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可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定
1
作者
袁栎
刘丽
+2 位作者
赵显玲
王烨
曹颖
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期299-302,共4页
将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养...
将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养上清 ,经CNBr活化的TNF Sepharose4B亲和层析柱纯化 ,纯化产物纯度为 92 % ;经Western印迹分析 ,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别 ,分子量约为 31kD ;受体配体结合试验 ,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同 ;中和试验显示 ,该shTNFR75可完全阻断TNF对L92 9细胞的细胞毒活性 .表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力 .
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关键词
可溶性
人
tnfr
75
表达
纯化
活性鉴定
肿瘤坏死因子受体
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职称材料
题名
可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定
1
作者
袁栎
刘丽
赵显玲
王烨
曹颖
机构
空军总医院空军分子生物学中心实验室
出处
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002年第3期299-302,共4页
文摘
将编码可溶性人TNFR75 (shTNFR75 )的cDNA与酵母整合载体pPICZαA重组 ,构建的重组质粒线性化后转染酵母细胞GS 115 ,获得了shTNFR75在酵母细胞中遗传性稳定表达酵母工程细胞 .甲醇诱导的pPICZαA shTNFR75 GS115重组酵母工程细胞培养上清 ,经CNBr活化的TNF Sepharose4B亲和层析柱纯化 ,纯化产物纯度为 92 % ;经Western印迹分析 ,可被TNFR75单克隆抗体特异性识别 ,分子量约为 31kD ;受体配体结合试验 ,shTNFR75纯化产物与rhTNFα和rhTNFβ的结合能力与其阳性对照基本相同 ;中和试验显示 ,该shTNFR75可完全阻断TNF对L92 9细胞的细胞毒活性 .表明酵母系统分泌表达的shTNFR75产物具有良好的结合TNF的能力 .
关键词
可溶性
人
tnfr
75
表达
纯化
活性鉴定
肿瘤坏死因子受体
Keywords
TNF recepter, expression, purification, activity
分类号
R392.1 [医药卫生—免疫学]
Q78 [医药卫生—基础医学]
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题名
作者
出处
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1
可溶性人TNFR75的表达、纯化及活性鉴定
袁栎
刘丽
赵显玲
王烨
曹颖
《中国生物化学与分子生物学报》
CAS
CSCD
北大核心
2002
0
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