植物可诱导基因表达系统的研究进展 被引量：1

1

作者 张壮 张钱钱 +4 位作者 张萌萌 董子健 孙雯雯 曹雪松 胡全安 《分子植物育种》 CAS 北大核心 2022年第10期3266-3276,共11页

基因表达是植物分子生物学研究中的主要手段之一,在理论研究和农业应用研究中广泛应用。早期的研究因基础薄弱和工具欠缺,大多使用组成型启动子,如最常用的花椰菜花叶病毒35S启动子,介导基因过表达。随着研究的深入,人们对基因表达的分... 基因表达是植物分子生物学研究中的主要手段之一,在理论研究和农业应用研究中广泛应用。早期的研究因基础薄弱和工具欠缺,大多使用组成型启动子,如最常用的花椰菜花叶病毒35S启动子,介导基因过表达。随着研究的深入,人们对基因表达的分子生物学有了更多的了解,进而衍生出一些较为成熟的工具。为了更精确地对基因表达的时间、空间和数量进行调控,已发展了多个植物可诱导基因表达系统。根据诱导物的不同,常见的表达系统有四环素诱导、类固醇诱导、乙醇诱导、杀虫剂诱导及铜诱导。这些系统因所使用的因子及组分不同,而各自有不同的工作原理;同时,他们也有明显的共性,即通常含有两个元件,激活元件和响应元件。本研究对上述植物可诱导表达系统的基本组成、工作原理及其特点进行了分析、评述和展望。 展开更多

关键词 植物基因表达 可诱导表达 转录因子 激活元件 响应元件

原文传递

家蚕蜕皮激素受体和超气门蛋白基因的诱导表达模式及蜕皮激素响应元件核心保守区的识别 被引量：2

2

作者 刘云垒 杜杰 +5 位作者 赵晓明 苏琳瑛 卫正国 李兵 虞晓华 沈卫德 《蚕业科学》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期425-431,共7页

核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素(20E)作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×... 核受体基因家族是介导昆虫蜕皮激素(20E)作用的关键信号分子。为了研究家蚕丝腺中核受体异源二聚体编码基因——蜕皮激素受体基因Bm EcR和超气门蛋白基因Bm USP的表达模式,应用实时荧光定量PCR技术检测家蚕5龄幼虫正常状态下和用2×10^(-3)μg/μL蜕皮激素处理后Bm EcR与Bm USP在丝腺组织中的表达变化。结果表明,20E处理后,Bm EcRA、Bm EcR-B1和Bm USP在中、后部丝腺的表达量与对照组相比均有不同程度增加,说明20E能够促进Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达;但中部丝腺与后部丝腺Bm EcR-A、Bm EcR-B1和Bm USP基因的表达变化趋势不同。利用等温滴定量热技术(ITC)获得的家蚕蜕皮激素受体结构域蛋白Bm EcR-B1D与蜕皮激素响应元件Bm E75A-EcRE及其缺失突变体相互作用的亲和力常数(K)、反应热(ΔH)和熵(ΔS),显示了Bm EcR-B1D蛋白能够与Bm E75A-EcRE进行结合,并发现Bm E75A-EcRE的核心保守区为编码序列TCTTC,推测该区域有可能是Bm EcR-B1D蛋白结合在Bm E75A-EcRE上的精确位点。 展开更多

关键词 家蚕 蜕皮激素受体 超气门蛋白 响应元件 实时荧光定量PCR 等温滴定量热技术

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电针不同穴组对抑郁大鼠行为活动及海马P-CREB表达的影响 被引量：23

3

作者 段冬梅 图娅 陈利平 《中国针灸》 CAS CSCD 北大核心 2008年第5期369-373,共5页

目的:观察不同穴组对抑郁症大鼠的疗效差异及其作用机制。方法:选用Wistar大鼠50只,随机分为正常组、模型组、体穴组、头穴组和百优解组。后4组用长期不可预见的中等强度刺激应激结合孤养的方法造成抑郁大鼠模型。模型组不给予任何治疗... 目的:观察不同穴组对抑郁症大鼠的疗效差异及其作用机制。方法:选用Wistar大鼠50只,随机分为正常组、模型组、体穴组、头穴组和百优解组。后4组用长期不可预见的中等强度刺激应激结合孤养的方法造成抑郁大鼠模型。模型组不给予任何治疗;百优解组每日按2 mg/kg灌胃给药1次;体穴组选取"太冲""内关""足三里",头穴组选取"百会""印堂""四神聪",2组均接电针仪,电针频率2 Hz,强度1 mA,每次20 min,每日1次。于实验前1 d和实验第7、14、21 d测量大鼠体重,并进行糖水消耗和强迫游泳试验,实验前1 d和实验第21 d进行开野实验。于第22 d观察各组海马p-CREB的表达。结果:与模型组相比,头穴组、百优解组的行为学评分、糖水消耗量均增加,游泳静止时间减少,海马的p-CREB阳性神经元数量增加(P<0.05);体穴组糖水消耗量增加,游泳静止时间减少(P<0.05),但行为学评分和海马的p-CREB阳性神经元数量增加不显著(P>0.05),各治疗组之间无显著差异(P>0.05)。结论:电针头穴体穴均能改善抑郁模型大鼠行为活动,有较好的抗抑郁作用。但头穴在增加模型大鼠体重、提高水平运动和垂直运动次数和提高海马p-CREB阳性神经元数量方面似乎优于体穴。 展开更多

关键词 电针 WISTAR大鼠 抑郁症/针灸疗法 海马/针灸效应 循环AMP响应元件结合蛋白质/针灸效盘

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基于Keap1/Nrf2/ARE信号通路探讨葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝损伤小鼠抗氧化应激的作用机制 被引量：10

4

作者 许皖 李娜 +4 位作者 柳海艳 修琳琳 于雪 陈绍红 钟赣生 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2023年第1期37-44,共8页

目的:观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。方法:采用一次性灌胃给予56%(V/V)红星二锅头酒(12 mL·kg^(-1))建立小鼠急性酒精性肝损伤模... 目的:观察葛花、枳椇子及其配伍对急性酒精性肝病的改善作用,为临床用药提供科学依据,并为开展其他酒精性相关疾病的研究提供思路和借鉴。方法:采用一次性灌胃给予56%(V/V)红星二锅头酒(12 mL·kg^(-1))建立小鼠急性酒精性肝损伤模型,120只雄性ICR小鼠按体质量随机分成空白组、模型组、水飞蓟宾组、葛花组、枳椇子组、葛花-枳椇子1∶1组、葛花-枳椇子1∶2组、葛花-枳椇子2∶1组,每组15只。各给药组按10 mL·kg^(-1)预防性灌胃相应药物3 d,除空白组外,其余各组小鼠按12 mL·kg^(-1)分别灌胃给予二锅头酒,于酒后12 h处死小鼠,并观察药物对小鼠肝功能、抗氧化应激能力的影响;苏木素-伊红(HE)染色观察肝脏病理变化;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测各组小鼠Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化响应元件(ARE)信号通路相关蛋白表达;实时荧光定量聚合酶链式反应(Real-time PCR)检测相关各指标mRNA表达。结果:与正常组比较,模型组小鼠血清中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)、碱性磷酸酶(ALP)水平,肝组织中丙二醛(MDA)、活性氧(ROS)含量显著升高(P<0.01);谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)活性显著降低(P<0.01),Keap1 mRNA及蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01),Nrf2 mRNA及蛋白表达显著降低(P<0.01);与模型组比较,葛花-枳椇子2∶1组小鼠ALT、AST和ALP水平显著减低(P<0.01),肝脏组织中MDA、ROS水平均显著减低(P<0.01),GSH、SOD水平均显著升高(P<0.01);肝脏脂肪变损伤均减轻,显著上调Nrf2 mRNA及蛋白表达(P<0.01),显著下调Keap1mRNA及蛋白表达(P<0.01)。结论:葛花、枳椇子及其配伍组合对小鼠急性酒精性肝损伤有一定的预防作用,其机制可能与调控肝脏内Keap1/Nrf2/ARE信号通路,恢复并上调由乙醇所破坏的肝脏氧化平衡有关,从而有效遏制酒精性肝病的发展。 展开更多

关键词 葛花 枳椇子 急性酒精性肝损伤 抗氧化 Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1)/核因子E2相关因子2(Nrf2)/抗氧化响应元件ARE信号通路

原文传递

柠条锦鸡儿CkNCED1基因启动子的克隆及表达分析 被引量：10

5

作者 任爱琴 易津 +2 位作者 高洪文 李俊 王学敏 《草业学报》 CSCD 北大核心 2013年第2期165-170,共6页

利用染色体步移(Genome walking)技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCED1基因启动子区连接到pGWB... 利用染色体步移(Genome walking)技术,克隆柠条锦鸡儿CkNCED1基因上游启动子序列。经顺式元件预测分析,该序列除基本的启动元件之外,还含有2个脱落酸诱导响应元件ABRE、此外还含有多个逆境相关的元件。将CkNCED1基因启动子区连接到pGWB533植物表达载体上,构建Promoter::GUS载体,GUS组织化学染色结果表明,CkNCED1基因在植物的叶、根、茎、花和角果的维管组织中均有表达,且在叶片中表达强度最高。以上研究确定了柠条锦鸡儿CkNCED1基因的表达部位和强度。进一步说明CkNCED1基因在ABA合成调控中发挥重要作用,为深入研究基因功能奠定基础。 展开更多

关键词 柠条锦鸡儿 CkNCED1基因启动子 GUS组织化学染色 ABA响应元件

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可穿戴智能电子服装的研究进展 被引量：8

6

作者 马菡婧 田宝华 何源 《棉纺织技术》 CAS 北大核心 2020年第2期80-84,共5页

论述可穿戴智能电子服装近年来的研究进展和发展趋势。从柔性传感器、纺织品自驱动电子设备、柔性显示等方面介绍了可穿戴智能电子服装在光、电、热、机械等方面性能的研究突破,阐述了在功能化、轻量化、灵活性、可靠性等方面仍存在的... 论述可穿戴智能电子服装近年来的研究进展和发展趋势。从柔性传感器、纺织品自驱动电子设备、柔性显示等方面介绍了可穿戴智能电子服装在光、电、热、机械等方面性能的研究突破,阐述了在功能化、轻量化、灵活性、可靠性等方面仍存在的不足与挑战。展望了智能电子纺织品通过结构创新、优化材料设计、新工艺技术等在实时监测、生物医疗、人工智能、物联网领域的演变和发展潜能。认为:人工智能领域的发展使得可穿戴智能电子服装成为连接人与设备的桥梁,个性化定制、多功能化的发展有助于可穿戴智能电子服装在未来智慧生活中扮演重要角色。 展开更多

关键词 可穿戴设备 智能电子服装 柔性传感 人工智能 物联网 热响应元件 发光二极管

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植物硫酸盐转运体研究进展 被引量：1

7

作者 邵俊雯 王婉瑕 +1 位作者 李瑞莉 赵红玉 《浙江农业科学》 2023年第6期1417-1425,共9页

硫元素是植物生长发育所必需的矿物质营养元素,主要参与光合作用、呼吸作用、氮固定、蛋白质和脂类合成等重要生理生化过程。植物通过硫酸盐转运体以硫酸根(SO_(4)^(2-))的形式从土壤中吸收硫酸盐。当硫酸盐被吸收进入根系细胞内部后,... 硫元素是植物生长发育所必需的矿物质营养元素,主要参与光合作用、呼吸作用、氮固定、蛋白质和脂类合成等重要生理生化过程。植物通过硫酸盐转运体以硫酸根(SO_(4)^(2-))的形式从土壤中吸收硫酸盐。当硫酸盐被吸收进入根系细胞内部后,植物通过质外体和共质体两种养分的运输途径将其运输到根中维管束,进而加载到地上部。当外界硫素充足时,植物将吸收的过量硫储存在液泡中,一旦土壤中硫素缺乏时,液泡储存的硫会释放到细胞质中,进行再分配,以维持植物体内硫酸盐的平衡。到目前为止,硫酸盐转运体的研究主要集中在模式植物拟南芥,对其他植物中的研究还较少。硫缺乏会严重抑制植物的正常生长。在进化过程中植物形成了一整套应对缺硫的分子机制来增加硫的吸收、运输和利用,调节自身的生长发育,其中,硫酸盐转运蛋白在应对硫胁迫过程中起重要的作用。本文将重点阐述植物中硫酸盐从土壤吸收进根系、运输和再分配的分子机制,并对今后的植物硫素吸收转运的研究重点进行展望。 展开更多

关键词 硫酸盐转运体 硫酸根(SO_(4)^(2-)) 硫响应元件(SURE) 生长素响应因子(ARF) miRNA395 磷饥饿响应因子(PHR1)

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Keap1-Nrf2-ARE信号通路与系统性硬化症氧化应激的研究进展

8

作者 廖羽青 罗婧莹 《中国皮肤性病学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2024年第9期1053-1057,共5页

系统性硬化症(systemic sclerosis,SSC),也称为硬皮病,是一种病因未明的慢性结缔组织疾病。越来越多的证据表明,氧化应激在系统性硬化症的发生及发展中起关键作用。Keap1-Nrf2-ARE信号通路作为抗氧化反应的主调节通路,其激活可对系统性... 系统性硬化症(systemic sclerosis,SSC),也称为硬皮病,是一种病因未明的慢性结缔组织疾病。越来越多的证据表明,氧化应激在系统性硬化症的发生及发展中起关键作用。Keap1-Nrf2-ARE信号通路作为抗氧化反应的主调节通路,其激活可对系统性硬化症病理改变的多个方面产生影响,包括皮肤和内脏器官纤维化、免疫损伤、慢性炎症等。由于Nrf2通路在系统性硬化症中发挥多途径调节作用,发现及研究Nrf2靶向药物已逐渐受到研究者的重视。因此,本文对Keap1-Nrf2-ARE信号通路在系统性硬化症中的作用机制及相关药物的研究进展进行综述,以期指导系统性硬化症的临床治疗。 展开更多

关键词 系统性硬化症 Kelch样ECH相关蛋白1(Keap1) 核因子E2相关因子2(Nrf2) 抗氧化响应元件(ARE) 氧化应激

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LncRNA FGD5-AS1靶向miR-16-5p/CREB1轴减轻缺氧/复氧诱导大鼠H9c2心肌细胞凋亡的机制研究

9

作者 谢小芳 赵展庆 符妹垂 《中西医结合心脑血管病杂志》 2024年第9期1585-1590,共6页

目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧... 目的:探究长链非编码RNA(LncRNA)FGD5反义RNA1(FGD5-AS1)对缺氧/复氧(H/R)诱导的大鼠H9c2心肌细胞凋亡的影响以及对微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1(miR-16-5p/CREB1)轴的调节机制。方法:将H9c2细胞分为对照组和H/R组(缺氧6 h,复氧6 h),然后将H/R组细胞分别进行转染,分为oe-NC组、oe-FGD5-AS1组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic-NC组、oe-FGD5-AS1+miR-16-5p mimic组。实时荧光定量逆转录聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测细胞中FGD5-AS1、miR-16-5p、CREB1的mRNA水平;蛋白免疫印迹(Western Blot)法测定裂解凋亡蛋白酶-3(cleaved Caspase-3)、B细胞淋巴瘤/白血病-2(Bcl-2)和Bcl-2相关X蛋白(Bax)蛋白表达;CCK-8法测定细胞存活率;流式细胞术检测细胞凋亡率;双荧光素酶活性实验分别验证miR-16-5p和FGD5-AS1、CREB1的靶向关系。结果:与对照组比较,H/R组细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达降低(P<0.05),miR-16-5p mRNA水平、细胞凋亡率及cleaved Caspase-3、Bax蛋白表达升高(P<0.05);与H/R组和oe-NC组比较,转染过表达FGD5-AS1基因的H9c2细胞中FGD5-AS1和CREB1的mRNA水平、细胞存活率、Bcl-2蛋白表达增高,凋亡率及miR-16-5p、cleaved Caspase-3、Bax水平下降(P<0.05)。双荧光素酶活性实验验证了FGD5-AS1、CREB1均与miR-16-5p有结合位点。结论:过表达FGD5-AS1可能通过靶向下调miR-16-5p表达,上调CREB1表达,抑制H/R诱导的H9c2心肌细胞凋亡。 展开更多

关键词 缺氧/复氧 FGD5反义RNA 1 微小RNA-16-5p/cAMP响应元件结合蛋白1轴 心肌细胞凋亡

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硝酸还原酶基因启动子NRE2元件缺失对烟草氮代谢的影响 被引量：4

10

作者 党伟 李茜 +5 位作者 叶歌斐 汪海燕 张玉宁 杨铁钊 武兆云 杨惠娟 《核农学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期322-328,共7页

为了探究硝酸还原酶基因启动子中硝酸盐响应元件NRE2缺失对烟草植株氮代谢的影响,以烤烟品种K326为材料,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了烟草NIA1和NIA2基因启动子中NRE2元件缺失的突变体材料,并于同一氮素营养条件下培养,测定烟草... 为了探究硝酸还原酶基因启动子中硝酸盐响应元件NRE2缺失对烟草植株氮代谢的影响,以烤烟品种K326为材料,采用CRISPR/Cas9基因编辑技术获得了烟草NIA1和NIA2基因启动子中NRE2元件缺失的突变体材料,并于同一氮素营养条件下培养,测定烟草植株氮代谢相关生理指标。结果表明,与野生型相比,单突变体和双突变体叶片中的硝酸还原酶活性下降了18.1~25.6个百分点,NO_(3)^-含量下降了1.5%~4.3%,亚硝酸还原酶活性和NO_(3)^-含量仍保持在较高水平;单敲除突变体的总氮含量与野生型相比无显著差异,双敲除突变体的总氮含量显著下降了0.88个百分点。本研究为深入了解硝酸盐调控网络以及选育低硝酸盐积累的烟草新品种提供了理论依据。 展开更多

关键词 烟草 硝酸还原酶 启动子 硝酸根响应元件 氮代谢

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一种GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型

11

作者 王芮 杨紫鑫 +2 位作者 柯志强 成细瑶 苏正定 《中国药理学通报》 CAS CSCD 北大核心 2023年第9期1793-1798,共6页

目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白... 目的构建GLP-1受体激动剂高通量筛选细胞模型。方法构建pEGFP-GLP-1R-3C重组质粒,转染HEK293T细胞,用G418和流式细胞仪进行筛选。所构建的细胞系命名为HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。Western blot和激光共聚焦检测GLP-1R-3C-eGFP蛋白的表达。将环磷酸腺苷(cyclic adenosine monophosphate,cAMP)响应元件报告基因转染HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞,不同浓度的GLP-1刺激后,用一步法荧光素酶报告基因检测试剂盒检测发光值反映细胞cAMP水平,采用cAMP试剂盒(ELISA)进行验证。结果成功构建HEK293T-GLP-1R-3C-eGFP细胞系。不同浓度GLP-1刺激后,发光值变化趋势与细胞cAMP水平变化趋势相似。本实验中Z′因子的值为0.52。结论本研究建立了基于重组HEK293T细胞株,其可用于GLP-1受体激动剂高通量筛选。 展开更多

关键词 2型糖尿病 GLP-1 GLP-1受体激动剂 小分子GLP-1受体激动剂 cAMP响应元件 荧光素酶报告基因 Z′因子

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转录因子CREB3L1在甲状腺癌组织中的表达及生物学意义

12

作者 蒋洪棉 朱良琴 冯振博 《现代医药卫生》 2023年第8期1267-1274,共8页

目的探讨转录因子环腺苷酸响应元件结合蛋白3-样1(CREB3L1)在甲状腺癌(THCA)组织中的表达及其临床意义。方法从GEO、ArrayExpress、SRA、TCGA等数据库检索下载CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达谱,应用Wilcoxon非参数检验检测CREB3L1 mRNA... 目的探讨转录因子环腺苷酸响应元件结合蛋白3-样1(CREB3L1)在甲状腺癌(THCA)组织中的表达及其临床意义。方法从GEO、ArrayExpress、SRA、TCGA等数据库检索下载CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达谱,应用Wilcoxon非参数检验检测CREB3L1 mRNA在THCA组织和正常甲状腺组织中表达水平的差异;计算CREB3L1表达值的标准化均数差(SMD)及汇总受试者工作特征(SROC)曲线下面积等指标,综合评估CREB3L1 mRNA在THCA组织中的表达水平及其对THCA的区分能力。用上述数据集批量获取CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因,应用CistromeDB预测CREB3L1转录靶基因,用clusterProfiler对CREB3L1在THCA组织中的相关过表达基因、CREB3L1转录靶标交集基因进行基因本体和京都基因与基因组百科全书功能注释。在THPA数据库中查看CREB3L1蛋白在THCA组织中的表达水平。结果与正常甲状腺组织比较,THCA组织中CREB3L1蛋白表达水平呈上调趋势。基于基因芯片、高通量测序数据集共纳入1175例THCA组织和791例正常甲状腺组织样本。CREB3L1 mRNA在THCA组织中呈高表达[SMD=0.11,95%可信区间(95%CI):0.01~0.20],集成SROC曲线下面积为0.62(95%CI:0.57~0.66)。CREB3L1蛋白在THCA组织中高表达患者5年生存率比低表达者低。交叉基因主要富集在细胞周期信号通路上,主要生物学功能为细胞器裂解。细胞分裂周期6蛋白(CDC6)与CREB3L1呈正相关。结论CREB3L1在THCA组织中高表达不利于患者的预后,有可能通过靶向基因CDC6参与了THCA的发生、发展。 展开更多

关键词 转录因子 甲状腺肿瘤 基因表达 生物学 cAMP响应元件结合蛋白3-样1

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苹果MdHB-1基因启动子中的乙烯响应元件对外源乙烯的响应分析 被引量：3

13

作者 王豪杰 姜永华 +3 位作者 刘艳利 戚英伟 刘翠华 任小林 《植物生理学报》 CAS CSCD 北大核心 2016年第3期365-371,共7页

通过PlantCARE和PLACE软件在线分析预测表明,在苹果Md HB-1启动子中存在一个乙烯响应元件(距ATG上游576 bp)。为了探究该启动子中的乙烯响应元件对不同浓度乙烯的响应,以苹果品种‘皇家嘎拉’(Malus domestica Borkh.cv.Royal Gala)基因... 通过PlantCARE和PLACE软件在线分析预测表明,在苹果Md HB-1启动子中存在一个乙烯响应元件(距ATG上游576 bp)。为了探究该启动子中的乙烯响应元件对不同浓度乙烯的响应,以苹果品种‘皇家嘎拉’(Malus domestica Borkh.cv.Royal Gala)基因组DNA为模板,用PCR方法扩增得到长度分别为680 bp(含有乙烯响应元件)和485 bp(不含有乙烯响应元件)的启动子序列,构建GUS报告基因瞬时表达载体,依靠农杆菌介导转化烟草叶片,检测经过不同浓度乙烯利(0、500、1 000和1 500mg·L^(-1))处理的转基因烟草叶片的GUS蛋白活性。结果表明,该乙烯响应元件受到外源乙烯正调控作用,随着处理的外源乙烯浓度的增大,正调控效应先升高达到最大值后逐渐减弱,500 mg·L^(-1)乙烯利能最大程度地提升乙烯响应元件活性。 展开更多

关键词 苹果 MdHB-1 瞬时表达 乙烯响应元件

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非生物胁迫因子对大豆Sali3-2基因的调控作用 被引量：3

14

作者 唐玉林 曹雁 +3 位作者 欧忠华 杨悉妮 胡恋苹 郑易之 《深圳大学学报（理工版）》 EI CAS 北大核心 2012年第1期73-79,共7页

通过生物信息学方法对Sali3-2基因上游非编码区序列(-1 945/+1)中的顺式作用元件进行预测.发现该序列中存在铜响应元件、干旱胁迫响应元件及与低温等非生物胁迫相关元件等.在不同非生物胁迫条件下,分别对转基因烟草悬浮细胞和转基因拟... 通过生物信息学方法对Sali3-2基因上游非编码区序列(-1 945/+1)中的顺式作用元件进行预测.发现该序列中存在铜响应元件、干旱胁迫响应元件及与低温等非生物胁迫相关元件等.在不同非生物胁迫条件下,分别对转基因烟草悬浮细胞和转基因拟南芥幼苗中Sali3-2启动子片段驱动报告基因β-葡萄糖苷酸酶(β-glucuronidase,Gus)的表达进行分析.结果表明,在转基因烟草细胞和拟南芥幼苗中,Gus基因的表达明显受Al3+胁迫的诱导和Cu2+过多的抑制;在转基因烟草细胞中,该基因的表达一定程度上受脱落酸、渗透胁迫和盐胁迫的诱导,研究结果为了解Sali3-2基因的功能及调控作用奠定了基础. 展开更多

关键词 生物信息学 基因调控 启动子 Sali3-2基因 铜响应元件 非生物胁迫 GUS染色

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根皮素抑制LPS诱导的BV2小胶质细胞氧化应激反应 被引量：2

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作者 李琛琛 徐君美 +4 位作者 贺芊芊 李嘉嬴 李志恒 徐志卿 杨予涛 《首都医科大学学报》 CAS 北大核心 2022年第1期99-105,共7页

目的探讨根皮素(phloretin,PHL)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤的抑制作用及可能的分子机制。方法利用LPS建立BV2小胶质细胞的氧化应激损伤模型,对该模型予以不同浓度的PHL预处理。利用MTS方法检... 目的探讨根皮素(phloretin,PHL)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤的抑制作用及可能的分子机制。方法利用LPS建立BV2小胶质细胞的氧化应激损伤模型,对该模型予以不同浓度的PHL预处理。利用MTS方法检测细胞活力。ELISA法检测氧化应激相关产物一氧化氮(nitric oxide,NO)、丙二醛(malondialdehyde,MDA)、谷胱甘肽(glutathione,GSH)含量及超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)的活性。双荧光素酶活性检验方法检测抗氧化响应元件荧光素酶报告基因质粒(antioxidant reaction element luciferase reporter plasmid,ARE-LUC)报告基因转录活性。Western blotting法检测磷酸化核因子-E2相关因子2(nuclear factor E2-related factor 2,Nrf2)和血红蛋白加氧酶-1(heme oxygenase-1,HO-1)蛋白表达。结果与对照组相比,LPS处理后的BV2小胶质细胞活力显著降低,氧化应激产物NO和MDA水平明显升高,GSH含量和SOD活性明显下降,但Nrf2磷酸化水平、ARE-LUC报告基因转录活性和HO-1蛋白表达略有增高。与模型组比较,高剂量PHL(20μmol/L)预处理明显改善了LPS导致的BV2小胶质细胞活力下降,降低NO和MDA的含量,增高GSH的含量和SOD的活性,且进一步增加了Nrf2的磷酸化水平,上调ARE-LUC的转录活性和HO-1蛋白的表达。结论PHL可以显著抑制LPS导致的BV2小胶质细胞的氧化应激损伤,Nrf2/ARE通路可能是根皮素发挥抑制BV2小胶质细胞氧化应激损伤作用的途径之一。 展开更多

关键词 根皮素 BV2小胶质细胞 氧化应激 核因子-E2相关因子 抗氧化响应元件

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花生小GTP结合蛋白基因AhRabG3f启动子的盐胁迫响应元件分析 被引量：1

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作者 杜国宁 相杰 +8 位作者 林顺钰 孔祥远 武秀玲 管学东 朱虹 王晶珊 乔利仙 隋炯明 赵春梅 《生物工程学报》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期2989-2998,共10页

为研究花生小GTP结合蛋白基因AhRabG3f对盐胁迫响应的分子机制,文中克隆了花生AhRabG3f基因起始密码子上游1914 bp的启动子片段(3f-P)。将该启动子5'末端截短获得5个片段(3f-P1-3f-P5),长度分别为1729、1379、666、510、179 bp。构... 为研究花生小GTP结合蛋白基因AhRabG3f对盐胁迫响应的分子机制,文中克隆了花生AhRabG3f基因起始密码子上游1914 bp的启动子片段(3f-P)。将该启动子5'末端截短获得5个片段(3f-P1-3f-P5),长度分别为1729、1379、666、510、179 bp。构建了将这6个启动子片段与gus基因融合的植物表达载体,利用农杆菌介导法转化烟草。对转基因烟草进行GUS表达分析和酶活性检测,结果表明,在转入各启动子片段的烟草中,都能检测到gus基因的表达,其中全长启动子3f-P的驱动活性最弱,而截短片段3f-P3的驱动活性最强。对转基因烟草进行盐胁迫处理后,3f-P、3f-P1、3f-P2和3f-P3所驱动GUS酶活性是未经盐诱导的3.3、1.2、1.9、1.2倍,表明AhRabG3f启动子是盐诱导型的,在3f-P至3f-P3之间可能存在对盐响应的正调控元件。通过对盐胁迫处理后各启动子片段驱动的GUS活性分析,推测在AhRabG3f启动子上游1930–1745 bp、682–526 bp之间存在可能对盐响应的正调控元件MYB、GT1和富含TC的重复序列,1395–682 bp之间存在可能对盐响应的负调控元件MYC。研究结果可为利用诱导型启动子调控花生的耐盐性提供指导。 展开更多

关键词 花生 小GTP结合蛋白 启动子 盐胁迫响应元件

原文传递

GLP-1R激动剂的细胞筛选模型的建立 被引量：1

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作者 高华山 佟伟霜 +3 位作者 范卫卫 张科 白现广 李彦娇 《沈阳药科大学学报》 CAS CSCD 北大核心 2019年第11期1011-1019,共9页

目的构建靶向GLP-1R的高通量筛选模型。方法构建过表达GLP-1R的重组质粒和响应GLP-1信号通路的报告载体,共转染到HEK293细胞中,筛选得到稳定转染的单克隆细胞株,并用阳性药进行模型验证。结果成功构建了表达GLP-1R的重组质粒pcDNA3.1(+)... 目的构建靶向GLP-1R的高通量筛选模型。方法构建过表达GLP-1R的重组质粒和响应GLP-1信号通路的报告载体,共转染到HEK293细胞中,筛选得到稳定转染的单克隆细胞株,并用阳性药进行模型验证。结果成功构建了表达GLP-1R的重组质粒pcDNA3.1(+)-HuGLP-1R和响应GLP-1信号通路的报告载体PGL4.22-CRE-vip-GFP,共转染到HEK293细胞,筛选得到稳定转染细胞株CG-HEK293,经GLP-1刺激后,确定GFP的最佳表达时间为8 h,经过不同浓度的GLP-1刺激后,能够剂量依赖性地激活GFP的表达。结论构建了靶向GLP-1R的高通量筛选模型,该模型能够直观、稳定、高通量的筛选靶向GLP-1R的小分子或者GLP-1类似物,为长效的GLP-1类似物的研究和开发奠定了基础。 展开更多

关键词 GLP-1受体 cAMP响应元件 GFP报告基因 细胞模型

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白纹伊蚊蜕皮激素拮抗剂筛选酵母模型的建立

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作者 顾金保 孙彦涛 彭鸿娟 《中国寄生虫学与寄生虫病杂志》 CAS CSCD 北大核心 2007年第5期376-380,共5页

目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白... 目的在毕赤酵母体内构建白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,建立高通量杀虫剂筛选模型,用于筛选蜕皮激素代谢途径拮抗药物。方法人工合成果蝇蜕皮激素响应元件(EcRE)5次重复的序列,与果蝇热激蛋白基因启动子(pHSP27)序列连接,以绿色荧光蛋白(GFP)报告基因,将EcRE-pHSP27-GFP片段亚克隆入pPIC3.5k,整合入毕赤酵母染色体构建阴性酵母A。人工合成白纹伊蚊蜕皮激素受体(EcR)及超螺旋蛋白(USP)编码序列,两个基因以双表达盒形式亚克隆入组成型表达质粒pGAPZ,整合入酵母染色体的另一位点,使EcR与USP在酵母中组成型表达,构建模型酵母B。制备蜕皮激素拮抗剂虫酰肼悬液(浓度为0.83mg/ml),分别施加于模型酵母B与阴性酵母A,荧光显微镜下目测荧光强度,与未施加药物的对照组比较。同时提取各组RNA,半定量RT-PCR检验GFP基因的转录效率。结果模型酵母B发出绿色荧光,而阴性酵母A与空白酵母GS115未见荧光,表明在模型酵母体内表达的EcR与USP形成复合二聚体,作用于EcRE启动GFP报告基因表达荧光蛋白。施用虫酰肼,模型酵母B荧光强度明显减弱,表明GFP的表达量减少。施用虫酰肼的模型酵母B,GFP与内参灰度比值(为0.614)低于对照组(1.134),表明虫酰肼可降低模型酵母B体内GFP基因的转录水平。结论在酵母体内建立了白纹伊蚊蜕皮激素转录活化系统,该酵母模型可用于筛选作用于蜕皮激素代谢途径的药物。 展开更多

关键词 白纹伊蚊 蜕皮激素受体 超螺旋蛋白 蜕皮激素受体响应元件 虫酰肼 蜕皮激素拮抗物

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拟南芥钙依赖蛋白激酶CPK11与ABA响应元件结合因子ABF4相互作用的研究

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作者 胡搏 刘盈盈 杨毅 《四川大学学报（自然科学版）》 CAS CSCD 北大核心 2022年第2期158-164,共7页

为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明... 为研究钙依赖蛋白激酶CPK11参与ABA信号通路的方式,本文利用体外酵母双杂实验(Y2H)以及体内双分子荧光互补实验(BiFC)分析CPK11与ABA响应元件结合因子(ABA-responsive element binding factors, ABFs)ABF4之间的关系.酵母双杂交实验表明CPK11与ABF4存在体外相互作用,双分子荧光互补实验表明CPK11与ABF4存在体内相互作用.以上实验共同证明CPK11与ABF4存在直接相互作用.作为CPK11的同源蛋白CPK4与转录因子ABF4在植物体内也存在相互作用.以上实验表明CPK11及其同源蛋白CPK4可能通过与转录因子ABF4相互作用从而参与钙离子介导的ABA信号通路. 展开更多

关键词 钙依赖蛋白激酶11 ABA响应元件结合因子4 同源蛋白 酵母双杂交实验 双分子荧光互补实验

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重金属富集模式动物粉正蚓Lumbricus rubellus的研究

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作者 李维 吴文如 +2 位作者 林小桦 喻良文 李薇 《长春中医药大学学报》 2010年第5期762-765,共4页

粉正蚓Lumbricus rubellus作为一种富集重金属离子的模式动物,是近年来国内外学者研究重金属富集机制及调控原理的重点关注对象。对粉正蚓重金属富集相关的国内外研究现状进行了系统地梳理和分析,同时还总结了重金属富集研究的方法,并... 粉正蚓Lumbricus rubellus作为一种富集重金属离子的模式动物,是近年来国内外学者研究重金属富集机制及调控原理的重点关注对象。对粉正蚓重金属富集相关的国内外研究现状进行了系统地梳理和分析,同时还总结了重金属富集研究的方法,并提出了今后研究的发展方向,以期为重金属富集相关的研究提供可以借鉴的思路和方法。 展开更多

关键词 粉正蚓 重金属富集 金属硫蛋白 重金属响应元件 应用

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