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缺氧微环境下仙连解毒方抑制结直肠癌细胞增殖的作用及机制 被引量：6
1
作者 姜瑞阳 徐长亮 +7 位作者 程海波 沈卫星 范旻旻 谭佳妮 赖岳阳 余成涛 孙东东 李柳 《中国实验方剂学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2022年第8期79-85,共7页
目的:观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4(Brd4)诱导的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法:于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方(0.8... 目的:观察缺氧微环境下仙连解毒方对含溴结构域蛋白4(Brd4)诱导的核转录因子-κB(NF-κB)信号通路激活的影响,探讨其抑制结直肠癌细胞HT-29增殖的作用机制。方法:于缺氧培养箱或常氧培养箱中培养人结直肠癌细胞HT-29,给予仙连解毒方(0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^(-1))干预细胞48 h,采用噻唑蓝(MTT)比色法检测细胞活力;采用线粒体膜电位荧光探针(JC-1)检测仙连解毒方(1.25、2.5、5 g·L^(-1))对细胞线粒体膜电位的影响,采用流式细胞术检测结直肠癌细胞HT-29凋亡情况;细胞克隆形成实验及5-乙炔基-2’-脱氧尿苷(EDU)法检测结直肠癌细胞HT-29细胞增殖能力;蛋白免疫印迹法(Western blot)检测Brd4及其下游蛋白如c-核蛋白类基因(c-Myc)、六亚甲基双乙酰胺诱导蛋白1(HEXIM1)的表达水平,同时检测仙连解毒方对NF-κB信号通路相关蛋白的影响。结果:与空白组比较,仙连解毒方(0.8、1、1.2、1.6、3.2、6.4、12.8 g·L^(-1))组均能抑制结直肠癌细胞HT-29细胞活力(P<0.05,P<0.01),且缺氧培养下细胞半数抑制浓度(IC_(50))>常氧培养组。与空白组比较,仙连解毒方(1.25、2.5、5 g·L^(-1))组细胞线粒体膜电位明显下降、细胞凋亡增多(P<0.05,P<0.01)。与空白组比较,仙连解毒方(1.25、2.5、5 g·L^(-1))组细胞克隆数减少,EDU阳性细胞数减少(P<0.05,P<0.01)。Western blot结果示,与空白组比较,仙连解毒方(1.25、2.5、5 g·L^(-1))组细胞内Brd4、c-Myc蛋白表达量均有不同程度的下降,HEXIM1表达升高(P<0.05,P<0.01);磷酸化(p)-NF-κB p65、磷酸化NF-κB抑制蛋白α(p-IκBα)蛋白表达下调(P<0.05,P<0.01)。结论:缺氧微环境下仙连解毒方可抑制Brd4调控的结直肠癌细胞HT-29增殖,抑制NF-κB信号通路的激活可能是其机制之一。 展开更多
关键词 仙连解毒方 结直肠癌 缺氧微环境 细胞增殖 含溴结构域蛋白4(brd4) 核转录因子-κB(NF-κB)信号通路
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含溴结构域蛋白2在抗肿瘤免疫调控中的作用及机制研究
2
作者 张诚 李圆圆 +1 位作者 李爱玲 满江红 《军事医学》 CAS CSCD 2024年第5期355-361,共7页
目的研究含溴结构域蛋白2(BRD2)在抗肿瘤免疫调控中的作用及机制,探索新的免疫治疗靶点。方法利用REMBRANDT胶质瘤数据库分析、GlioVis和TIMER网站在线分析,比较BRD2在肿瘤组织与正常组织中表达水平的差异、BRD2的表达水平与多形性胶质... 目的研究含溴结构域蛋白2(BRD2)在抗肿瘤免疫调控中的作用及机制,探索新的免疫治疗靶点。方法利用REMBRANDT胶质瘤数据库分析、GlioVis和TIMER网站在线分析,比较BRD2在肿瘤组织与正常组织中表达水平的差异、BRD2的表达水平与多形性胶质母细胞瘤(GBM)患者预后的相关性,并比较其与GBM肿瘤中免疫细胞浸润的相关性。构建靶向BRD2基因的干涉质粒,包装慢病毒并感染小鼠胶质瘤细胞GL261,灭瘟素筛选感染阳性细胞6 d,Western印迹法检测BRD2蛋白表达水平。CellTiter-Glo试剂盒检测敲低BRD2后GL261的细胞活力。将敲低BRD2的GL261细胞移植入C57BL/6J小鼠皮下形成皮下肿瘤,定期测量肿瘤的体积,并在肿瘤接种后第28天将其取出并分离肿瘤细胞,利用流式细胞术和免疫组化的方法分析皮下瘤组织内CD8+T细胞的浸润情况。结果BRD2在多种肿瘤组织中高表达,高表达BRD2的胶质瘤患者的预后较差,且BRD2表达水平与肿瘤中CD8+T细胞浸润呈负相关。敲低BRD2后的GL261细胞形成的小鼠皮下移植瘤生长速度减慢,且皮下瘤组织内CD8+T细胞的浸润水平增加。结论BRD2高表达抑制GBM肿瘤组织内CD8+T细胞的浸润并促进肿瘤的生长。 展开更多
关键词 含溴结构域蛋白2(brd2) 抗肿瘤免疫调控 多形性胶质母细胞瘤(GBM) 细胞浸润
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BRD4抑制剂JQ1及miR-141对膀胱癌细胞增殖和凋亡的影响及其机制 被引量：3
3
作者 郭晓波 赵宇峰 +1 位作者 赵波 李岗 《中国老年学杂志》 CAS 北大核心 2022年第22期5621-5625,共5页
目的探讨溴结构域蛋白(BRD)4抑制剂JQ1及miR-141对膀胱癌细胞(RT-4)增殖和凋亡的影响和机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织中miR-141表达情况。用CCK-8法检测不同浓度BRD4抑制剂JQ1对RT-4细胞存活率... 目的探讨溴结构域蛋白(BRD)4抑制剂JQ1及miR-141对膀胱癌细胞(RT-4)增殖和凋亡的影响和机制。方法实时荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)检测膀胱癌组织、癌旁组织中miR-141表达情况。用CCK-8法检测不同浓度BRD4抑制剂JQ1对RT-4细胞存活率的影响,并计算IC50值。将RT-4细胞分为对照(Control)组(不做处理)、JQ1组(0.8000μmol/L JQ1)、anti-miR-141组(转染anti-miR-141)、JQ1+anti-miR-NC组(转染anti-miR-NC,0.8000μmol/L JQ1)、JQ1+anti-miR-141组(转染anti-miR-141,0.8000μmol/L JQ1)。CCK-8和集落形成实验检测RT-4细胞增殖能力,流式细胞术检测细胞凋亡,Western印迹法检测磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路相关蛋白表达。结果与癌旁组织比较,膀胱癌组织中miR-141呈显著高表达(P<0.05)。JQ1对RT-4细胞的IC50值为0.791μmol/L。与对照组比较,JQ1组、anti-miR-141组RT-4细胞活力、克隆形成数及p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著降低(P<0.05),凋亡率显著升高(P<0.05)。与JQ1+anti-miR-141组比较,anti-miR-141组、JQ1组、JQ1+anti-miR-NC组RT-4细胞活力、克隆形成数及p-PI3K、p-AKT蛋白水平显著升高(P<0.05),凋亡率显著降低(P<0.05)。结论BRD4抑制剂JQ1联合下调miR-141可抑制膀胱癌细胞增殖并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制PI3K/AKT通路有关。 展开更多
关键词 膀胱癌 miR-141 溴结构域蛋白(brd)4抑制剂JQ1 增殖 凋亡 磷脂酰肌醇-3激酶(PI3K)/蛋白激酶B(AKT)通路
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