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过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响
被引量：
2
1
作者
陈凤花
李一荣
+1 位作者
王琳
胡丽华
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期2366-2370,共5页
目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加...
目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加强型绿色荧光蛋白(BMI-1-EGFP)表达后,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、同源盒A9(HOXA9)、同源盒B4(HOXB4)和同源盒C13(HOXC13)mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13 mRNA的表达,分别平均降低为对照组的9.2%、10.9%和69.7%(P<0.01),而hTERT和HOXB4 mRNA的表达变化无显著差异(P>0.05)。(2)pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞后,G1期细胞由65.68%减少至50.53%,S期细胞则由27.17%增加至39.59%(P<0.01)。结论:真核表达载体pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞过表达外源性BMI-1,显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13的表达,同时G1期细胞减少、S期细胞增加,这可能是BMI-1参与肿瘤发生发展的机制之一。
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关键词
B细胞特异
性
莫洛尼氏白血病毒插入位点1
周期素
依赖性
激酶
抑制剂
p
16
ink
4a
同源盒A9
同源盒C13
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职称材料
敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞
被引量：
1
2
作者
陈凤花
李一荣
+1 位作者
王琳
胡丽华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期134-139,共6页
B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hai...
B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子.
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关键词
B细胞特异
性
莫洛尼氏白血病毒插入位点1(BMI-1)
短发夹状RNA(shRNA)
周期素
依赖性
激酶
抑制剂
p
16
ink
4a
同源盒A9
同源盒C13
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职称材料
题名
过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响
被引量：
2
1
作者
陈凤花
李一荣
王琳
胡丽华
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院
出处
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009年第12期2366-2370,共5页
基金
湖北省科技攻关资助项目(No.2005AA304B08)
文摘
目的:将构建成功的真核表达载体pEGFP-BMI-1转染宫颈癌细胞系HeLa,检测其对同源盒(HOX)基因表达和细胞周期的影响。方法:采用脂质体转染法,将质粒pEGFP-BMI-1DNA瞬时转染HeLa细胞,确定融合蛋白B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1-加强型绿色荧光蛋白(BMI-1-EGFP)表达后,实时荧光定量RT-PCR方法检测转染前后HeLa细胞中周期素依赖性激酶抑制剂P16INK4a、人类端粒酶逆转录酶(hTERT)、同源盒A9(HOXA9)、同源盒B4(HOXB4)和同源盒C13(HOXC13)mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期。结果:(1)在HeLa细胞中过表达BMI-1显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13 mRNA的表达,分别平均降低为对照组的9.2%、10.9%和69.7%(P<0.01),而hTERT和HOXB4 mRNA的表达变化无显著差异(P>0.05)。(2)pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞后,G1期细胞由65.68%减少至50.53%,S期细胞则由27.17%增加至39.59%(P<0.01)。结论:真核表达载体pEGFP-BMI-1转染HeLa细胞过表达外源性BMI-1,显著下调P16INK4a、HOXA9和HOXC13的表达,同时G1期细胞减少、S期细胞增加,这可能是BMI-1参与肿瘤发生发展的机制之一。
关键词
B细胞特异
性
莫洛尼氏白血病毒插入位点1
周期素
依赖性
激酶
抑制剂
p
16
ink
4a
同源盒A9
同源盒C13
Keywords
B-cell s
p
ecific moloney leukemia virus insertion site 1
Cyclin-de
p
endent kinase inhibitor
p
16
ink
4
a
Homeobox A9
Homeobox C13
分类号
R363 [医药卫生—病理学]
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职称材料
题名
敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞
被引量：
1
2
作者
陈凤花
李一荣
王琳
胡丽华
机构
华中科技大学同济医学院附属协和医院检验科
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010年第2期134-139,共6页
基金
湖北省科技攻关项目(No.2005AA304B08)~~
文摘
B细胞特异性莫洛尼氏白血病毒插入位点1(B-cell specific moloney leukemia virus insertionsite1,BMI-1)在多种恶性肿瘤中高表达.为探索BMI-1在宫颈癌发生发展过程中的生物学作用,将构建成功并已鉴定为有效序列的短发夹状RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达载体BMI-1shRNA2和BMI-1shRNA4,转染人宫颈癌细胞系HeLa并筛选稳定转染细胞株,Western印迹检测BMI-1蛋白表达,实时荧光定量RT-PCR检测周期素依赖性激酶抑制剂p16INK4a(cyclin-dependentkinase inhibitor p16INK4a)、人类端粒酶逆转录酶(human telomerase reverse transcriptase,hTERT)、同源盒A9(homeoboxA9,HOXA9)、同源盒B4(homeoboxB4,HOXB4)和同源盒C13(homeoboxC13,HOXC13)基因mRNA的表达变化,PI染色流式细胞仪检测细胞周期变化.结果表明,在稳定转染BMI-1shRNA2、BMI-1shRNA4的HeLa细胞中,显著抑制BMI-1蛋白表达,上调p16INK4a、HOXA9和HOXC13三者mRNA表达,而hTERT和HOXB4两者mRNA的表达水平无明显改变,同时G1期细胞增加、S期细胞减少,提示敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G1期阻滞,BMI-1可能是宫颈癌基因治疗的靶分子.
关键词
B细胞特异
性
莫洛尼氏白血病毒插入位点1(BMI-1)
短发夹状RNA(shRNA)
周期素
依赖性
激酶
抑制剂
p
16
ink
4a
同源盒A9
同源盒C13
Keywords
B-cell s
p
ecific moloney leukemia virus insertion site 1（BMI-1）
short hair
p
in RNA（shRNA）
p
16
ink
4
A
HOXA9
HOXC13
分类号
Q291 [生物学—细胞生物学]
Q786
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
过表达BMI-1对HeLa细胞中HOX基因表达和细胞周期的影响
陈凤花
李一荣
王琳
胡丽华
《中国病理生理杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2009
2
下载PDF
职称材料
2
敲减BMI-1表达诱导HeLa细胞G_1期阻滞
陈凤花
李一荣
王琳
胡丽华
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2010
1
下载PDF
职称材料
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