疫两周后,负载重组质粒pVAX1-NspA沙门菌菌影免疫小鼠特异性血清IgG水平和黏膜IgA水平(A_(450)值)分别为0.60±0.05和0.53±0.06,负载pVAX1沙门菌菌影免疫组分别为0.32±0.07和0.22±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。结论制备的肠炎沙门菌菌影免疫能诱导特异性IgG和IgA抗体产生,可作为疫苗载体介导抗原的表达。
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关键词
噬菌体
裂解
基因
e
沙门菌菌影
疫苗载体
原文传递
噬菌体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备
被引量：
4
2
作者
王丽哲
雷连成
韩文瑜
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期188-190,194,共4页
根据Genbank已知序列,设计1对引物,采用PCR方法扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,经克隆、鉴定及序列测定分析,将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,构建了能够在大肠杆菌中表达裂解基因E的载体pGEX-E,并采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(...
根据Genbank已知序列,设计1对引物,采用PCR方法扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,经克隆、鉴定及序列测定分析,将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,构建了能够在大肠杆菌中表达裂解基因E的载体pGEX-E,并采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后成功获得了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗制备方法和新的疫苗佐剂奠定了基础。
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关键词
菌影
噬菌体
PhiX174
裂解
基因
e
原核表达
下载PDF
职称材料
大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究
被引量：
1
3
作者
蔡昆
包士中
+3 位作者
史晶
刘昊
高翔
王慧
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2008年第5期436-438,共3页
目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28...
目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构。结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒。菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变。4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%。电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性。结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础。
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关键词
大肠杆菌
细菌菌蜕
噬菌体
PhiX174
裂解
基因
e
温度控制
原文传递
题名
肠炎沙门菌菌影的制备及其作为疫苗载体的特性分析
被引量：
3
1
作者
焦红梅
郑文浩
杨慧
堵嘉诚
刘夕珑
周芳鸣
成伟
机构
扬州大学医学院/转化医学研究院江苏省中西医结合老年病防治重点实验室
出处
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019年第3期315-318,322,共5页
基金
国家自然科学基金项目(No.31100652)
文摘
目的制备肠炎沙门菌菌影并对其作为疫苗载体的特性进行研究。方法以带有噬菌体裂解基因E的溶菌质粒为模板,温控溶菌盒EBOX经PCR扩增和酶切后重组到pBBR1MCS2载体中并导入沙门菌,经42℃诱导表达后测定裂解效率;将真核表达载体pEGFP-N1负载沙门菌菌影后转染小鼠巨噬细胞,荧光显微镜观察和流式细胞仪检测GFP的表达情况;用负载重组质粒pVAX1-NspA的沙门菌菌影经口灌胃免疫BALB/c小鼠,ELISA检测诱导抗体产生情况。结果重组菌诱导后的裂解效率达99%。沙门菌菌影负载pEGFP-N1转染小鼠巨噬细胞后可检测到GFP的表达。3次免疫两周后,负载重组质粒pVAX1-NspA沙门菌菌影免疫小鼠特异性血清IgG水平和黏膜IgA水平(A_(450)值)分别为0.60±0.05和0.53±0.06,负载pVAX1沙门菌菌影免疫组分别为0.32±0.07和0.22±0.03,差异有统计学意义(P<0.01)。结论制备的肠炎沙门菌菌影免疫能诱导特异性IgG和IgA抗体产生,可作为疫苗载体介导抗原的表达。
关键词
噬菌体
裂解
基因
e
沙门菌菌影
疫苗载体
Keywords
Bact
e
riophag
e
lysis g
e
n
e
e
Salmon
e
lla
e
nt
e
ritidis ghosts
vaccin
e
v
e
ctor
分类号
R378.22 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
噬菌体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备
被引量：
4
2
作者
王丽哲
雷连成
韩文瑜
机构
吉林大学畜牧兽医学院
出处
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第2期188-190,194,共4页
基金
教育部高等学校博士学科点专项科研基金项目(20060183954)
文摘
根据Genbank已知序列,设计1对引物,采用PCR方法扩增PhiX174噬菌体裂解基因E,经克隆、鉴定及序列测定分析,将该基因亚克隆到原核表达载体pGEX-6P-1,构建了能够在大肠杆菌中表达裂解基因E的载体pGEX-E,并采用CaCl2法将其转入大肠杆菌BL21(DE3),经诱导后成功获得了大肠杆菌菌影,为进一步研究菌影这一新型的疫苗制备方法和新的疫苗佐剂奠定了基础。
关键词
菌影
噬菌体
PhiX174
裂解
基因
e
原核表达
Keywords
bct
e
rial ghosts
Isis g
e
n
e
e
pmkaryotic
e
xpr
e
ssion
分类号
Q786 [生物学—分子生物学]
S852.6 [农业科学—基础兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究
被引量：
1
3
作者
蔡昆
包士中
史晶
刘昊
高翔
王慧
机构
军事医学科学院微生物流行病研究所病原微生物生物安全国家重点实验室
出处
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2008年第5期436-438,共3页
文摘
目的:利用温度控制噬菌体PhiX174裂解基因E的表达,制备大肠杆菌细菌菌蜕,鉴定其裂解效率并观察其形态。方法:利用PCR技术扩增分离了噬菌体PhiX174裂解基因E并构建其表达质粒,并将质粒转化大肠杆菌DH5α构建工程菌。工程菌培养温度从28℃突升至42℃,每15 min检测菌液D600值,诱导后4 h收集菌体。体外菌落计数计算裂解效率,并通过电镜观察菌蜕结构。结果:获得273 bp的PhiX174裂解基因E全长基因及表达质粒。菌液D600在温度突升至42℃后30 min开始持续下降,2 h后基本维持不变。4 h后收集菌体测得裂解效率为99.99%。电镜观察菌蜕为具有完整外膜结构的细菌空壳,并且无细胞毒性。结论:本研究成功利用噬菌体PhiX174裂解基因E实现了大肠杆菌细菌菌蜕的制备,为进一步的疫苗及递送系统研究奠定了基础。
关键词
大肠杆菌
细菌菌蜕
噬菌体
PhiX174
裂解
基因
e
温度控制
Keywords
e
sch
e
richia coli
bact
e
rial ghost
PhiX174 lysis g
e
n
e
e
t
e
mp
e
ratur
e
control
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
肠炎沙门菌菌影的制备及其作为疫苗载体的特性分析
焦红梅
郑文浩
杨慧
堵嘉诚
刘夕珑
周芳鸣
成伟
《中国病原生物学杂志》
CSCD
北大核心
2019
3
原文传递
2
噬菌体裂解基因E原核表达载体构建及大肠杆菌菌影的制备
王丽哲
雷连成
韩文瑜
《吉林农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2008
4
下载PDF
职称材料
3
大肠杆菌细菌菌蜕的制备及初步研究
蔡昆
包士中
史晶
刘昊
高翔
王慧
《军事医学科学院院刊》
CSCD
北大核心
2008
1
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