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比格犬一种新雌激素β受体可变剪切体的克隆及鉴定 被引量：3
1
作者 任秀梅 赵彦斌 +6 位作者 孙兆增 许琴 白杰英 刘一 胡仲明 靳朝 曾林 《中国比较医学杂志》 CAS 2012年第7期36-39,共4页
目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序... 目的对比格犬雌激素β受体的新剪切体进行克隆与鉴定。方法以比格犬垂体组织为模板,用RT-PCR方法从垂体组织中扩增雌激素β受体,电泳确定新剪切体的存在情况.并对其进行克隆和序列测定.结果利用设计的引物得到2条明显电泳条带,通过测序表明其中一种为新的可变剪切体,目前此可变剪切体尚未见报道。结论得到了雌激素β受体的一种新的可变剪切体,有助于研究雌激素β受体可变剪切体的功能及其在生殖调控过程中的作用。 展开更多
关键词 比格犬 雌激素受体Β 基因克隆 可变剪切体
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獭兔MITF不同可变剪接体对黑色素沉积的影响 被引量：2
2
作者 卢婷婷 王曼曼 +5 位作者 陈实 申金钰 周彤 鲍国连 陈阳 吴信生 《西北农业学报》 CAS CSCD 北大核心 2020年第11期1625-1632,共8页
小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)在哺乳动物皮毛的黑色素形成中发挥了重要作用,而兔MITF基因功能及其不同可变剪接体对黑色素沉积的影响还未见报道。基于此,根据NCBI预测结合文献报道,设计M... 小眼畸形相关转录因子(microphthalmia-associated transcription factor,MITF)在哺乳动物皮毛的黑色素形成中发挥了重要作用,而兔MITF基因功能及其不同可变剪接体对黑色素沉积的影响还未见报道。基于此,根据NCBI预测结合文献报道,设计MITF编码区特异性引物,采用RT-PCR结合TA克隆测序的方法,鉴定兔MITF基因的6种可变剪接体:MITF X1、MITF X2、MITF X3、MITF X4、MITF X5和MITF X6。通过进化树分析,发现6个可变剪切体归为一个分支,与人和猩猩的进化距离最近。进一步构建MITF不同剪接体的过表达载体,转染到家兔黑色素细胞中,发现MITF蛋白亚细胞定位于细胞核中;通过荧光定量检测发现MITF X1~X4过表达显著增加GPNMB的mRNA表达量(P<0.05),MITF X1~X3过表达显著增加TYR的mRNA的表达量(P<0.05),MITF X2过表达显著增加PMEL-17的mRNA表达量(P<0.05),其余MITF剪接体的过表达对下游基因表达量的影响不显著(P>0.05);通过黑色素含量测定,发现MITF X1~X6剪接体显著增加黑色素细胞中总黑色素和真黑色素的含量(P<0.05),提示MITF N端的剪接变化并不影响黑色素沉积功能,但不同剪接体的下游信号通路存在差异。 展开更多
关键词 獭兔 MITF 可变剪切体 黑色素沉积
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藏鸡POU1F1基因可变剪切体相对表达量与生长性能的关联研究 被引量：2
3
作者 徐珑洋 梅寒 +3 位作者 王英明 王志敏 杨磊 徐亚欧 《西南农业学报》 CSCD 北大核心 2018年第2期415-422,共8页
【目的】为研究POU1F1基因3种剪切体在藏鸡不同的阶段中对藏鸡生长的影响。【方法】以藏鸡为研究对象,采用荧光定量技术,对POU1F1 3种剪接体在藏鸡的4个时期(81、119、154、210 d)垂体、腿肌和胸肌中的表达量进行检测,并与其生长性能进... 【目的】为研究POU1F1基因3种剪切体在藏鸡不同的阶段中对藏鸡生长的影响。【方法】以藏鸡为研究对象,采用荧光定量技术,对POU1F1 3种剪接体在藏鸡的4个时期(81、119、154、210 d)垂体、腿肌和胸肌中的表达量进行检测,并与其生长性能进行关联分析。【结果】POU1F1基因的3个剪接体在4个时期中均于119日龄时有一较高值,之后随日龄增加而降低;且表达水平POU1F1-β>POU1F1-α>POU1F1-ω;在垂体、胸肌和腿肌中,垂体中表达远高于其他2个组织;在垂体中,雌性的表达量高于雄性。藏鸡POU1F1-α的表达量与活体重、半净膛重、全净膛重和腿肌重4个指标呈显著相关,与屠体重呈极显著相关;119日龄时,POU1F1-α和POU1F1-ω均与活体重、屠体重、半净膛重和腿肌重呈显著相关;154日龄时,POU1F1-ω与参与分析的性状没有显著相关性。【结论】POU1F1基因的3种剪接体在119日龄之前对鸡的生长发育影响最为显著,POU1F1-α和POU1F1-β对藏鸡的生长发育均有显著影响,可作为影响生长发育的候选基因,对提高家畜生长速度,增加畜产品的产出能力提供理论基础。 展开更多
关键词 藏鸡 POU1F1基因 可变剪切体 荧光定量
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TMEM219基因可变剪切体相对表达量及其对鹿茸重量的影响
4
作者 赵佩 王磊 +2 位作者 王洪亮 邢秀梅 胡鹏飞 《中国畜牧兽医》 CAS 北大核心 2020年第7期2150-2158,共9页
试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及... 试验旨在研究TMEM219基因3种剪切体在不同重量鹿茸尖端的表达规律及TMEM219基因表达对鹿茸重量的影响,以期探究TMEM219基因对鹿茸生长发育的调控机理。利用实时荧光定量PCR技术对TMEM219基因及其3种剪切体在同一重量组鹿茸的不同组织及不同重量组鹿茸的同一组织mRNA的相对表达水平进行检测,同时测定并比较不同产茸量梅花鹿的血清中胰岛素生长因子1(IGF-1)和胰岛素样生长因子结合蛋白3(IGFBP-3)的浓度。结果表明,TMEM219基因的3种剪接体在梅花鹿鹿茸的间充质及前成软骨组织(RP)、过渡组织(TZ)及软骨组织(C)中均有表达,TMEM219-918基因相对表达量极显著高于TMEM219-1005与TMEM219-1960基因(P<0.01),TMEM219-1005与TMEM219-1960基因相对表达量无显著差异(P>0.05);高重量组TMEM219基因表达量显著高于低重量组(P<0.05);同时,高重量组个体血清中IGF-1浓度显著高于低重量组个体(P<0.05),而IGFBP-3浓度显著低于低重量组个体(P<0.05)。结果提示,TMEM219基因高表达可能会促进鹿茸的生长,增加鹿茸重量;推测其可能的机理是TMEM219竞争性结合IGFBP-3,减少与其结合的IGF-1,加强IGF-1与IGF-1R的亲和力,进而提高IGF-1对鹿茸生长的促进作用。TMEM219基因可能成为影响鹿茸生长发育的候选基因,为提高鹿茸生长提供理论基础。 展开更多
关键词 鹿茸 TMEM219基因 可变剪切体 荧光定量
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山羊TNNT3基因可变剪切及其对骨骼肌细胞分化的作用
5
作者 陈媛 蔡禾 +3 位作者 李利 王林杰 仲涛 张红平 《中国农业科学》 CAS CSCD 北大核心 2021年第20期4466-4477,共12页
【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin,Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达... 【目的】快速骨骼肌肌钙蛋白T(fast skeletal troponin T3,TNNT3)作为肌钙蛋白(troponin,Tn)家族成员,调节横纹肌收缩、参与骨骼肌的生长发育并影响家畜肉质性状。通过获得山羊TNNT3基因的可变剪切体,分析山羊TNNT3基因可变剪切的表达模式及其在肌细胞分化中的作用,深入解析TNNT3基因在山羊骨骼肌生长发育过程中的作用机制。【方法】基于NCBI已公布山羊TNNT3基因(NM_001314210.1)和牛TNNT3基因(XM_010821200)mRNA序列,使用软件Primer Premier 6.0设计引物,以简州大耳羊胚胎期和出生后7个阶段骨骼肌为试验材料,克隆测序获得山羊TNNT3基因的CDS区可变剪切体,利用软件ORF Finder、EditSeq、DNAMAN、ClustalW和MEGA_X_10.1.8等对序列进行生物信息学分析;进一步设计实时荧光定量(real-time PCR,RT-qPCR)及半定量引物,研究TNNT3基因剪切体在7个不同组织(背最长肌(longissimus dorsi muscle,LD)、半膜肌(semimembranosus muscle,SM)、心、肝、脾、肺、肾)和7个发育阶段(胚胎期E75、E90、E105和出生后B3、B45、B150、B300)肌肉组织(背最长肌和半膜肌)中表达模式;此外,对转录本TNNT3_3进行体外编码能力检测确定其具有编码蛋白的能力,并在山羊骨骼肌卫星细胞(skeletal muscle satellite cells,MuSCs)中过表达,观察细胞形态变化以及检测标志基因的表达变化,研究其对山羊MuSCs分化的作用。【结果】①TNNT3(NM_001314210.1)CDS区全序列主要含有18个外显子,其中外显子16/17相互排斥,转录后单一表达。克隆发现山羊TNNT3基因5个新转录本(TNNT3_1—5),其外显子数分别是15、15、20、16、14。②生物信息学分析结果显示山羊TNNT3基因核苷酸序列和氨基酸序列与绵羊、牛、猪等哺乳动物具有很高的一致性,而与鱼类和爬行类动物的一致性较低,说明TNNT3基因序列在哺乳动物高度保守。③TNNT3 mRNA在背最长肌、半膜肌、心、肝、脾、肺、肾7个组织中都有表达,其� 展开更多
关键词 山羊 TNNT3 可变剪切体 荧光定量PCR 体外转录翻译 蛋白免疫印迹杂交 肌原分化
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