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肺动脉高压大鼠模型中PKM2 Neddylation修饰促进右心室纤维化的研究
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作者 郭文昀 王丽霞 王金琳 《医学分子生物学杂志》 CAS 2024年第2期108-114,共7页
目的探究PKM2拟素化(neddylation)修饰对肺动脉高压大鼠右心室纤维化的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组和MLN4924组,HE染色法检测肺动脉,Masson染色检测右心室纤维化程度。提取大鼠原代心脏成纤维细胞,免疫荧光法检测α-平滑... 目的探究PKM2拟素化(neddylation)修饰对肺动脉高压大鼠右心室纤维化的影响。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组和MLN4924组,HE染色法检测肺动脉,Masson染色检测右心室纤维化程度。提取大鼠原代心脏成纤维细胞,免疫荧光法检测α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)表达,使用si-NC、si-PKM2、pcDNA3.1-PKM2转染原代心脏成纤维细胞后,蛋白质免疫印迹法检测PKM2及纤维化相关Ⅰ型胶原蛋白(Collagen Ⅰ)、Ⅲ型胶原蛋白(Collagen Ⅲ)、基质金属蛋白酶2(MMP2)、基质金属蛋白酶9(MMP9)等蛋白水平。蛋白质免疫共沉淀法检测PKM2 neddylation修饰。实时荧光定量PCR法检测大鼠心脏组织中PKM2的mRNA表达水平。蛋白质免疫印迹法检测PKM2蛋白质降解时间。结果HE染色结果显示,模型组肺小动脉(纤维层)和内膜(内转运蛋白)之间的距离显著加宽,中间层的厚度增加,Masson染色显示,与对照组相比,模型组显示更多的胶原沉积,纤维化更严重的。模型组的PKM2蛋白表达水平高于对照组,而mRNA水平无显著性差异。PKM2在大鼠肺动脉高压模型中右心室组织存在neddylation修饰。在心脏成纤维细胞中敲低Nedd8或用MLN4924抑制neddylation修饰可下调PKM2及纤维化相关蛋白Collagen Ⅰ、Collagen Ⅲ、MMP2、MMP9等蛋白水平,促进PKM2蛋白质降解速率[(3.03±0.23)~(11.97±0.66)h,t=-12.82,P<0.001],过表达Nedd8则提高PKM2蛋白表达。MLN4924组大鼠右心室纤维化程度及α-SMA蛋白表达水平低于模型组。结论在肺动脉高压大鼠模型中,neddylation修饰增强了PKM2的蛋白质稳定性进而促进右心室纤维化过程。 展开更多
关键词 肺动脉高压 PKM2 拟素化修饰 右心室纤维化
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