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题名罗马洋甘菊吉马烯A合成酶基因的克隆与表达分析
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作者
闫佳萍
孟想想
朱丽
张威威
常杰
许锋
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机构
长江大学园艺园林学院
靶向抗肿瘤药物湖北省协同创新中心
荆楚理工学院化工与药学院
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出处
《中草药》
CAS
CSCD
北大核心
2017年第9期1851-1859,共9页
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基金
国家自然科学基金资助项目(31400603)
大学生创新创业训练计划项目(201207014)
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文摘
目的从罗马洋甘菊Chamaemelum nobile中克隆萜类化合物合成关键酶吉马烯A合成酶(germacrene A synthase,GAS)cDNA全长,并对其进行生物信息学和组织表达分析。方法基于前期对罗马洋甘菊转录组测序结果,设计特异性引物,利用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增得到GAS的cDNA全长,利用生物信息学手段对其核苷酸和编码的氨基酸序列进行分析,并预测其编码的蛋白质的理化性质和功能。通过实时定量PCR技术(qRT-PCR)检测罗马洋甘菊GAS基因(CnGAS)在罗马洋甘菊不同组织的表达水平。结果扩增得到的罗马洋甘菊吉马烯A合成酶基因的cDNA全长为1 785 bp,命名为CnGAS(GenBank登录号为KU589283),包含1个1 683 bp的开放阅读框(ORF),编码561个氨基酸,预测的相对分子质量和等电点分别为6 470和5.21。CnGAS基因编码的氨基酸序列与其他植物的GAS蛋白高度同源,且含有DDxx D保守序列。系统进化树表明CnGAS基因与菊科植物的GAS基因的亲缘关系最近。qRT-PCR结果显示CnGAS基因在罗马洋甘菊各组织中均有表达,且花中表达量最高。结论从罗马洋甘菊中克隆得到CnGAS基因,分析了该基因在不同组织中的表达水平,为罗马洋甘菊萜类化合物的生物合成代谢途径的研究奠定了基础。
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关键词
罗马洋甘菊
吉马烯A合成酶
基因克隆
生物信息学
基因表达
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Keywords
Chamaemelum nobile L.
germacrene A synthase
gene cloning
bioinformatics
gene expression
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分类号
R282.12
[医药卫生—中药学]
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